人用重组DNA蛋白制品总论

中国药典2015年版人用重组DNA蛋白制品总论件等信息，并提供库存细胞稳定性的证据.2.2.3细胞库的质量控制人用重组蛋白制品总论DNA应对主细胞庳的表型和基因型标记进行鉴定。应采用分子生物学或其他适合的技术对表达载体基因拷贝数、1概述基因插人或缺失、整合位点数量等情况进行 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 。核苷人用重组DMA蛋白制品是采用重组DNA技术，对酸序列应与表迖载体一致，并与所预期的表达蛋&质的编码所®蛋白质的基因进行遗传修饰，利用质粒或病毒载序列吻合。体将目的基因导入适当的宿主细胞，表达并翻译成蛋白应对细胞库进行支原体、外源病毒因子等相关微生物质，经过提取和纯化等步骤制备而成的具有生物学活性的污染的检测，并确认细胞基质没有被污染。已知携带内源蛋白质制品，用于疾病的预防和治疗。逆转录病毒的啮齿类细胞株，如CHO细胞等，已广泛用本总论是对治疗用人用重组DNA蛋白制品生产和质于生产时，应采取风险控制策略，在工艺中采用物理、化量控制的通用性技术要求，具体品种还ft符合本版葯典各学等手段对其进行去除/灭活。：论的要求u主细胞库应进行全面检定*并符合要求；工作细胞库2制造可根据主细胞库的检定情况确定应检定的项目，并符合2.1基本要求要求。2.2,4人用童组:DNA蜜白制品的制造主要包括工程细胞的细胞基质的遗传稳定性制备、发酵或细胞培养，目的蛋白质的提取和纯化、制剂应评估细胞基质的稳定性。应基于宿主细胞经长时间等过程。工程细胞的来源、管理及检定应符合“生物制品培养后表达产物分子的完整性，以及细胞基质表型和基因生产检定用菌毒种管理 规程 煤矿测量规程下载煤矿测量规程下载配电网检修规程下载地籍调查规程pdf稳定性研究规程下载 ”和“生物制品生产检定用动型特征的综合情况，确定生产用细胞的最高限定代次。物细胞基质制备及检定规程”的相关要求。生产过程中使长期发酵的多次收获物会导致一些质量属性的漂移，用的原材料和辅料应符合相关要求。应采用经过验证的生例如糖基化等。出现的“新”的变体可能会影响制品的质产工艺进行生产，并对生产工艺全过程进行控制。量、安全和有效性。这类漂移应在工艺验证的研究中充分2.2工程细胞的控制鉴定并明确控制策略。应建立细胞种子、主细胞库及工作细胞库。一般情况2.3生产过程的控制下主细胞庳来自细胞种子，工作细胞库来自主细胞库。主生产工艺应稳定可控，并有明确的过程控制参数，以细胞库和工作细胞库均盧有详细的制备过程、检定情况及确保制品安全有效、质量可控。生产工艺的确定应建立在管理规定，并应符合“生物制品生产检定用动物细胞基质对目标制品的质量属性、生产工艺的深入理解和全面设计制备及检定规程”的相关要求。的基础上。应根据研发早期到规模化生产的整个工艺周期2.2.1表迪载体和宿主细胞的相关信息，确定原液和成品生产的关键步骤并制定可接应描述宿主细胞和表达载体的起源、来源、遗传背受 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 进行控制，同时对其他确保工艺一致性的环节进行景，包括克隆基因的来源和特性、构建和鉴别情况，以及控制。适当的工艺过程控制能够减少对原液和（或）成品表达载体遗传特性和结枸等详细资料，同时应说明表达载常规检测的需求。体来源和各部分的功能。2.3.1细胞培养应详细推述表达载体扩增、对宿主细胞的转化方应对生产过程中使用的各种原材料进行质量控制，以法、生产用细胞克隆的筛选标准及其在宿主细胞中的保证这些原材料符合既定用途质量标准的要求。位置、物理状态和遗传稳定性资料。应明确克隆基因、2.3.1.1有限传代水平的生产表达载体控制区及其两侧、与表达或产品质量相关的应限定生产过程中表达载体细菌或细胞传代（或细胞核苷酸序列，以及在生产过程中控制、提高表达水平群体倍增）的最高次数，最高限定代次的确定应基于细胞的各种措施。