【word】 冠突散囊菌子囊孢子破壁方法的研究

【word】 冠突散囊菌子囊孢子破壁方法的研究 冠突散囊菌子囊孢子破壁方法的研究 第27卷第3期 2011年5月 00D&mC删RYVol_27,No.3 May.2011 冠突散囊菌子囊孢子破壁方法的研究 Researchonmethodstobrokeneurotiumcristatumascospores 易凤英刘素纯袁潇赵乐 YIFeng—yingL己,S一chun’YUANXiaoZHAOLe (1.湖南农业大学食品科技学院,湖南长沙410128;2.食品科学与生物技术湖南省重点实验室,湖南长沙410128) (1.CollegeofodScienceandTechnology,HunanAgriculturalUniversity,Ch angsha,Hunan410128,China; 2.FoodScienceandBiotechnology,KeyLaboratoryofHunanProvince,Cha ngsha,Hunan410128,China) 摘要:研究萌发破壁,研磨破壁,浸泡一温差一振摇破壁等方 法对冠突散囊菌子囊孢子破壁效果的影响.结果表明:蒸馏 水浸泡一温差一振摇法具有操作简单,经济适用,破壁率高 (90.8)的特点,是冠突散囊菌子囊孢子破壁的理想方法. 关键词:冠突散囊菌;破壁率;纤维素酶;振摇 Abstract:Germination,grindandimmersion—temperature—shaking methodswereusedtoresearchthedifferenteffectofbrokeneurotium cristatumascospores.Distilledwaterimmersiontemperature—sha kingmethodissimple,economicalandefficient,isanidealwayto brokeneurotiumeristatumascospores. Keywords:eurotiumcristatum;broken;cellulase;shaking 茯砖茶具有独特的口感和明显的调理人体消化及降脂 减肥的功效.冠突散囊菌(eurotiumcristatum)是茯砖茶中 的优势菌,与茯砖茶独特品质和保健作用的形成有着密切的 联系.冠突散囊菌子囊孢子为有性孢子,其孢壁质地坚韧, 耐酸碱,极难氧化分解,因此限制了对孢子内有效营养成分 的准确分析.为了探究冠突散囊菌子囊孢子内的有效营养 成分,必须对孢子进行破壁.目前,国内外对灵芝孢子的破 壁技术进行了多方面的探讨,但对冠突散囊菌子囊孢子 的破壁技术还未见报道.本试验采用机械,化学,生物等方 法分别对冠突散囊菌子囊孢子破壁工艺进行研究,为冠突散 囊菌子囊孢子内有效营养成分的利用提供技术支持. 1材料与方法 1.1材料与试剂 冠突散囊菌子囊孢子:菌种由益阳茯砖茶厂生产的茯砖 茶中分离纯化而来,自行培养,定期收集获得; 基金项目:湖南省重大科技专项(编号:2OO8FJ1005) 作者简介:易凤英(1982一),女,湖南农业大学研究实习员,在读硕士 研究生.Email:453064094@qq.COrn 通讯作者:刘素纯 收稿日期:2011—03—20 95乙醇:分析纯,湖南师大化学试剂厂. 1.2仪器与设备 恒温水浴箱:UWB-20型,北京优晟联合科技有限公司; 分析天平:ALC,110.4型,上海精密仪器仪表有限公司; 光学显微镜:BX51型,广州思贝舒检测仪器有限公司; 恒温摇床:ZHWY—C2102型,上海智城分析仪器制造有 限公司. 1.3试验方法 1.3.1萌发破壁试验称取1.00g冠突散囊菌子囊孢子, 放入200mI三角瓶中,加入50mI茶叶含量为4的茯砖 茶茶汁,然后放人28?恒温培养箱中培养48h.每隔4h取 1mI,用血球计数板观察计数. 1.3.2研磨破壁试验称取1.O0g冠突散囊菌子囊孢子放 人研钵中,再加入适量石英砂进行研磨.每研磨30min后 测定破壁率. 