周围淋巴结地址素和血管细胞粘附分子_1在妊娠7d小鼠淋巴结和子宫的表达

周围淋巴结地址素和血管细胞粘附分子_1在妊娠7d小鼠淋巴结和子宫的表达 作者:董红梅 单位:汕头大学医学院法医学教研室，广东汕头515041 【摘要】目的:研究正常小鼠妊娠第7?d子宫和淋巴结的淋巴细胞归巢分子,周围淋巴结地址素(PNAd)和血管细胞粘附分子_1(VCAM_1),的分布。方法:应用免疫组化染色观察C57Bl/6小鼠妊娠第7?d PNAd和VCAM_1在子宫和淋巴结的表达。结果:在小鼠妊娠第7?d中，PNAd强表达于外周淋巴结高内皮静脉血管的内皮细胞，但在子宫，仅弱表达于子宫内膜上皮;VCAM_1弱表达于淋巴结部分血管内皮、淋巴细胞，但广泛表达于子宫的各层血管内皮。结论:PNAd和VCAM_1在小鼠妊娠第7?d子宫和淋巴结有各自的分布特点，可能与妊娠期淋巴细胞的分布有关。 【关键词】 妊娠 子宫 淋巴结 周围淋巴结地址素 血管细胞粘附分子_1 Study of Peripheral Lymph Node Vascular Addressin and Vascular Cell Adhesion Molecule_1 in C57Bl/6 Mice at Gestation day 7DONG Hong_mei (Department of Forensic Medicine, Shantou University Medical College, Shantou515041, China),Abstract, Objective:To determine the distribution of lymphocyte_homing molecules,peripheral lymph node vascular addressin(PNAd)and vascular cell adhesion molecule_1(VCAM_1),in the lymph node and uterus of C57Bl/6 mice at gestation day 7. Methods:Immunohistochemistry assay was applied to observe the expression of PNAd and VCAM_1 in the lymph node and uterus of C57Bl/6 mice at gestation day 7. Results:PNAd was strongly expressed in the endothelial cells of high endothelial venules, but weakly expressed in the endometrium epithelial cells. VCAM_1 was weakly expressed in the parts of vessel endothelium cells and lymphocytes in the lymph node, but expressed widely in all kinds of vessel endothelium in the uterus. Conclusion:The distribution of PNAd and VCAM_1 in the lymph node and uterus of C57Bl/6 mice at gestation day 7 is supposed to be related to the distribution of lymphocytes in the gestation. ,Key Words,pregnancy;uterus;lymph node;peripheral lymph node vascular addressin;vascular cell adhesion molecule_1对母体来说，胚胎是半同种移植物，但在正常妊娠中，母体却没有对胚胎产生排斥。子宫局部免疫微环境在妊娠过程中扮演重要的角色。早孕时蜕膜部位出现大量的免疫细胞，最引人注目的是大量子宫NK细胞,1，2,。正常小鼠非孕子宫内有极少量的NK细胞，妊娠6?d左右开始增多，直至妊娠10?d达高 80%)，12?d左右开始减少，妊峰(占子宫淋巴细胞总量的70%, 娠结束时几乎没有,3,。这种NK细胞在子宫局部的剧增与该类细胞的增生有关。研究显示，妊娠早期子宫NK细胞在蜕膜增多主要是由于骨髓和其他外周淋巴组织中的NK细胞迁移所致,4,。