表型、基因型特性及其所表达基因的分子完整性、一致2.2.2细胞库系统性，以及生产末期宿主细胞/载体的一致性研究，如质粒通常包括主细胞库和工作细胞库s主细胞库是由含目拷贝数及其在宿主细胞内的状态，证明上述特征的试验所的基因表达载体转化的细胞种子经传代扩增制成的均一悬涉及的传代范围应等于或超过规定的细胞最高限定代次。液，分装于单独容器中用于贮存。工作细胞库是从主细胞应根据生产过程中培养、增殖和表达量一致性的研究库经有限传代扩增制成的均一悬液，并分装于单独容器中资料，确定终止培养、废弃培养物以及摒弃收获物的技术用于贮存。所有的贮藏容器应在相同条件下妥善保管，一参数。旦取出使用，不得再返回库内保存。2,3*1.2连续培养生产应详细 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 细胞库类型、容量、预期使用频率下的寿采用细胞连续培养生产时应根据系统特点和稳定性以命、保存容器、冻存剂、培养基、冷冻保存步骤和贮存条及培养期间产品一致性的研究资料，确定连续培养的最长•37•人用重组DNA蛋白制品总论中国药典2015年版周期以及培养周期全过程的监测要求，包括生产过程中制性和有效性无负面影响。品变异体或其他培养参数未超过标准限度的数据。应对收3质量控制获阶段的微生物污染进行常规检测，收获物后续加工中批人用重组DNA蛋白制品的质量控制与分子大小、结次的确定应清晰并易于追溯。构特征、质量属性复杂程度以及生产工艺相关。质量控制应裉据宿主载体系统的稳定性和制品特性等确定对细体系主要包括原、辅料质量控制，生产工艺和过程控制及胞、制品进行再评估的时间间隔。制品检定等。应通过终产品检测、过程控制和工艺验证结2,3.2提取和纯化合的方法，确保各类杂质已去除或降低至可接受水平。制制品的提取、纯化主要依赖于各种蛋白质分离技术。品质量控制包括采用参比品和经验证的方法评估已知和采用的分离纯化方法或技术，应能适用于规模化生产并保(或）潜在制品相关物质和工艺相关物质，以及采用适宜持稳定。应对纯化工艺中可能残存的有害物质进行严格检的方法对制品鉴别、生物学活性、纯度和杂质等检测进行测，这些组分包括固定相或者流动相中的化学试剂、各类分析。亲和色谱柱的脱落抗体或配基以及可能对目标制品关键质3.1特性分析量属性造成影响的各种物质等。研发阶段以物理、化学和生物学方法对重组DNA蛋采用细胞培养或酵母等真核表达系统时，其蛋白质产白制品的理化特性、生物学活性、免疫学特性、纯度和物多为分泌性蛋白质，通常只需去除细胞或酵母即可初步杂质等进行严格的特性分析鉴定是确保产品安全有效，获得较高纯度的目的蛋白；采用大肠杆菌等原核表达系统建立并确定制品质量标准的基础。需采用广泛的分析技时，菌体製解后应尽快进行蛋白质纯化。术来展示目标分子的理化拄质（分子大小、电荷、等电纯化工艺应保证对制品中的一些特定工艺杂质，包括点、氨基酸组成、疏水性等），以及对糠基化等各种翻译来自表达载体的核酸、宿主细胞蛋白质、病毒等外源因子后修饰进行充分鉴定，并纳入适当的检测，以确认制品污染，细菌内毒素以及源自培养液的各种其他残留物，必具有预期的构象、聚集和（或）降解状态及其高级结构。要时可釆用特定的工艺将其去除或降低至可接受的水平。必要时，应采用新型分析技术用于特性分析。特性分析生产工艺的优化应考虑残留宿主DNA片段的大小、至少应包括以下范畴：残留量和对生物活性的影响。应采用适宜的方式将残留宿3.1.1理化特性主DNA总量降至可接受的水平，并就降低残留宿主DNA3.L1.1一级结枸片段的大小或者灭活DNA活性的方式进行说明。一级结构，即包括二硫键连接方式的氨基酸序列。应对于人和动物源的细胞基质，病毒去除/灭活工艺均尽可能采用综合的方法测定目标制品的氯基酸序列，并与应充分显示能去除/灭活任何可能污染的病毒，确保原液其基因序列推断的理论氨基酸序列进行比较。的安全性。灭活工艺应经验证并符合要求。氨基酸序列测定还应考虑可能存在的N端甲硫氯酸2.3.3原液(如大肠杆菌来源的制品），信号肽或前导序列和其他可能收获液经提取、纯化分装于中间贮存容器中即为原的N端、C端修饰（如乙酰化、酰胺化或者由于外肱酶导液^如需加人稳定剂或赋形剂，应不影响质量检定，否则致的部分降解以及C端加工、N端焦谷氯酸等），以及各应在添加辅料前取样进行原液检定。