1.3.3浸泡一温差一振摇破壁试验 (1)乙醇浸泡一温差一振摇破壁试验:参考唐维[4],吴 华的试验方法,称取2份1.O0g冠突散囊菌子囊孢子装入 两个200mI三角瓶中,分别用5OmL75和95的乙醇浸 泡,置一18?冰箱中冷冻1d后,于6O?水浴锅中水浴加热 2h.加入玻璃珠若干(玻璃珠的量或体积应超过乙醇体积 的1/2),然后放人180r/min,28?的恒温摇床中振摇3d, 每隔1d测定破壁率. (2)蒸馏水浸泡一温差振摇破壁试验:此法是在乙醇 浸泡一温差一振摇破壁法的基础上,将乙醇浸泡替换为蒸馏 水浸泡,其他试验步骤与1.3.3(1)相同. 1.4冠突散囊菌子囊孢子破壁率的计算 利用血球计数的基本原理对冠突散囊菌子囊孢子破壁 率进行计数.通过光学显微镜鉴别孢子的破壁与否:未 破壁的冠突散囊菌子囊孢子壁光滑完整,丰满,个体形态一 ]37 开发应用2011年第3期 致;破壁后,冠突散囊菌子囊孢子壁不完整,内容物呈不规则 块状.冠突散囊菌子囊孢子的破壁率按下式计算: R一×lOO% 式中: 一一, 冠突散囊菌子囊孢子破壁率,; A一破壁前完整孢子数; B——破壁后完整孢子数. 2结果与分析 2.1萌发破壁试验的破壁效果 冠突散囊菌子囊孢子在适宜的条件下经过培养,由于萌 发力的作用,其孢子壁逐渐破裂,结果见表1和图1. 表1萌发破壁试验冠突散囊菌子囊孢子的破壁率 Table1BrokenrateofEurotiumcristatumaseospores ingermlnationexperiment 时间/h破壁率/时间/h破壁率/ 41.3287.2 82.0327.8 123.1368.3 165.0408.8 2O5.7449.5 246.4489.9 由表1可知,随着时间的增加,其破壁率有所提高,但就 整体情况而言,破壁效果不理想. 图1萌发48h后的冠突散囊菌子 囊孢子(放大400倍) Figure1GerminationEurotiumcristatum ascosporesafter48h 由图1可知,培养48h后,冠突散囊菌子囊孢子的破壁 率依然很低. 2.2研磨破壁试验的破壁效果 冠突散囊菌子囊孢子经过研磨,在摩擦力的作用下,孢 子壁被磨破,达到了一定的破壁效果(表2和图2).由表2 可知,随着研磨时间的增加,破壁率不断提高,但由于研磨属 于手工操作,费时费力,且由于孢子体积微小,要达到比较高 的破壁率十分困难. 138 表2研磨破壁试验冠突散囊菌子囊孢子的破壁率 Table2BrokenrateofEurotiumcristatum aseosporesingrindexperiment 图2研磨2h的冠突散囊菌子囊孢子(放大400倍) Figure2Eurotiumcristatumascospores ingrindexperimentafter2h 由图2可知,研磨对破壁有一定效果,但破壁的效果并 不理想,且费时费力. 2.3浸泡温差一振摇破壁试验的破壁效果 2.3.1乙醇浸泡温差振摇破壁试验的破壁效果采用 温差和机械力的作用对冠突散囊菌孢子进行破壁,在 180r/min,28?的恒温摇床中振摇3d后,无论是75还 是95的乙醇都达到了较理想的破壁效果(表3和图3, 4).由表3可知,使用75或者95的乙醇浸泡对破壁率 的效果几乎没有影响.由图3和图4可知,经75及95 的乙醇处理3d后,破壁效果差不多,破壁率都比较高. 表375及95乙醇浸泡的冠突散囊菌孢子的破壁率 Table3BrokenrateofELUrotit1mcristatt1m aseosporesin75and95ethanol 图375的乙醇处理3d后的破壁效果(放大400倍) Figure3Eurotiumcristatumascospores in75ethanolafter3days 第27卷第3期易凤英等:冠突散囊菌子囊孢子破壁方法的研究 图495的乙醇处理3d后的破壁效果(放大400倍) Figure4Eurotiumcristatumascospores in95ethanolafter3days 2.3.2蒸馏水浸泡一温差振摇破壁试验的破壁效果用 蒸馏水浸泡后再采用温差和振摇的方法,同样可达到很好的 破壁效果.由表4可知,随着振摇天数的增加,破壁率也逐 步上升,振摇3d后,破壁率效果已经很理想.