而外周淋巴细胞的定向迁移与该器官局部的淋巴细胞归巢相关分子有密切关系,5,。本研究通过免疫组化观察C57Bl/6小鼠妊娠第7?d周围淋巴结地址素(Peripheral lymph node vascular addressin，PNAd)和血管细胞粘附分子_1(Vascular cell adhesion molecule_1，VCAM_1)在子宫和淋巴结的表达，以探讨妊娠子宫NK细胞积聚的机理。 1材料与方法 11实验动物 健康成年的C57Bl/6小鼠(Taconic Farms公司，美国)按雌雄2?1合笼，次晨检查阴栓，阳性者为妊娠第0?d，第7?d时处死，分离淋巴结(下颌下，腋下，腹股沟，腹主动脉旁等)和子宫，冰 冻切片包埋剂包埋，液氮快速冷冻后，_20??冰箱保存备用。 12免疫组化染色 冰冻组织制成12?μm厚的切片，室温晾干2?h，冷丙酮固定10?min，晾干，切片进行免疫组化染色。PBS浸洗5?min，体积分数03%的H2O2室温孵育30?min，以消除内源性过氧化物酶的活性。PBS浸洗5?min，体积分数5%的抗血清(PBS稀释)封闭，室温孵育20?min。倾去多余血清，一抗,生物素化大鼠抗小鼠PNAd单克隆抗体(BD Pharmingen公司，美国)1?100稀释;大鼠抗小鼠VCAM_1单克隆抗体(Antigenix America公司，美国)1?20稀释,室温孵育30?min。PBS浸洗5?min，滴加适当比例稀释的生物素标记兔抗大鼠IgG(vector实验室，加拿大)1?100室温孵育30?min，PBS浸洗5?min，AB复合物(vector实验室，加拿大)室温孵育30?min，PBS浸洗5?min;DAB显色2?min，自来水冲洗，苏木精对比染色，梯度酒精脱水并封固，显微镜下观察并拍照。 2结果 在C57Bl/6小鼠妊娠第7?d中，PNAd强表达于外周淋巴结高内皮静脉血管的内皮细胞，在这些血管周围，有大量的淋巴细胞围绕，可见PNAd阳性细胞呈线状向外延伸(图1A，封2)。妊娠第7?d子宫在胚胎着床处明显增厚，在子宫底蜕膜区，中膜三角区和子宫壁均未见PNAd阳性表达，仅弱表达于子宫内膜上皮(图1B，封2)。而VCAM_1表达与PNAd显著不同，在淋巴结部位， VCAM_1弱表达于部分血管内皮、淋巴细胞(图2A，封2)，但广泛表达于子宫各层血管内皮(静、动脉)(图2B，封2)，尤其强表达于中膜三角区(小鼠妊娠中形成的临时淋巴细胞聚集区，妊娠10?d左右，该部位大量子宫NK聚集区)。 3讨论 淋巴细胞在中枢淋巴器官发育成熟后，经血流迁移，并在全身各器官、组织以及炎症部位发挥多种生物学功能。淋巴细胞在移行过程中对组织器官具有相对的选择性，即某一特定的淋巴细胞群或亚群定向归巢到相应的组织或器官。淋巴细胞归巢过程的分子基础是淋巴细胞与各组织、器官血管内皮细胞粘附分子的相互作用。一般将淋巴细胞的粘附分子称为淋巴细胞归巢受体，而将其对应的血管内皮细胞的粘附分子称为地址素。多种粘附分子与淋巴细胞的归巢有关，但参与不同群或亚群淋巴细胞归巢过程的粘附分子是不同的,6,。 PNAd是特异性地表达于外周淋巴结的血管地址素，其与淋巴细胞受体L_selectin结合介导了淋巴细胞向外周淋巴结的归巢。研究表明，PNAd在高内皮静脉样血管的表达参与了一些疾病的发生和发展,7,。子宫NK细胞表达L_selectin，且体外粘附实验显示，使用L_selectin抗体可明显减少NK细胞与蜕膜组织的结合,8，9,。本研究结果显示，虽然在妊娠早期PNAd仍高表达于淋巴结，但在子宫却极弱表达，提示PNAd可能并未直接参与妊娠早期子宫NK细胞的归巢。VCAM_1是一种重要的归巢分子， 多表达于内皮、淋巴和单核细胞等,10,。VCAM_1的受体是极迟 抗原_4(又称整合素α4β1)和整合素 α4β7。VCAM_1参与体内许多炎症反应中淋巴细胞的 归巢。本研究结果显示，VCAM_1与PNAd的表达正好相反，弱表 达于淋巴结，但广泛表达于子宫的各层血管，尤其是子宫NK细 胞聚集区(中膜三角和底蜕膜中央)。本研究提示VCAM_1是招募 子宫NK细胞聚集的关键粘附分子，但确切作用和机制还需进一 步研究。 【参考文献】 ,1,Head JR. Uterine natural killer cells during pregnancy in rodents,J,. Nat Immun, 1996,1997, 15(1): 7-21.

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