苯那普利逆转SHR大鼠左心室肥厚的量效关系研究

苯那普利逆转SHR大鼠左心室肥厚的量效关系研究 苯那普利逆转SHR大鼠左心室肥厚的量效 关系研究 FJMedica】JournalVot.22,N堕20.a 固相抗原对噬菌体抗体库进行4轮吸附一洗脱一扩增的富集 筛选.将每一轮洗脱下来的噬菌体再感染XL1Blue细菌,并 取少量细菌铺盘.测定噬菌体滴度,计算每一轮筛选后嘴菌体 的收获率,结果见表1,噬菌体收获率由第1轮的6.5×10 增到第轮的1.6×10.共增加了245倍.最后一轮筛选 后,取30个菌落分别进行PCR法扩增Fab基因,结果有25个 克隆含有Fab基因,比率为25/30(83).挑取含Fab基因的 4个菌落进行扩大培养,提取质粒后分别用XbaI+sac1和 s阳l+XhoI进行取酶解,琼脂糖电泳示它们均可放出约 7ODbp的条带(图4),说明这些克隆均含有K链基因和Fd段 基因 表1Bel,细胞对喵曹体抗体库的亲和t羹效应 3讨论 噬菌体抗体技术是将垒套可变区基因通过抗体片段(单链 抗体或Fab段)表达在单链噬菌体的表面,使表型和基因型联 系在一起,把识别抗原的能力和进行再扩增的能力结合在一 起,成为高效的筛选体系.该技术省去了传统单抗制备中的细 胞融合,甚至可以不经免疫.使单抗的制备变得简单易行,稳 2e卜6 205 定有效.该技术尚可用来制备人单抗.是基因 工程 路基工程安全技术交底工程项目施工成本控制工程量增项单年度零星工程技术标正投影法基本原理 抗体技术的 重大突破.采用经免疫的脾细胞构建噬菌库抗体库,可增加特 异性抗体的表达.有利于筛选.文献报道的多用可溶性抗原进 行筛选,有人【用乳腺癌细胞为抗原进行筛选获得较为满意的 结果.我们用Bel.细胞为抗原构建了抗人肝癌的嘴菌体抗体 库,库容量为2×10cfu,以Bel删细胞对该抗体库进行4轮筛 选.在”吸附一洗脱一扩增”的筛选过程中,虽然洗涤次数由第 1轮的1次增到第4轮的lO次.但回收的噬菌体比率却逐渐 增加,4轮共增加了245倍.在洗脱下来的嘴菌体中,含Fab 基因的克隆比率也得到明显提高(由筛选前的25增到筛选 后的83).这些都证实了特异性噬菌体抗体在筛选过程中得 到盲集.可见,用噬菌体抗体抗体库技术制备肿瘤单抗不失为 一 种有效的方法.我们将对所制备的抗体库进一步进行筛选和 保入鉴定,以期获得理想的抗人肝癌细胞的噬菌体抗体及可变 区基因. 参考文献 1WinterG,GriffithsAD,H王瑰,撩建军.威跃,等.抗胃癌鼠单抗3G9Fab段基因的克隆及 其在太晡扦菌的表达.中华微生物学和免疫学杂志.1993,13— 295. 苯那普利逆转SHR大鼠左心室肥厚的量效关系研究 福建医科大学附属第一医院高血压研究所(350005) 羔些谢良地吴可贵 /ol, ,nS. 摘要目的探讨长期苯那普利(benazepril)治疗逆转高血压左心室肥厚的作用,其量效关系及与局部肾素一血 管紧张素系统(RAS)的关系.方法10周龄的雄性自发性高血压大鼠(SHR)给予三十不同剂量的苯那普利(3,10 30m窖.k窖一?d)口服l6周,性别,年龄配对的SHR和WistarKyoto(WKY)大鼠作为对照.测量血压,体重,左 心室肥厚的指标,采用放射免疫方法测定左心室组织的血管紧张素-(AngI)浓度.结果苯那普利治疗组SHR的 SBP和LVM/BW比显着低于对照组SHR,具有量藏关系I治疗组心肌组织中的AngI浓度显着低于束治疗组.结论 苯那普利长期治疗可减轻或逆转SHR大鼠左心室肥厚的发展,具有量藏关系,并与局部RAS相关. 关键词苯那普利左-0室肥犀血管紧强素-自发性晦丘皿鼠一一ll—— 高血压左心室肥厚是高血压最常见的器官损害,也是心血 管疾病的独立危险因素.目前苯那普利在临床上已经得到广茬 的应用,本文着重研究长期苯那普利治疗逆转高血压左心室肥 厚是否具有量效关系,初步探讨其可能的作用机制,为临床用 药提供参考 1材料和方法 1.1动物和治疗:实验所用动物由上海高血压研究室引种自 行繁殖后代,24只雄性SHR大鼠随机分成三组,自10周龄起 测量血压后给予三个不同剂量的苯郊昔利治疗(3,10, 30rag.kg.d一,北京诺华制药有限公司),苯那普利研粉与少 量奶粉调成混合物每日晨8点顿眼.年龄,性别,数量配对的 未治疗SHR和WKY大鼠作对照,每日给予同量的奶粉喂养. 实验在大鼠26周龄测量血压和体重后进行. 1.2方法: 2O6 1.2.1血压的测量:采用MRB-IA型电脑大鼠血压心率测 定仪(上海高血压研究所制造),在丈鼠清醒状态下间接测量尾 动脉收缩压(SBP)和心率,测3次取平均值. 