双抗体夹心ELISA法检测样本中IL-6的浓度人IL-6简介：白介素6(IL-6)是一类多功能的蛋白，在宿主防御，急性期反应，免疫反应，造血功能，神经系统等方面起到重要的作用。白介素6根据来源不同是分子量从21到28kDa不同的单链蛋白。白介素6在多种细胞中都有表达，如T细胞、巨噬细胞、纤维原细胞、肝细胞、血管内皮细胞等。由于IL-6具有不同的活性，所以IL-6也被称为干扰素02(IFN-02)、B细胞刺激因子-2(BSF-2)、杂交瘤细胞生长因子、肝细胞刺激因子、毒性T细胞分化因子、巨噬细胞粒细胞诱导因子(MGI-2A)。白细胞介素6在B-细胞向Ig分泌细胞的转化过程起到重要的作用，参与了淋巴细胞和单核细胞的分化，诱导神经细胞在B-细胞，T-细胞，肝细胞，造血干细胞以及中枢神经系统的分化作用。此外，肌肉运动收缩作用后白细胞介素6会被释放到血液中，进而能促进脂肪的分解并改善机体的胰岛素耐受性。检测原理：本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中IL-6的浓度。IL-6捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的IL-6会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗人IL-6抗体后，抗人IL-6抗体与IL-6接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂，若样本中存在IL-6将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，IL-6浓度与OD50值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中IL-6浓度。标本收集：1.标本的收集请按下列流程进行操作：A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可；B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；C.血浆标本，推荐用EDTA勺方法收集；D.若待测样本不能及时检测，标本收集后请分装，冻存于-20C,避免反复冻融。.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂；.标本应清澈透明，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除；.请勿使用溶血，高血脂或污染的标本检测，否则结果不准确。注：正常人血清或血浆样本请用标本缓冲液做倍比稀释后再检测。注意事项：.试剂盒请保存在2〜8C。.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。.若标准品复溶后，请在三天内用完。.底物请勿接触氧化剂和金属。.加样时，请及时更换枪头，避免交叉污染。.严禁混用不同批号的试剂盒组份。.充分混匀对保证反应结果的准性很重要，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀。.室温反应，请严格控制在25〜28Co.洗涤过程是至关重要的，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔。.加样过程中避免气泡的产生。.血清和血浆标本的检测时，检测抗体的孵育时间应适当延长。检测前准备工作：.试剂盒自冰箱中取出后应置室温平衡20分钟；每次检测后剩余试剂请及时于2〜8c保存。.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释（1份加19份水）。.标准品：加入去离子水0.25ml至冻干标准品瓶中使IL-6终浓度达到600pg/ml,静置15分钟后轻轻混悬待彻底溶解，用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。（标准曲线取七个点，最高浓度为600pg/ml,标准品稀释液直接加入作为0浓度.）洗涤方法：自动洗板机或人工洗板：每孔洗涤液为300ul,注入与吸出间隔15-30秒。洗板5次。最后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干。实验过程需自备的材料：.不同规格的加样枪及相应的枪头；2.酶标仪；3.自动洗板机；4.去离子水或双蒸水；操作步骤：.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封，保存于4C。.建议设置本底较正孔，即空白孔，设置方法为该孔只加TM电色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。.分别将标本或不同浓度标准品（100ul/孔）加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔，室温孵育120分钟。对于血清或血浆标本，请加入50ul样本
分析
定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析
缓冲液后加50ul标本，如稀释量大，请将样本与样本分析缓冲液等量加入，不足部分用标准品稀释液补充至100ul。.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。.加入生物素化抗体工作液（100ul/孔）。用封板胶纸封住反应孔，室温孵育60分钟。.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。.加入酶结合物工作液（100ul/孔）。用封板胶纸封住反应孔，避光室温孵育20分钟。.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。加入显色剂TMB100ul/孔，避光室温孵育20分钟。.加入终止液50ul/孔，混匀后即刻测量OD50值。结果判断：.复孔的值在20%勺差异范围内结果才有效，复孔的值平均后可作为测量值。.每个标准品或标本的OD直应减去本底校正孔的OD直。.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD直作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD直可在标准曲线上查出其浓度。.若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
浙公网安备 33021202002483