实验七种子生活力测定即种子发芽率快速测定一、实验目的通过实验,掌握主要作物种子生活力测定方法、基本操作和结果计算。氯化三苯基四氮唑(TTC)法红墨水(酸性大红G)染色法二、实验原理1、氯化三苯基四氮唑(TTC)法凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应,而无生活力的种胚则无此反应。当TTC溶液渗入种胚的活细胞内,并作为氢受体被脱氢辅酶(NADH2或NADPH2)还原时,可产生红色的三苯基甲腙(TTF),胚便染成红色。当种胚生活力下降时,呼吸作用明显减弱,脱氢酶的活性亦大大下降,胚的颜色变化不明显,故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。2、红墨水(酸性大红G)染色法有生活力的种子其胚细胞的原生质具有半透性,有选择吸收外界物质能力,某些染料如红墨水中的酸性大红G不能进入细胞内,胚部不染色。而丧失活力的种子其胚部细胞原生质膜丧失了选择吸收的能力,染料进入细胞内使胚部染色,所以可根据种子胚部是否染色来判断种子的生活力。三、试材与设备【实验材料】玉米种子【仪器与用具】培养皿、镊子、单面刀片、垫板(切种子用)、烧杯、棕色试剂瓶、搪瓷盘、pH试纸。【试剂】TTC溶液的配制:取1gTTC溶于1L蒸馏水或冷开水中,配制成0.1%的TTC溶液。药液pH应在6.5~7.5,以pH试纸试之(如不易溶解,可先加少量酒精,使其溶解后再加水)。红墨水溶液的配制:取市售红墨水稀释20倍(1份红墨水加19份自来水)作为染色剂。四、实验步骤1.将玉米种子用温水(30℃)浸泡2~6h,使种子充分吸胀。(待充分吸胀后取出一部分种子,在沸水中煮沸3~5min,作为死种子)2.随机取种子50粒,沿种胚中央准确切开,并取几粒死种子作为对照。3.将每粒种子的一半用TTC法染色,溶液以浸没种子为度。 4.TTC染色的种子放入30~35℃的恒温箱内保温30min.也可在20℃左右的室温下放置40~60min;红墨水法室温染色10~20min5.保温后,倾出药液,用自来水冲洗2~3次,立即观察种胚着色情况,判断种子有无生活力,把判断结果记入
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1内。表1染色法测定种子生活力记载表种子活力(%)=有活力的种子数/种子总数×100%【注意事项】1.TTC溶液最好现配现用,如需贮藏则应贮于棕色瓶中,放在阴凉黑暗处,如溶液变红则不可再用。2.染色温度一般以25~35℃为宜。3.判断有生活力的种子应具备:胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色;子叶有小部分坏死,其部位不是胚中轴和子叶连接处;胚根尖虽有小部分坏死,但其它部位完好。4.TTC反应结束,从黑暗下取出后立即观察,因光下久放TTC本身会变色。5.不同作物种子生活力的测定,所需试剂浓度、浸泡时间、染色时间不同。现将主要作物种子生活力测定所需条件列入下表。【思考题】TTC法和红墨水法测定种子生活力有何不同?*以上有不当之处,请大家给与批评指正,谢谢大家!