[doc] 毛细管电泳法测定黄瓜和西红柿中的谷胱甘肽

[doc] 毛细管电泳法测定黄瓜和西红柿中的谷胱甘肽 毛细管电泳法测定黄瓜和西红柿中的谷胱 甘肽 2003年9月 September2003 色谱 ChineseJournalofChromatography Vo1.21No.5 510,512 毛细管电泳法测定黄瓜和西红柿中的谷胱甘肽 黄颖一,段建平3,杨明灿2,刘荔彬2,陈国南 (1.福州大学化学系,福建福州350002;2.福建师范大学化学系,福建福州350007; 3.福州大学中心实验室,福建福州350002) 摘要:在未涂层的石英毛细管中,以0.04tool/1.Na2HPO4—0.04mol/LNaH2PO4的混合体系(pH7.32)为运行缓冲 液,采用紫外 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 波长为200nlTl,建立了果蔬中谷胱甘肽(潮)的毛细管电泳测定 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 .结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明:GSH为3.07 -- 307rng/L肘具有良好的线性关系,相关系数r=0.9995;最低检测质量 浓度为1.54rag&.(S/N=3).利用该方 法对黄瓜及西红柿中的GSH进行了测定,在3个添加水平上进行加 标回收试验,结果GSH在西红柿中的加标回收 率分别为99.04%,94.96%和101.4%,相对 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 偏差(RSD)分别为 1.53%,3.78%和1.89%;GSH在黄瓜中的加 标回收率分别为91.25%,94.82%和99.35%,RSD分别为1.46%,3.47% 和4.00%.该方法具有快速,简便,灵 敏,重现性好等特点. 关键词:毛细管电泳;紫外检测;谷胱甘肽;西红柿;黄瓜 中图分类号:0658文献标识码:A文章编 号:1000—8713(2003)05—0510—03 DeterminationofGlutathioneinTomatoesandCucumbers byCapillaryElectrophoresis HUANGYing 一,DUANJianping3,YANGMingean2,LIULibin2,CHENGuonan (1.DepartmentofCkemistry,FuzlmuUniversity,Fuzhou350002,China; 2.DepartmentofOtemistry,FujianNormalUniversity,Fuzhou350007,China; 3.CentralLaboratory,FuzhouUniversity,Fuzhou350002,China) Abstract:Amethodforthedeterminationofglutathione(GSH)intomatoesandcucumbersbycapil— laryelectrophoresiswithUVdetection(200nlT1)wasdeveloped.Aftersimpl etreatmentoftheSalTI— ples,separationanddeterminationofGSHwasobtainedwithin7minbyusingthephosphatebuffer systemcontaining0.04mol/LNa2HPO4—0.04mol/LNaI-I21:~4(pH7.32) .Thequantitativeanalysis wasperformedwithexternalstandardundertheoptimalconditions.ThecalibrationcurveofGSH showedgoodlinearityintherangeof3.07, 307mg/Lwithr=0.9995,andthedetectionlimitwas 1.54mg/L(S/N=3).Forspikedtomatosampleswithstandardatthreelevels(9.219,12.29and 15.37mg/L),therecoverieswere99.04%,94.96%and101.4%,andtheRSDswere1.53%, 3.78%and1.89%,respectively.Forcucumbers,therecoverieswere91.25%,94.82%and 