培养
记录
混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载
表
关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf
原代培养的数据记录
日期: 时间: 操作者:
组织来源 种类 记录 动物 种系
年龄
性别
组织
部位
分离试剂 胰酶、胶原酶等
浓度
时间
溶剂
细胞计数 重悬后细胞浓度(c)
体积(v)
产量(v x c)
每克湿重组织的产量
接种 数量(N)容器类型
终浓度
每个瓶，皿，板体积 培养基 类型
批号
血清类型及浓度
其他添加物
CO2浓度
换液记录
日期 时间 操作者 细胞系 命名
代数或传代数
情况 生长周期时相
细胞外观
细胞密度
培养基ph(大约)
培养基透明度
培养基 类型
批号
血清类型和浓度
批号
其他添加剂
CO2浓度
再接种
日期 时间 操作者 细胞系 命名
代数或传代数
传代前情况 生长周期时相
细胞密度
培养基ph
培养基透明度
解离剂 预洗
胰酶
EDTA
其他
机械
细胞计数 悬浮后浓度(c)
体积(v)
产量(Y=c x v)
每一培养瓶产量
接种 数量(N)和容器类型
最终浓度
每培养瓶、培养皿或培养板体
积
传代比率{Y/(c Xv XN)}
培养基/血清 类型
批号
血清类型和浓度
批号
其他添加剂
CO2浓度
(三)、污染的清除
? 培养细胞一经污染，多数较难处理。如果污染细胞价值不大，宜弃之;在寻找原因后彻底消毒操作室，复苏或重新购置细胞，再培养。
?若污染细胞价值较大，又难于重新得到，可采取以下办法清除。
一、细菌和真菌的清除
?1、使用抗生素
?抗生素对杀灭细菌较有效。联合用药比单独用药效果好。预防用药比污染后再用药效果好。
10倍的冲洗法，于加药?预防用药一般用双抗生素，污染后清除用药需采用大于常用量5,
后作用24,48小时，再换常规培养液。此法在污染早期有效。。所用抗生素品种除青霉素、链霉素外，还可用庆大霉素、卡那霉素、多粘菌素、四环素、制霉菌素等。常用400,800μg/mL卡那霉素或200μg/mL四环素处理，每隔2,3日换液1次，传1,2代进行治疗。近年来有报道，4-氟，2-羟基喹啉(Ciprofloxacin,Cip)、截耳素衍生物(Pleu-romutilinderivative, BM-Cyclin2:BM-1和四环素衍生物(BM-2)等三种抗生素单用或合用对杀灭支原体有效。
(二)、支原体的清除
?,、用MRA处理
?用MRA(Mycoplasma Removal Agent)处理细胞，每4天换一次液,连续处理15天以确保细胞纯洁健康(
?效果好(
?2、用清洗纯化法清除支原体污染的方法
细胞清洗?反复离心洗涤 ?细胞营养驯化?优质细胞群的筛选?
?其原理是利用离心力、细胞、微生物质量和悬液的浮力差达到清除支原体的目的。由于支原体个体小且除发酵支原体外多为细胞外寄生,所以通过反复洗涤细胞和低速离心换液使其中潜在的支原体数量降低至极限.
?如结合敏感抗生素的抑杀作用，可达到更好的效果。
?3、药物辅助加温处理
?先用药物处理后，再将污染的组织培养物放在41?培养18小时，可杀死支原体，但对细胞有不良影响。
,、使用支原体特异性血清
?用5%的兔支原体免疫血清可去除支原体污染，因特异抗体可抑制支原体生长，故经抗血清处理后11天即转为阴性，并且5个月后仍为阴性。
?但此法比较麻烦，不如用抗生素方便、经济。
(四)、污染的预防
?预防是防止细胞培养过程中发生污染的最好办法。只有预防工作做在前，才能将发生污染的可能性降到最小程度。
?一般预防可从以下几方面着手:
1、添加抗生素
2、从物品、用品消毒灭菌着手
?细胞培养所用物品清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌除菌要仔细，并在无菌试验阴性后才能使用。
?操作室及剩余的无菌器材要定期清洁消毒灭菌。
3、从操作者做起
?(1)进无菌室前要用肥皂洗手，按
规定
关于下班后关闭电源的规定党章中关于入党时间的规定公务员考核规定下载规定办法文件下载宁波关于闷顶的规定
穿隔离衣。工作开始要先用75%酒精棉球擦手、
擦瓶口和烧灼瓶口。
?(2)操作者动作要轻，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，并将瓶口转动烧灼。操作时尽量不要谈话，若打喷嚏或咳嗽应转向背面。
?(3)操作时要常更换吸管，一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去。实验完毕用消毒水浸泡的纱布擦台面。
4、防止细胞交叉污染
?在进行多种细胞培养操作时，所用器具要严格区分。
?在进行换液或传代操作时，注射器和滴管不要触及细胞培养瓶瓶口，以免把细胞带到培养液中污染其他细胞。
?细胞一旦购置或从别处引入，均应及早留种冻存，一旦发生污染可重新复苏培养。 ,、无菌室的彻底消毒
?1) 0.1%新洁尔灭全面彻底擦洗无菌室;
?2)甲醛熏蒸法:甲醛是一种广谱灭菌剂菌，其水溶液和气休对各种细菌、芽孢及真菌等微生物均有杀灭作用。
Invitrogen细胞培养污染策略:
如果无法替换的培养物受到污染，研究人员可以尝试消除或控制污染。首先应确定污1，
染物是细菌，真菌，支原体或是酵母。将受污染的培养物与其他细胞系隔离，使用实
验室消毒剂清洗培养箱和层流通风处。并检查HEPA滤器。
2， 高浓度的抗生素和抗真菌剂会对一些细胞系产生毒性，因此应进行剂量效应试验，确
定抗生素或抗真菌剂产生你毒性的剂量水平。以下为建议操作程序:
(1)，解离和计数细胞，用无抗生素培养基稀释细胞。浆细胞稀释到常规细胞传代用
的浓度。将细胞悬液移入多孔培养板或者数只小培养瓶中。将所选的抗生素以一系列
的浓度分别加入各个孔或培养瓶中。
(2)每天观察细胞是否出现中毒征象如脱落，出现空泡，融合度降低和细胞变圆。
(3)确定抗生素的毒性水平后，以此浓度的三分之一或二分之一为抗生素使用浓度，
进行2到3代的细胞培养。
(4)将细胞在无抗生素的培养基中培养一代，重复第三步，
(5)将细胞在无抗生素培养基中培养4至6代，以确定污染是否已经消除。 3，抗生素建议使用的浓度如下:
Fungizone(两性霉素B) 0.25-2.5μg/ml, 针对于真菌及酵母 37?培养基中可以维持3天稳定性。
硫酸庆大霉素 5-50μg/ml G+,G- 支原体 稳定5天
硫酸卡那霉素 100μg/ml G+, G-,支原体 5天稳定
青霉素 50-100单位/ml G+ 3天稳定
硫酸链霉素 50-100μg/ml G+,G- 3天稳定
浙公网安备 33021202002483