1.2.2左心室重量(LVM):22周龄大鼠称体重(Bw)后, 断头处死,取出心脏沿房室交界处去除左右心房及大血管,去 脒右心室游离壁,将左心室加室间隔准确称量,作为LVM,井 计算LVM与BW之比(LvM/BW)作为左心室肥厚的指标. L.2.3左心室心肌Angl浓度测定:称量左室重量后,取左室 心尖部心肌于预玲的0.9NaC1溶液中(1ml/100mg左室重) 冰浴匀浆,加酶抑制剂(含Na—EDTA,8-羟基喹啉,二巯基丙 醇),煮沸1o分钟,3000转4?离心15分钟,分离上清于 -- 20”C保存Ang8浓度测定采用bAng8标记的放射免疫 分析--,以SN一682B-3型放射免疫一计数器 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 结果 1.3统计学处理;所有指标均用X~S表示,各组数据之间显 着性用多个样本均数比较及两两比就的Student—Newman— KeuIsANOVA方差分析检验,P<0.05有显着性意义;两因 紊之问的相关性用Pearson直线相关分析 2结果 2,l长期苯部普利治疗对血匪与心体比的影响苯那普利治 疗l6周后,三组大鼠的收缩压(SBP)较SHR对照组都显着 下降,高剂量组(30mg?kg?d达到WKY的正常血压水 平.治疗组SHR大鼠左心室重量(LVM)较对J礤组下降,反 映左心室肥厚的指标心体比(LVM/BW)也显着低于未服药 组,具有明显的量效关系,但仍高于WKY组?见表1. 表I备组太?冶疗前后收蛔压,左心童一量和心体比的比较 *与SHR对照组比较,P<0.05 2.2长期苯那普利治疗对左心室Ang8浓度的影响:26周龄 SHR左心室Ang1浓度显着高于wKY大鼠(P<D|05).苯那 普利治疗降低了SHR左心室Ang8浓度,高剂量组具有显着 意义,接近WKY正常水平.各组大鼠左心室Ang8浓度与收 缩压(r=0.672,P<O.01)和心体比(r=0.637,P<O.01)均 明显正相关,见表2. 表2备组太?左心童Ang1浓重的比较 AngI(pg/100rag) SHR~oa WKY SHR+he30 SHR+belO SHR+be3 266士75 134士41 164士89 I98士52 212士67 *:与SHR对照组比较,P<m05 3讨论 血管紧张紊转换酶抑制剂在降压的同时还能逆转左心室 及血管壁肥厚,因此在高血压病的治疗中具有无可普代的重要 地位苯那普利是新一代非琉基血管紧张紊转换酶抑制剂,本 药抑制循环和组织中的ACE效果较强,与奎那普利相当.但 大于培多普利,赖诺昔利和依那普利?].本研究结果表明.长 期苯那普利治疗在降压的同时,左心室肥厚也有明显减轻,而 且剂量越大该作用越明显.同时我们还观察到.长期苯那昔利 治疗后,左心室组织中的Ang8浓度也降低了,而且也具有明 显的量效关系.许多证据表明心血管组织局部的RAS在原发 性高血压厦其治疗中起着比循环RAS更为重要的作用.循环 RAS可能主要参与血压的急性调节反应,而局部的RAS则似 乎参与心血管结构和功能的长期调节啪本研究所以往的研究 也表明长期给予卡托普利治疗SI-IR可持九抑制左心室Angl 的生成,但不影响血浆中的Ang8?苯那普利治疗后,随着 左心室Angl浓度的降低,收缩压与心体比也降低,而且均呈 正相关, 证明 住所证明下载场所使用证明下载诊断证明下载住所证明下载爱问住所证明下载爱问 心脏局部的Angl参与左心室肥厚的形成.SHR 大鼠经苯那普利怡疗16周后,收缩压显着下降,但心体比仍明 显高于WKY组,即苯邪昔利治疗并没有使SHR左室肥厚完 全逆转提示高血压病发生左室肥厚的机理是多方面的,心脏 局部的RAs仅为可能机制之一. 研究提示,在病人耐受及降压要求的范围内,适当给予较 大剂量的苯鄢普利可以有效抑制心脏局部RAs的作用,减轻 或逆转左室肥厚,改善心功能. 誊考文献 1ShimanmtaK.IshideH.Nakarash[Y.et?【.Averys~rtsJtJvedirect radiolmmunccssaysystemforplasmaangiotensln1anditscLinical applieatlan【nvarioushgpertensJved~easesJpncjrJ,1984,48 i228. 2l~hnstonCI.FahnsB.Yam~deH.Comparativestudiesof~ssue inhibitionbyar~iatensineonvert[r~enzymeinhibi~ors.JHgpertens supp],1989;7LSl1. 3LeeMA,PaulM,BohmM,et.Effectsofanglotensinconverting enzymeJnhihltorsontissuerenln—anglotevsJnsystems.AmJCardi- o1.1992.79I12. 4胡文养,陈达光,苏津自.卡托昔利浩疗自发性高血压大鼠对循环 和局部肾紊一血管紧张索系统的长期影响.高血压杂志,1998.8L 83.