99.35%,andtheRSDswere1.46%,3.47%and4.O0%,respectively.Themethodhastheadvan— tagesofbeingsimple,convenientandsensitive.Themethodcanbeusedfortheroutineanalysisof GSHinfruitsandvegetablas. Keywords:capillaryelectrophoresis;UVdetection;glutathione;tomato;cucumber 谷胱甘肽是一种由谷氨酸,半胱氨酸,甘氨酸构 成的三肽化合物,在自然界以还原型(GSH)和氧化 型(GSSG)两种形式广泛存在于动植物和微生物体 内,其中还原型为其主要形式.GSH的分子式为 C10H1706SN3.谷胱甘肽参与多种代谓|过程,在动植 物体内表现出重要的生物学功能.例如,GSH具有 防止因巯基氧化而导致的蛋白质变性,消除自由基 和解除外源性有毒物质的毒性等功能,并参与氨基 酸的吸收与转运,蛋白质的合成以及胆酸,胆红素的 代谢等过程,因而在医学,食品,保健,防衰老等方面 均有重要作用.日本等国家已将其作为食品及保健 品的添加剂.谷胱甘肽常用的测定方法有:荧光分 收穰日期:2002—10—08 作者简介:黄颖,女.1963年生,副教授,硕士,Tel:(0591)7133518,E-mail:huang-ying@fzu.edu.cn. 通讯联系人:陈国南.教授,博士生导师.E—mail:gnchen@fzu.edu.cn. 基金项目:福建省自然科学基金资助项目(批准号:CO110007). 第5期黄颖等:毛细管电泳法测定黄瓜和西红柿中的谷胱甘肽?511? 析法…1,高效液相色谱法【,3l,电致化学发光法【, 分光光度法【5l,毛细管电泳法(CE)【6--9]等.食品中 的谷胱甘肽的测定常用化学法和酶法uJ,它们耗 时,繁琐;采用CE测定果蔬中的谷胱甘肽尚未见报 道.本文建立了黄瓜和西红柿中谷胱甘肽测定的实 验方法,结果表明该方法具有高效,快速,简便,重现 性好等特点,可用于其他果蔬样品的测定. 1实验部分 1.1仪器和试剂 BeckmanP/ACEMDQ毛细管电泳系统 (USA),32Karat色谱工作站;分离毛细管为未涂层 石英管(58cm(有效长度为48Cl’n)×50tami.d.,河 北永年光导纤维厂);PHS3C型精密酸度计(上海 大普仪器有限公司);KQ一100型超声波清洗器(昆 山市超声仪器有限公司). 谷胱甘肽标准品:G(潮和GSSG(纯度98%, 100%,美国Sigma公司);Na2I-IPO4?12HEO和 NaH2PO4?2H20( 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 纯,广东西陇化工厂);磺基水 杨酸(分析纯,上海试剂一厂);MilliQ超纯水(美国 Millipore公司). 1.2样品制备 精确称取洗净并已捣成匀浆的黄瓜和西红柿样 品分别为12.0g和10.0g,分别加入适量的磺基水 杨酸(按/n(样品):/n(磺基水杨酸)=200:1的比例 加入),用超纯水定容至25.0mL,再用微孔滤膜滤 得清液供实验用. 1.3分离分析 每天实验前分别用0.1mol/LNaOH,超纯水及 0.020 O.Ol5 三0.010 0.005 0.000 运行缓冲液冲洗毛细管5,5,10min.为了保证重 现性良好,每次进样间用运行缓冲液冲洗3min. 压力进样(3.45kPa×10s),分离电压25kV,以 0.04mol/LNa2I-IPO4—0.04tool/LNaH2PO4的混合 体系(pH7.32)为运行缓冲液,采用紫外检测器检 测,检测波长为200nrn. 1.4工作曲线的绘制 分别配制质量浓度为3.07,15.4,30.7,154和 307mg/L的GSH标准溶液,在最佳条件下进行电 泳分析.以GSH标准溶液的质量浓度为横坐标,以 峰面积为纵坐标,绘制标准工作曲线. 2结果与讨论 2.1CE条件的优化 分别以磷酸盐,柠檬酸盐,硼酸盐(浓度为0.04 mol/L,pH7.32)为运行缓冲液,比较了它们对测试 灵敏度的影响.结果表明,采用磷酸盐缓冲液时基 线较为平直,背景噪声最小.因此,本实验选择 0.04tool/LNazHPO4—0.04tool/LNaI-I2PO4(pH 7.32)溶液为运行缓冲液. 在选择分离电压时,较高的分离电压可以使 GSH的迁移时间缩短,但电压太高将导致焦耳热效 应.通过研究电流(J)一电压(V)曲线发现,当电压 高于25kV时,曲线偏离线性,故本实验选择 25kV为分离电压. 通过比较GSH在不同pH的磷酸盐缓冲液中 的迁移行为,发现当pH为7.32时,峰形较为对称. 