EPR技术研究红花红色素清除OH^-自由基作用

EPR技术研究红花红色素清除OH^-自由基作用 EPR技术研究红花红色素清除OH^-自由基 作用 新疆中医药20O6年第24卷第3期(总第103期) EPR技术研究红花红色素清除OH一自由基作用 新疆中药民族药研究所(乌鲁木齐830002)倪慧卿德刚贾晓光卢景芬 摘要目的:探讨红花红色素清除自由基的作用.方法:采用电子顺磁共振技术(EPR) 检测不同浓度红花红 色素对OH.自由基的清除作用.结果:红花红色素低浓度时清除OH一自由基的能力随浓度的增加而增加,在 1.0mg/mL时其清除能力达到86.81%.结论:红花红色素有明显的清除OH.自由基作用. 关键词电子顺磁共振;红花红色素;自由基 红花(CarthammtinctoriusL.)为菊科植物红花 的花,是重要的活血化瘀药之一[1],临床上用于治疗 冠病,高血压等疾病[2],红色素为其活性成份之 一 ,红花中含30%黄色素和0.1,0.2%的红色素, 红花红色素主要成份为红花苷(又称红色素 ca8m,随着人们生活水平的提高和健康意识的 增强,红花红色素作为天然食用色素及化妆品备受 消费者青睐.本实验利用EPR技术考察了红花红 色素清除自由基的能力,为阐明其作用功效提供新 的科学实验数据. 1试剂及仪器 1.1试剂 二甲基吡咯氮酮(姗)购自美国Sigma公司, 使用前用活性炭纯化,使之无顺磁信号.红花红色 素由新疆中药民族药研究所亚科研部提供.其它试 剂均为分析纯. 1.2主要仪器 电子顺磁共振仪ESP--300型(德国BRUKER公 *基金项目:鸟鲁木齐市科技项目(VlltX)2). 1北京大学医学部天然药物及仿生药物国家重点实验室(北京100083). 司). 2实验方法 2.1样品液的配备 将红花红色素用0.05tool?L,pH=7.4的PBS 配制成0.O0,0.25,0.50,t.O0,5.OOmg.mL的溶液, 待测. 2.2OH一自由基产生体系 0.05tool?LPBS(pH=7.4)溶液,1.?L FeSO,(NR,)2SO,,0.9tool?L—DMPO,6%H202.以上 4种试剂各取5止打入EP管,混匀后立即装入石英 毛细管内.然后外加样品保护测试管,一并放入 EPR波谱仪的谐振腔中进行测定,作为对照样品. 测样品时用样品液代替PBS,其余同上. 2.3EPR测试参数 中心磁场(CF):3460G,扫描宽度(Sw):100G,扫 描时间(sI'):60S,调制幅度(MA):2.0G,调制频率 (MF):100KHz,微波频率:(MF)9.671GHz,微波功率 ():20mW,测试温度(T):室温. 5讨论 大黄含有大黄酸(Rhein),大黄素(Emodi~),大 黄酚(Chrysophanoi),芦荟大黄素(Ait~-'-ernodin),大 黄素甲醚(Physcion)等多种有效成份,《中国药典》 2005年版一部第17页"大黄"药材项下,采用HPLC 法对大黄中芦荟大黄素,大黄酚,大黄素,大黄素甲 醚进行了含量测定,胆石清片中大黄三分之二水煎 煮,剩余打粉入药,照成大黄酸,大黄素,大黄素甲醚 含量较低,同时,由于制剂中其他组分的影响,芦荟 大黄素峰形较差,故仅测定了大黄酚的含量,以控制 本品的质量. 参考文献 1中华人民共和国药典.2o05年版,一部. 2苗明山.李振国.现代实用中药质量控制技术.北京:人民卫生 出版社.2o0o. 3王北婴,李仪奎.中药新药研制开发技术与方法.上海:上海科 学技术出版社.2001.12. 4孙文基,谢世昌.天然药物成份定量分析.