原液的检测项目取决种其他异质性（如脱酰胺化、氧化、异构化、碎片化、二于工艺的验证、一致性的确认和预期产品相关杂质与工艺硫键错配、N-连接和O■连接的寡糖、糖基化、聚集等）。相关杂质的水平。应采用适当方法对原液质量进行检测，3.1.1.2糖基化修饰必要时应与参比品进行比较。原液贮存应通过稳定性验证应对糖基化修饰进行全面的分析和确定，如糖基化修确定贮存条件和时间。饰与制品半衰期和生物学活性相关，则应确定糠的含量'2.3.4半成品(如中性糖、氯基糠和唾液酸）。糠型结构可能与不良反应除另有规定外，制备成品前，如需对原液进行稀释或相关（如非人类的糖型结构或其残基），应尽可能对糖链加入其他辅料制成半成品，应确定半成品的质量控制要的结构、糖型以及多肽链的糖基化位点进行深人分析。必求，包括检定项目和可接受的标准。要时应进一步就电荷异质性进行检测分析。2.3.5成品制剂3.1.1.3高级结构制剂生产应符合本版药典和中国现行《药品生产质量应通过适合的理化方法分析髙级结构，并且通过生物管理 规范 编程规范下载gsp规范下载钢格栅规范下载警徽规范下载建设厅规范下载 》的相关要求d学功能来确认。生物学活性是对高级结枸的确证，也可采2.4生产工艺变更用体外或体内证实其治疗功能的活性分析方法，作为高级生产工艺变更应符合国家药品注册管理等相关要求。结构确证的补充。涉及重大生产工艺的变更，应对变更前后的制品质量、安聚乙二醇修饰蛋内质的分析不仅限于平均修饰率，还全性和有效性进行比较和评估，以证明变更前后制品特性应包括修饰位点等分析。.的髙度相似，并确保任何质量属性方面的改变对制品安全3.1.2生物学活性•38•中国药典2015年版人用重组DNA蛋白制品总论生物学活性测定应基于制品实现确定的生物学效应的如果偏差太大，应考虑采用其他方法重新测定。特定能力或潜力。可采用体外或体内方法或生物化学（包3.1.6参比品括免疫化学试验）方法和（或）适宜的物理化学分析方法应选择已证明足够稳定且适合犒床试验的一个（多进行评估，如效价测定（以单位或国际单位表示）和个）批次，或用一个代表批次作为参比品，用于鉴别、理(或）含量（以质量/重量表示）测定。化和生物学活性等各种分析，并应按特性分析要求进行全3.1.3免疫化学特性面分析鉴定。参比品的建立和制备可参照“生物制品国家需全面说明制品的相关免疫学特性。应采用纯化的抗标准物质制备和标定规程”的相关要求。原和抗原确定的K域进行结合实验测定免疫学特性。必要用于理化测定等方面的对照品，如用于肽图或等电点时应确定亲和力和兔疫反应性（包括与其类似结构蛋白测定的对照品，可用原液直接分装制得，一般一70°C以下的交叉反应性）。应对目标分子中与相应表位作用的部分保存。根据重组DNA蛋白制品特性应对对照品进行必要进行分析确证，包括对这些结构的生物化学鉴别（如蛋白的分析鉴定，包括：蛋白质含量、fciS活性、等电点、纯质、低聚糖、糠蛋白、糠脂）和相关适合的特征研究（如度、N端氨基酸序列、质谱分子量、液质肽图、二硫键分氨基酸序列和糠型）。析、糖基分析（真核表达）等。糖基化和聚乙二醇化可能影响制品的葯理学性质和免3.2制品检定-疫原性，应进行适当的特性研究。应根据制品特性确定制品捡定中需要进行的特性分析3.1.4纯度、杂质和污染物检测项目。建立或验证制品生产过程的有效性或可接受性生物技术制品杂质主要包括制品相关杂质、工艺相关的特性分析检测项目可不纳入常规质量控制中，但应对某杂质以及外源污染物应尽可能地对杂质进行分析鉴定，一特定质量厲性是否放入常规放行标准予以说明。并采用适宜的方法评价其对生物学活性的影响。应根据一定数量的连续批次分析数据确定的批内和批3.1.4.1制品相关物质/杂质间一致性分析数据，综合临床和非临床研究，以及稳定性制品相关物质/杂质主要源于生物技术制品异质性和评价数据建立制品的质量标准，包括各种分析方法及具体降解产物。