大肠杆菌蛋白提取液 Cat.No.: C2301 Size: 50 ml
描述：海基生产的大肠杆菌蛋白提取液采用独特的中性裂解配方，从而最大限度的提高了后续提取蛋白的活性。使用该溶液从大肠杆菌中提取蛋白不需要超声波破碎等复杂的操作步骤，溶液置于4°C可长期保存，使用方便。该溶液室温30min可破碎95％以上的细胞，裂解后的溶液可直接通过Ni-NTA等纯化填料进行蛋白纯化。该溶液既可适用于小量蛋白表达检测，也适用于大量蛋白的表达纯化试验；既适用于纯化可溶型蛋白，也适用于纯化包涵体蛋白。
主要特征
l 单组分溶液，使用方便
l 裂解迅速，蛋白不会变性
l 适用于小量或大规模蛋白表达
l 适用于可溶性蛋白和包涵体纯化
应用：大肠杆菌的裂解和包涵体纯化。
储存：置于4°C可保存2年。
操作方法
l 可溶型蛋白操作方法（1 ml菌液为例）
1. 8,000rpm室温离心3min后，弃上层培养基，留取管底部菌体（尽量弃除掉培养基）。
2. 加入200 μl（重悬体积不得少于50 μl）大肠杆菌蛋白提取液重悬菌体，用吸头吹打至无可见细胞团块。
注：为降低溶液粘度，可加入Benzonase核酸内切酶至0.25 U/μL；加入终浓度为1 mg/ml的溶菌酶效果更佳。
3. 置于室温孵育30-60min，期间轻弹离心管数次以加速裂解。
4. 裂解完成后13,000rpm于4℃离心15-20min，将上清转移至新的容器中，溶液可直接进行下一步纯化或检测试验。
l 包涵体蛋白操作方法
5. 上述步骤4中，弃上清，保留沉淀组分，用200 μl的大肠杆菌蛋白提取液重悬沉淀。
大肠杆菌 Cat.No..C
6. 加入溶菌酶至终浓度1 KU/ml，混合均匀，室温孵育10 min。
7. 加入800 μl的灭菌水混合均匀。
8. 13,000 rpm室温离心15-20min，弃上清后用900 μl灭菌水重悬沉淀，然后加入200 μl 大肠杆菌蛋白提取液，混合均匀。
9. 13,000rpm室温离心15-20min，重复步骤8三至五次。
10. 将沉淀溶解于变性溶液中，进行下一步纯化或复性试验。
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