北京:中国医药科技 出版社.2003. (收稿日期"200~一03—3o) 12新疆中医药2OO6年第24卷第3期(总第103期) 高效液相色谱法测定黄连阴道泡腾片中蛇床子素的含量 新疆米泉市人民医院(831400)吕大玲 新疆药物研究所(83OOO2)刘宣麟 摘要目的:建立测定黄连阴道泡腾片中蛇床子素的高效液相色谱方法.方法:色谱柱:KromasilC(4.6X 200ram,5pm);检测波长:322nm:流动相:乙腈一水(70:3o);流速:1.00mL?rain,;柱温:40?.结果:蛇床子素进样量 与色谱峰面积在9.74—48.70ug?mL范围内呈良好的线性关系(r=0.9996),平均加样回收率为99.59,RSD为1.2 (,l=9),精密度试验RSD为1.4(,l=5),重复性试验RSD为1.5(,l=5),稳定性试验RSD为1.6(,l=5).结论:该方 法操作简单,精密度高,重现性好,是控制黄连阴道泡腾片内在质量的有效方法. 关键词黄连阴道泡腾片;蛇床子素;高效液相色谱法 黄连阴道泡腾片由黄连,蛇床子,没食子,石榴 皮,苦参5味药组成,具有清热燥湿,止痒之功能,临 床用于各种细菌性,霉菌性阴道炎,疗效确切,为有 效地控制其质量,对其臣药蛇床子中蛇床子素含量 测定方法进行了研究,参照文献报道引,研究建立 了高效液相色谱(HPLC)方法,测定该复方制剂中蛇 2.4清除率的计算公式 I=(ho—hI)/llo%,h.表示空白体系中EPR谱 信号强度测量的平均值,hI为样品体系中EPR谱信 号强度测量的平均值,I值越大其清除OH一自由基 能力越强.见图1. 3结果图删一自由基EPR谱图 红花红色素浓度为0.00,0.25,0.50,1.00, 5.0(hng/mL,清除OH一自由基能力分别为0.00%, 31.87%,57.14%,86.81%,85.71ok,其不同浓度清 除OH一自由基能力趋势如图2. 100% 80% 茎60% 察40% 20% 0% 0. 度(/L 图2不同浓度红花红色素清除OH一自由基能力 J.LJ.LJ.LJ.L 4讨论 红花红色素清除OH一自由基能力随浓度的增 加而增加,浓度>1.00?mL其清除能力基本不 再增加,趋于稳定,文献报道,黄酮类化合物生物活 性主要与抗氧化作用有关[3],而且抗氧化作用主要 通过结构中的芳香簇羟基的疏水性质,数目及位置 决定它们的抗氧化功能,红花苷分子结构含有较高 活性抗氧化基团[5],芳香簇羟基可直接消除或修饰 有害物质OH一,使反应中断.本项目研究为红花红 色素生物活性探讨提供理论依据. 参考文献 1江苏医学院.中药大词典.上海:上海人民出版社,1971.902. 2王贵森,红花的临床应用.浙江中医药杂志,1985,20:42. 3Ialn—yi,CommaG.G日Idn日H,da1.Scellgingof~,petuxide anionradicalbych[J].MolecularandCellularBiochemistry, 1999.196:157—161. 4胡春,丁霄林.黄酮类化合物在不同氧化体系中的抗氧化作用研 究[J].食品与发小酵工业.1996,(3):46—53. 5Rice—EvansCA,MillerNJ,PbgG.Struetu~一~tioxidantactivity relationshipsofflavonoi&andp~rlollc8cid8.Freel:~dicBidMed,1996, 20:933—56. 6ErieJL,ReaSJ,BuiHH.da1.QuantitativemctuIe—activityl"~]Stion? s}Iipy8isofpl~olic~tioxidanta.Freel:~dicBidMed.1999,26:285 — 94. (收稿日期:2OO5—08一o5)