在上述条件下,样品中的GSH得以与GSSG及 其他组分分离,结果见图1. . b I,GSH.—————J Ol234567 r,rain 图1GSH标准品及样品的毛细管电泳图 Fig.1CapillaryeleetropherogramsofGSHstandardandsampIes a.tomato;b.cucumber;C.GSHstandard. 2.2样品的预处理 由于GSH具有较强的还原性,故微量的GSH 在空气中易被氧化成氧化型谷胱甘肽(GSSG),尤其 在中性和碱性的介质中更是如此.我们在实验中发 现,在酸性(pH3.0,4.0)介质中,GSH氧化成 GSSG的速度非常缓慢,因此GSH能比较稳定地存 在.捣碎后的黄瓜和西红柿样品经稀释,定容,其 pH值约为5左右,经测试可知GSH的峰面积随时 ? 512?色谱第21卷 间的增加呈明显的下降趋势.加入磺基水杨酸使其 pH为3.0,4.0,可有效地防止GSH的氧化.样品 5次平行测定的相对标准偏差(RSD)不大于3%. 2.3GSH的工作曲线和线性范围 谷胱甘肽的质量浓度为3.07--307mg/L时,其 峰面积A与其质量浓度C(mg/L)呈线性关系,其 回归方程为A=224.48C一56.85,相关系数r= 0.9995. 2.4方法的准确度 分别取黄瓜和西红柿为12.0g和10.0g,加入 一 定量的GSH标准液,按样品的预处理方法进行处 理,用毛细管区带电泳分析,计算加标回收率,实验 结果见表1.由表1可看出,用本法测定西红柿和 黄瓜中的GSH,其加标回收率分别为94.96%, 101.4%和91.25%,99.35%. 表1回收率测定结果(=3l 1蚍1Determi~tionresldtsofGSHrecovery(:3l 2.5方法的精密度 分别取西红柿和黄瓜样品,按上述方法各平行 测定5次,测得西红柿中的谷胱甘肽平均含量为 50.82旭/g,RSD为1.77%;黄瓜中的谷胱甘肽平 均含量为41.29/g,RSD为2.89%.上述结果表 明,该方法用于测定果蔬中的GSH,具有良好的重 现性,符合食品中微量(分析的要求. 2.6方法的最低检测限 在上述最佳条件下,产生3倍噪声信号所需要 的物质浓度为该物质的最低检出限(LOD).结果 GSH和GSxSG的LOD均为1.54mg/L. 2.7样品中GSSG的含量 经测定,黄瓜和西红柿样品中的含量低 于方法的检测限,故在上述实验条件下未检出. 参考文献: [1]CaoXinzhi,ChenYan.ResourceDevelopment&Market,2000, 16(5):272 曹新志,陈彦.资源开发与市场,2000,16(5):272 l2]CaoXinzhi,WeiMing.FoodScience,1998,19(4):52 曹新志,魏明.食品科学,1998,19(4):52 [3]ChengJingjun,KuangPeigen,ZhangFengying,WuWeiping. ChineseJournalofChromatography,1998,16(2):167 程敬君,匡培根,张凤英,吴卫平.色谱,1998,16(2):167 l4JWangJian,ChiYUWU,ChertXi,ChenGuonan.Journalof FuzhouUniversity(NaturalScienceEdition),1999,27(Supp1): 62 王建,池毓务,陈曦,陈国南.福州大学(自然科学 版),1999,27(增刊):62 l5JYouWenwei,LiuYan,WangZunben.JournalofFuzhouUni— versity(NaturalScienceEdition),1999.27(Supp1):242 游文玮,刘彦,王尊本.福州大学(自然科学版), 1999,27(增刊):242 [6]XuZhili,DengZhaoyong,YangZhongyum1.JournalofChina PharmaceuticalUniversity,1998,29(1):49 徐志利,邓兆勇,杨仲元.中国药科大学,1998,29(1): 49 [7]HuangYing,DuanJianping,(;henHongqing,ChenGuonan ChineseJournalofAnalysisLaboratory,2001,20(Supp1):107 黄颖,段建平,陈红青,陈国南.分析实验室,2001,20(增 刊):107 [8]JinWenrui,LiWei,XuQiang.Electrophomsis,2000,21(4): 774 l9]OweO,HarveyAF,NoamEZ,RichardHS.RichardNZ. AnalChem,1995,67:4261