此法操作简 单,经济方便,破壁率高,是冠突散囊菌孢子破壁的最佳试验 方法.由图5可知,经蒸馏水处理3d后,冠突散囊菌子囊孢 子达到了很理想的破壁效果. 表4蒸馏水浸泡温差振摇法 冠突散囊菌孢子的破壁率 Table4BrokenrateofE11rotiUlmcrjstatum ascosporesindistilledwater 图5蒸馏水处理3d的冠突散囊菌子囊孢子(放大400倍) Figure5Eurotiumcristatumascospores indistilledwaterafter3days 3讨论与结论 综合萌发破壁,研磨破壁和浸泡一温差一振摇破壁3种 方法的破壁效果可以看出,3种方法对孢子破壁都有作用,但 破壁效果各不相同.其中,萌发破壁试验操作较简单,但破 壁效果最差;研磨破壁的破壁率比萌发破壁的破壁率要稍 高,但依靠手工研磨费时费力且破壁效果不佳;采用浸泡一 温差一振摇破壁法,无论是用酒精浸泡,还是蒸馏水浸泡,在 振摇后都能达到很好的破壁效果.由试验可知,振摇前的温 差改变为破壁提供了一定的条件,而玻璃珠撞击产生的机械 力是导致孢子破壁的主要原因. 本试验还发现,无论是用酒精还是用水浸泡,酒精或水 的体积与玻璃珠的体积对试验结果有很大的影响:只有当玻 璃珠的体积不小于酒精或水体积的一半时,才能获得良好的 破壁效果.这是因为玻璃珠因重力作用会沉在三角瓶的底 部,如果玻璃珠的数量太少,则很难碰击到上层的孢子从而 影响破壁效果. 采用蒸馏水浸泡一温差一振摇破壁法,试验操作简单方 便,仪器设备简单,试剂药品等材料廉价,且破壁效果很好, 是冠突散囊菌子囊孢子破壁的理想方法. 参考文献 1夏志兰.灵芝孢子粉生物酶破壁技术的研究[J].食用菌, 2005,l2(1):14,18. 2薛艳华,史权,庞海河,等.灵芝孢子几种破壁方法比较分析[J]. 植物研究,2004,24(4):216,218. 3张守勤,朱俊洁,王长征,等.灵芝孢子食用方法与破壁技术研究 进展_J].农业机械,2004,35(2):I60,i62. 4唐维.花粉破壁方法的研究进展[J].食品与发酵工业,2003,29 (2):86,92. 5吴华.破壁提取法的灵芝孢子破壁[J].吉林大学:工学版, 2004,34(2):312,315. 6韩文瑜.病原细菌检验技术[M]长春:吉林科学出版社,1992. 7李淑芳,张志军,李海德.灵芝孢子破壁技术的研究[J].食品工业 科技,2008,29(9):195,199. (上接第97页) 在图4(b)中,1号和1号样品,2号和2号样品均能区 分开,且样品的聚类和区分更加明显.说明热处理对牦牛肉 和猪肉样品有一定的影响,并且热处理对牦牛肉的影响更 大.同时DFA对于样品的区分比PCA更有效. 3结论 (1)通过PCA和DFA分析, 证明 住所证明下载场所使用证明下载诊断证明下载住所证明下载爱问住所证明下载爱问 电子鼻能够区分牦牛 肉,牛肉和鸭肉,并且DFA的区分效果比PCA更好. (2)采用DFA分析建立了肉类识别模型,该模型对6个 不同未知样品的识别值大于94.9,识别正确率达到100. (3)通过电子鼻分析,说明热处理对牦牛肉和猪肉样品 有一定的影响,并且热处理对牦牛肉的影响更大. 参考文献 1黄丽娟.肉品品质的电子舌评价研究[D].杭州:浙江工商大学, 2008. 2孙钟雷.电子鼻技术在猪肉新鲜度识别中的应用[J].肉类研究, 2008(2):50,53. 3柴春祥,杜利农,范建伟,等.电子鼻检测猪肉新鲜度的研究EJ]. 食品科学,2008,29(9):444,447. 4石志标,佟月英,陈东辉,等.牛肉新鲜度的电子鼻检测技术EJ]. 农业机械,2009,40(11):184,188. 5柴春祥,施婉君,蔡悦,等.电子鼻检测鸡肉新鲜度的研究[J].食 品科学,2009,30(2):17O,173. 6张晓敏,朱丽敏,张捷,等.采用电子鼻评价肉制品中的香精质量 lJ].农业工程,2008,24(9):175,178. 7田怀香,孙宗宇.电子鼻在金华火腿香精识别中的应用[J].中国 调昧品,2008(11):61,64. 139