末端氨基酸异质性、电荷异质性、分子大小变数值限度、可接受标准范围，以保证原液、成品或原材料异体以及包括糖基化在内的各类翻译后修饰等异质性（如在其生产的各阶段符合其预期的质量要求。可接受标准的C端加工，N端焦谷氨酸化，脱酰胺化，氧化，异构化，范围确定应该考虑到所使用的分析方法的灵敏度。常规放片段化，二硫键错配，N-连接和连接的寡糠，糠基化，行质量控制至少应包括以下方面：聚集）可能导致其组成中存在几种分子或变异体，应对目3.2.1鉴别标制品的各种分子变异体进行分离、鉴别和分析，如变异鉴别试验应高度特异，并应基于分子结构和（或）其体的活性与目标制品一致时，可不作为杂质。但应考虑在他特有的专属性进行分析（如肽图、抗独特型免疫或其他生产和（或）贮存期间产品降解产物是否显著增加及其与适宜的方法）。极据制品特性，选择理化、生物和（或）兔疫原性的相关性^免疫化学中的一种或一种以上的检测方法进行鉴别试验3.1.4.2工艺相关杂质3.2.2纯度和杂质工艺相关杂质包括来源于生产工艺本身，主要涉及细应采用类似正交组合的方法来评估制品纯度/杂质，胞基质来源、细胞培养来源和下游工艺三个阶段。应对潜并为制品相关的变异体建立单独和（或）总体的可接受标在的工艺相关杂质（如宿主细胞蛋ft质、宿主细胞DNA、准。质量控制中包括的工艺相关杂质的质量控制（如蛋白细胞培养残留物、下游工艺的残留物等）进行鉴别、评A、宿主细胞蛋g质、DNA、其他潜在的培养或纯化残留估，并进行定性和（或）定量分析。物等）通常在原液阶段进行。如经充分验证证明生产工艺3.1.4.3污染物对：!：艺相关杂质的去除已达到髙水平时，工艺相关杂质的污染物系指所有引人且并非生产过程所需的物质（如质量控制可在恰当工艺步骤的中间产物进行，可不列入常各种微生物、细菌内毒素）。应严格避免引入污染物并对规放行检定中。其进行相应控制。此外，还应考虑采用其他适宜检测方3.2.3效价法，对可能污染的包括肽聚糖等在内的“非细菌内毒素促效价测定是以制品生物学特性相关属性为基础的生物炎性污染物”进行控制。学活性定量分析，原则上效价测定方法应尽可能反映或模3.1.5含量拟其作用机制。比活性（每毫克制品具有的生物学活性单应采用适宜的物理化学和（或）免疫化学方法进行含位）对证明制品的一致性具有重要的价值。量测定。以适宜的参考品为对照，蛋白质含量（以质量或应采用适宜的国家或国际标准品或参考品对每批原液重量/体积表示）可通过合适的方法进行测定（如和成品进行效价测定。尚未建立国际标准品/国家标准品HPLC)。蛋白质含量也能通过一个绝对定量的方法测定，或参考品的，应采用经批准的内控参比品。标准品和参考可采用第二种绝对定量的含量测定方法进行溯源和验证，品的建立或制备应符合“生物制品国家标准物质制备和标•39•人用重组DNA蛋白制品总论中国药典2015年版定规程”。对容器完整性进行检测，防止容器泄露导致产品无菌状态3.2.4含量的破坏。采用适宜方法和参考品作为对照，测定原液和成品的4贮存、有效期和标签含量。.制品贮存应符合“生物制品贮藏和运输规程”规定，3.2.5安全性试验成品应在适合的环境条件下贮存和运输。自生产之日起，应根据相关制品的各论视情况而定。检测应至少包括按批准的有效期执行。无菌、细菌内毒素、舁常毒性检查等。标签应符合“生物制品包装规程”要求和国家相关规3.2.6其他检测项目定，标示内容至少应包括：应根据相关制品的特性而定。检测应包括外观（例(1>每瓶或每毫升的活性单位（如必要）；如性状、颜色）、可见异物及不溶性微粒检查，溶解度、(2)每瓶有效成分含量和（或）蛋S质含量；pH值、滲透扭摩尔浓度、装量、稳定剂和水分测定等。(3)每瓶标示体积;3.3包装及密闭容器系统⑷冻干制剂复溶液体的名称、体积及复溶后的使用应对原液和成品与容器的相容性、容器吸附、制品和期限；包装材料之间的浸出进行检测和确认，以避免蛋白质和制(5>使用前进行适量稀释（如果需要>;剂辅料和（或）容器包装系统发生相互作用，导致对制品(6)有效期。的安全性和有效性带来潜在风险。此外，应采用适宜方法•40•