机械张力刺激成纤维细胞转分化成肌纤维母细胞在人类烧伤疤痕

机械张力刺激成纤维细胞转分化成肌纤维母细胞在人类烧伤疤痕 摘要 作为烧伤创面瘢痕形成，导致收缩形成的肉芽组织，从而导致病人的审美和功能障碍。目前，主要的治疗方法侧重于伸展，以防止组织收缩。肉芽组织瘢痕形成过程中的收缩的myofi broblasts发挥了关键作用，但他们的存在，通常应减少后，伤口再上皮化。在增生性瘢痕成纤维细胞仍然存在，被认为造成进一步的肥大。以往的研究表明，机械紧张，导致肉芽组织中肌纤维母细胞数目增加。为了评估效果的机械张力拉伸的结果对一些肌纤维母细胞在烧伤创面的疤痕，在体外模型使用。该模型采用人体烧伤疤痕活检是拉伸和检查后1和6天的评估对一些肌纤维母细胞。拉伸造成的机械刺激后的成纤维细胞的数量增加。这表明，使用伸缩的机械刺激诱导成纤维细胞转分化，从而强调了进一步的调查，这一 制度 关于办公室下班关闭电源制度矿山事故隐患举报和奖励制度制度下载人事管理制度doc盘点制度下载 的最佳方法治疗烧伤瘢痕的重要性。 1、 介绍 在烧伤创面的愈合，肉芽组织收缩，是一种正常的现象，从而降低了原来的伤口[1 ]的大小。然而，以后再上皮化阶段继续收缩时，它会导致瘢痕挛缩，美容效果差，功能丧失，最终严重。因此，烧伤病人的康复主要集中在防止收缩愈合组织。用于预防这些并发症是最常见的政权激烈，物理治疗，伸展（定位，夹板和运动范围（ROM）的运动） ，烧伤面积，积极以及被动[ 2-5 ] 。然而，鲜为人知的是，在细胞水平上的疤痕组织对这些疗法的效果。此外，还有小知识的最佳水平和持续时间的力量应用于烧伤瘢痕。 在疤痕收缩最重要的细胞类型之一，是肌纤维母细胞[6,7]。这是一个专门的细胞类型的皮肤成纤维细胞[8]转出现。肌纤维母细胞含有-平滑肌肌动蛋白（SMA）的收缩，如结构，因此，它们产生的机械力外基质，导致挛缩的组织[9,10] 。伤口后已重新上皮化，这些细胞通常会消失。在病理情况下，如增生性瘢痕形成，肌纤维母细胞表达SMA的持久性长后，形成一个新的表皮[11] 。正常，将形成增生性疤痕的伤口和伤口之间的这些差异背后的机制，主要是未知。然而，一个假设是，再上皮化后的瘢痕组织中的成纤维细胞数量的减少，将防止形成增生性疤痕，反之亦然。因此，最佳的物理治疗愈合的创面宜减少肌纤维母细胞的数目，或至少不会增加这些细胞的存在。 机械力已经证明，以刺激皮肤成纤维细胞转化为肌纤维母细胞[ 12 ] 。然而，力量的大小或时间需要诱使这转不知道。我们在先前的研究表明伸展烧伤疤痕和细胞增殖的时间，以及胶原蛋白的合成[13]之间的剂量 - 反应关系。这个问题已经提出了激烈物理治疗烧伤瘢痕，是否可以增加肌纤维母细胞的数量，从而导致更激烈的瘢痕挛缩，从而抵消其自身的目的。 本研究的目的是探讨在愈合的创面组织的机械拉伸，如果目前在瘢痕的成纤维细胞的数量上有任何影响。如果物理刺激成纤维细胞转变成肌纤维母细胞的影响程度，我们希望澄清，如果这些影响连接到刺激的水平。由于人类伤口愈合，愈合过程在实验室动物之间的显着性差异，我们用体外模型使用人类的烧伤疤痕。在场的成纤维细胞后，物理刺激1和6天分别进行了检查，免疫组织化学。 2、材料与方法 从五个肥厚性烧伤瘢痕标本连续五个烧伤患者在常规整形手术。所有样品均取自增生性疤痕，年龄超过12个月，从烧伤患者深Ⅱ度或全层损伤。 