实验一体壁几丁质定性定量分析几丁质（Chitin）是高分子的含氮多聚糖，分子式为（CgHJsNh，存在于体壁的原
表
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皮和起源外胚层的器官内膜中，是昆虫表皮的主要成分之一占表皮干重的25%〜40%，由N-乙酰-D-葡萄糖胺通过0-1,4-糖苷键聚合而成，构造类似纤维素。几丁质为无色无定型固体，不溶于水、稀酸、稀碱、酒精和乙醚等有机溶剂。但在高温（60°C）下用浓碱液处理几丁质，虽然不能溶解，但可使其分子链上乙酰基部分脱离，形成几丁糖（Chitosan），而几丁糖溶于稀酸中，一般通过此方法来进行几丁质的定性定量测定。最近，X衍射分析研究发现昆虫表皮中的几丁质属于a-几丁质。本实验的目的和要求是检测昆虫体壁的表皮中有无几丁质的存在以及定量测定表皮中几丁质的含量，为研究昆虫在生长发育过程中几丁质含量的变化，同时还可以研究生长调节剂类农药对昆虫几丁质作用的影响。一、原理几丁质在高温（160C）和碱作用下分解成几丁糖，几丁糖经碘和稀酸作用后呈现紫色，以此来定性定量分析昆虫表皮几丁质。二、
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、仪器设备及试剂（一）实验材料鱗翅目幼虫或直翅目若虫表皮以及各种昆虫卵。（二）仪器设备分析天平、电炉、解剖针、剪刀、试管、滤纸、培养皿、烧杯、玻璃管、橡皮塞等。（三）试剂1.饱和氢氧化钾溶液：称取16g氢氧化钾溶于100mL水中。2．无水乙醇以及配置的95%，70%，50%，30%乙醇溶液。0.03%碘化钾-碘溶液：30mg碘和5g碘化钾溶于100mL水中。1%和75%硫酸溶液。三、操作程序（一）几丁质定性分析1•自制消化管：取试管一根，配以橡皮塞，在橡皮塞上钻5mm孔，插上玻璃管，橡皮塞外端的玻璃管上再连接一根橡皮管，长3050cm,橡皮管的另一端再接一根玻璃管，并将开口的玻璃管通入水槽内，以防加热时碱液溅出（见图1）。1.表皮2.氢氧化钾溶液3.橡皮塞4.橡皮管5.盛水的烧杯取鱗翅目幼虫表皮或其他昆虫表皮或卵，分别放入装有8mL饱和氢氧化钾的上述试管中，塞紧带有橡皮管的橡皮塞，置于甘油浴中加热至160°C，保持1520min,由于体壁的大部分组织在高温下被强碱消化，几丁质上乙酰基被脱去，剩下透明薄膜状的几丁糖。将各消化管内未消化的物质倒入小培养皿中，并用镊子将其逐步移入到95%，70%，50%和30%乙醇溶液清洗，再用蒸馏水冲洗待用。取一块消化后的昆虫体壁（几丁糖），置于白瓷板上，加12滴0.03%碘化钾-碘溶液，再加1〜2滴1%硫酸，几丁糖立即产生紫褐色反应如再加上几滴75%硫酸，稍待片刻，紫色变淡，直至消失，表明几丁糖已在浓硫酸作用下完全水解。（二）几丁质定量分析1.取鱗翅目幼虫（如：棉铃虫5龄幼虫）数组，每组3〜5头，用水清洗体表，剪去头部、尾部和足，再沿着腹部中线剪开，剔除附着于体壁内的肌肉和脂肪体，用水冲洗干净，再经95%，100%乙醇脱水，取体壁约300mg在分析天平上称重。将已知质量的体壁粉末放入消化管中，按照上述方法装入消化管，在氢氧化钾饱和溶液中加热消化。将消化后剩余的几丁糖薄膜细心地倒在滤纸上，用缓慢的流水冲洗干净，然后用95%，100%乙醇脱水，称重。四、结果计算按照如下公式计算体壁几丁质的相对含量。体壁几丁质的相对含＜=W1/W2X1.26X100（%）式中：W1——消化后体壁质量，mg；W2——消化前体壁质量，mg；1.26——转换系数，转换系数=乙酰胺基葡萄糖相对分子质量/胺基葡萄糖相对分子质量。消化前体壁质量（mg）消化后体壁质量（mg）体壁几丁质相对含量重复一重复二重复三平均值
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