样品立即放在培养基，直到所有样品在24小时内进行实验。从五个样品八件，每个样本切成6毫米×20毫米的大小。 长度的短边的一块被选择以便它适合当缝的拉伸装置，弹簧力是均匀分布的。长边的长度是有限的，让一块拉长了维护的拉伸力。 伸展疤痕组织先前的设备描述[13] 。在简短的，设备组成的两个金属腿，在两者之间的弹簧一端，分离与恒力0.79氮（扫描电镜0.03 N）的20毫米的腿。每个瘢痕组织块面积为1.2平方厘米，在0.66 N/cm2的力量。在50毫米的力量进行测量，为0.72牛顿（扫描电镜0.03 N）的。弹簧力是衡量一个电子秤重复整个实验没有任何显著的变化。 所有作品，伸展和放松，被放进液额外的营养素（10%胎牛血清）和抗生素（青霉素50单位/毫升和链霉素50克/毫升）。该作品被培养在378c，5%的二氧化碳，湿度95%。 从每个病人获得的八件，有四个用尼龙缝线缝合设备在无菌的环境，然后不断在潜伏期拉长。两个连接到设备的缝合件被拉长为1天，其他两个为6天。 其余四件完全相同的条件下培养，但只缝合，而不被连接到设备。这些作品作为正常对照。 2.1免疫组化法 伤口标本固定后1和6天，分别在4％的中性福尔马林，脱水，石蜡包埋，并进入截面， 5mm厚切。乙醇系列中的部分是在二甲苯脱蜡和再水化。非特异性蛋白结合，阻止与缓冲溶液在2％正常山羊血清（ PBS ） ，以避免背景染色。随后的章节培育， bated用鼠标单克隆抗体对-平滑肌肌动蛋白在室内温度为60分钟（ Dako公司，丹麦） 。的部分，然后在PBS冲洗，并培养与生物素IgG的第二抗体（媒介，蒲安臣， CA ）为30分钟（3219米克/毫升） 。洗涤后，过氧化氢过氧化物酶底物结合的抗体，定位与抗生物素蛋白过氧化物酶试剂盒Vectastain （矢量，蒲安臣， CA）和3 - 氨基-9-乙基咔唑。免疫组化的控制包括两个遗漏的初级抗体（生理盐水对照组） ，在相同的稀释液（阴性对照）的主要抗体的非免疫球蛋白替代。 随后的免疫反应研究由两个独立的观察员，在10节从每个样品的光镜和估计四度规模， 0-3，零值表示没有染色和强烈的免疫反应。统计与非参数克鲁斯卡尔沃利斯1邓恩后测试的测试组进行了比较。 p值小于0.05被认为是显着的。双尾Spearman相关 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 进行审查的观察员组的得分是类似的。 3、 结论 拉伸装置上的20毫米长的疤痕样品行使武力为0.66 N/cm2 。拉伸件，在孵化时间拉长，这是伴随着轻微的力量在减少设备行使。 肌纤维母细胞的存在， SMA阳性表达所示，培养1天或6天的拉伸和无拉伸件（图1）之间的比较。四度规模用于染色，评估从十个部分，由两个独立的调查样本的研究员得出结果。 在拉伸样品有显着更为明显的染色蛋白相比，拉伸试样（< 0.001，每组50）后1以及6天（图2）。已经在1天的伸展有肌纤维母细胞中发现的所有部分和染色所有判断为轻度至中度。经过6天的孵化有一个激烈的染色整个真皮在所有样品的强度染色判断强。染色后6天明显高于后1天（< 0.001，每组50）（图2）。 从两个不同的调查研究部分之间的判决是一个合格的高度。表1中可以检讨的平均值， 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 偏差和95％的置信的间隔从1天到6的拉伸和无拉伸样品。独立调查样本的得分呈显着相关性，在各组根据斯皮尔曼相关测试（斯皮尔曼R> 0.3， P <0.05 ，在所有的比较）。 4、讨论 本研究的目的是调查如果物理刺激应用于烧伤瘢痕伸展治疗可以影响分化的正常人成纤维细胞成myofi-broblasts。为了实现这一目标，在体外模型在人瘢痕组织是躺在一个标准化的方式是使用[ 13 ]。我们在这里显示，连续拉伸的烧伤瘢痕在人类皮肤成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞增加。符合我们先前的调查结果对增殖活性在烧伤瘢痕的物理刺激的影响，被证明是依赖于伸展的时间。 瘢痕挛缩是一种常见的并发症，深Ⅱ度烧伤创面，根据他们的网站上，可能会导致严重残疾的病人与社会的巨大的经济负担。因此，在康复期间的烧伤创面的疤痕是限制这一病理过程具有重要意义。 一个重要的步骤，形成一个收缩的结缔组织在烧伤瘢痕是转正常成纤维细胞进入细胞的能力，产生的收缩力量，肌纤维母细胞。存在myofibro-blasts是正常的，在伤口愈合过程，但他们最好消失的细胞凋亡后重新上皮伤口。 拉伸后的肌纤维母细胞数目的增加，我们的研究结果与其他研究显示之间的刺激与机械力和肌纤维母细胞分化，细胞培养研究的关系。然而，据我们所知，没有被人瘢痕组织前所示。肌纤维母细胞的生成和维持收缩力的能力，可以解释的临床观测，长期夹板烧伤疤痕往往导致严重的收缩后取消该夹板。 为了防止烧伤创面下方的肌肉收缩，物理治疗，包括伸展受伤的组织经常使用。然而，这种治疗的临床效果，是充满变数。剂量反应关系，对机械刺激和肌纤维母细胞的形成，我们的发现表明，有烧伤的疤痕，这可以解释结果差异的物理刺激之间的正面和负面的影响可能是一个非常敏感的平衡。在这一行中，我们建议物理治疗烧伤瘢痕使用时的作用，应进一步研究在体内。 在本研究中，我们使用人类烧伤瘢痕研究机械张力的影响，在体外模型。导致的烧伤瘢痕的成熟的过程是一个复杂而精心策划的生理过程，涉及多种细胞类型的迁移，增殖和分化以及合成基质成分和调节因子[14,15] 。学习这个过程中，在体外和体内模型有几个以前一直使用的。 只有人的皮肤可以准确地反映一个人烧伤瘢痕的成熟导致的事件。然而，人类的伤口在体内是可变的和困难的样品。此外，在临床情况的愈合过程是受到几个因素的影响，如营养状况的病人，视力，年龄，感染和初步治疗伤口，因素，患者之间的差异很大。 动物模型已在伤口愈合研究中经常使用的。在体内研究人类相比，这些模型使更容易处理和更多的方式来standar DISE的研究和样品的结果。不过，也有在伤口愈合过程中的一些动物和人类之间的主要分歧。这是为什么结果要证实在人体皮肤伤口[15] 。也有一些伦理方面的考虑时，在伤口愈合的实验中使用的实验动物。 我们在体外模型是有限的，以排除全身炎症反应。然而，所有地方的组成部分包括细胞外基质和可行的细胞样本中为什么模型提供了一个标准化的方式进行调查的反应不同的刺激，如机械张力。 总之，我们的研究结果表明，静态伸展烧伤瘢痕增加一些肌纤维母细胞中存在的组织以及与风险的收缩的结缔组织。此外，我们的结果表明，关系持续时间的物理刺激程度和分化成肌纤维母细胞指出必须进一步的研究调查的最佳水平和持续时间的物理刺激疤痕在这组患者。 利益与冲突 作者宣称，他们有没有利益冲突。