一般毒性作用及其试验与评价方法

一般毒性作用及其试验与 评价 LEC评价法下载LEC评价法下载评价量规免费下载学院评价表文档下载学院评价表文档下载 方法第一节急性毒性作用及其试验与评价第二节亚慢性毒性作用及其试验与评价方法第三节蓄积毒性作用及其试验与评价第四节慢性毒性作用及其试验与评价外来化学物在一定剂量、一定接触时间和接触方式下对实验动物产生的综合毒效应称为一般毒性作用。一般毒性作用根据接触毒物的时间长短又可分为急性毒性、亚慢性毒性和慢性毒性。一、急性毒性的概念二、急性毒性试验的目的三、急性毒性试验方法的要点四、急性毒性分级和评价第一节急性毒性作用及其试验与评价方法急性毒性是指机体（实验动物或人）一次或24h内多次接触外源化学物后在短期内所产生的毒性效应，包括一般行为和外观改变、大体形态变化以及死亡效应。一、急性毒性的概念1、急性接触的次数（一次或多次）24h内2、中毒效应出现的时间（一般为7-28d）急性毒性效应一般是指机体接触化学物后，在较短时间内观察到的毒性症状。3、中毒效应的强度急性毒性概念中的几个问题1、测试和求出毒物的致死剂量以及其他急性毒性参数，通常以LD50为最主要的参数；2、初步评价毒物对机体的毒效应特征、靶器官、剂量-反应（效应）关系和对人体产生损害的危险性；3、研究受试物在动物体内的动力学变化规律；4、为亚慢性、慢性毒性试验研究以及其他毒理试验提供接触剂量和观察指标选择的依据。二、急性毒性试验的目的急性毒性试验可以得到的毒性参数：①绝对致死剂量或浓度(LD100或LCl00)②半数致死剂量或浓度(LD50或LC50)③最小致死剂量或浓度(MLD，LD01或MLC，LC01)④最大耐受剂量或浓度(MTD，LD0或MTC，LC0)或称为最大非致死剂量(MNLD) ⑤急性毒性LOAEL(观察到有害作用的最低剂量) ⑥急性毒性NOAEL(未观察到有害作用的剂量)急性毒性的下限参数，非致死性急性毒性作用为终点急性毒性的上限参数以死亡为终点通过病理组织学和中毒症状观察等手段测定包括实验动物、染毒途径、染毒剂量、观察周期、观察指标的选择、计算方法和评价等。一般来说，一个新化学物在研制初期就要进行急性毒性试验。如果急性毒性试验通不过，则后面的所有试验都不必进行了。三、急性毒性试验设计（一）实验动物的选择和要求尽量选择急性毒性反应与人近似的动物；易于饲养管理、试验操作方便的动物；繁殖生育力较强，数量较大能够保障供应；价格较低，易于获得的动物。实验动物的选择包括物种和品系、年龄、体重、数量等方面，必须按照其规范要求进行。急性毒性试验一般首先选择哺乳动物，选择两种或两种以上的动物。包括啮齿类和非啮齿类。啮齿类以大鼠、小鼠为最常用。非啮齿类以犬或猴最常用。急性毒性试验所用大鼠的品系以Sprague-Dawley（SD）、Wistar为主，小鼠则以昆明种、NIH、ICR为多。1、实验动物的物种和品系 昆明种小鼠（KM小鼠）特点：体型小，产仔多，生长繁殖快，饲养管理方便，对环境的适应性和对疾病的抵抗力强。广泛应用于药理毒力病理和细菌学研究，以及生物制品和药品的鉴定。 NIH小鼠特点：体型小，产仔多，生长繁殖快，饲养管理方便，对环境的适应性和对疾病的抵抗力强。广泛应用于药理毒力病理和细菌学研究，以及生物制品和药品的鉴定。 Wistar大鼠特点：抗病力强，自发性肿瘤发病率低，多用于肿瘤、免疫、药理、内分泌。 SD大鼠特点：白色，产仔多，生长发育较Wistar大鼠快，对疾病的抵抗力较强，尤以对呼吸道疾病的抵抗力强。通常要求刚成年的动物，且为健康未受孕的动物。通常大鼠180～240g、小鼠18～25g、家兔2～2.5kg、豚鼠200～250g、Beagle犬4～6kg、杂种犬8～15kg。2、实验动物的年龄和体重通常要求为雌雄各半。但如有资料或预试验发现试验品对雌、雄动物毒效应有明显的性别差异，则应单独分别试验并求出雌性和雄性动物各自的LD50值。3、实验动物的性别应先进行动物的给药前检疫观察。大鼠、小鼠、豚鼠、兔的检疫期为1周，犬、猴等适当地延长至2～3周。设定检疫期有两个主要目的：一是让外购来的实验动物要适应一段时间，减少环境和生理条件变化对试验结果的影响；二是筛检健康等不符合试验要求的动物4、实验动物的预检采用经口途径染毒，实验动物胃肠道内食物存留量对化学毒物的毒性可产生较明显的干扰，因此在试验给药前应作禁食处理。大鼠在前一天傍晚下班时或晚间将饲料撤掉。小鼠由于其消化吸收和代谢速度较快，可隔夜禁食也可禁食4h以上。5、实验动物的给药前禁食处理恒定的温度：22±3℃湿度：30~70%光照度：昼夜各半饲料合格、饮水合格、垫料合格6、试验动物的饲养环境不同的LD50计算方法对动物组数的要求有所不同，一般为5~7组。大、小鼠等小动物每组数量通常为不少于10只，家兔每组不少于8只，犬等大动物每组不少于6只。严格按照随机分组进行。（二）实验动物分组与数量受试物的接受、分样、保管、称量、配制以及在此过程中严格的质量保证是急性毒性试验成功与否的重要环节。受试物的化学结构、纯度、杂质成分、理化性质特别是挥发性、溶解性等均需了解。计算试验所需受试物的总量，一次备齐全部实验的用量。应以同一批号为宜。（三）受试物及处理（四）染毒剂量及分组一般推荐，染毒最大量为：①经口20ml/kg（对空腹动物）；②经皮2ml/kg（根据体表面积计算，限于染毒的准确性）；③静脉1ml/kg（5min以上）；④肌内注射0.5ml/kg（一个部位）；⑤每眼0.01ml；⑥直肠0.5ml/kg；⑦吸入2mg/L；⑧鼻：猴或犬每鼻孔0.1ml。染毒途径（exposureroutes）的选择需考虑：1.模拟人在生活和生产环境中实际接触受试物的途径和方式；2.有利于不同化学物之间急性毒性大小的比较；3.受试物的性质和用途；4.各种受试物毒性评价程序的要求等。（五）染毒方法最常用的染毒途径为经口、经呼吸道、经皮及注射途径。吸收速率依次排列，一般是静脉注射＞吸入＞肌内注射＞腹腔注射＞皮下注射＞经口＞皮内注射＞经皮。返回返回灌胃是将液态受试化合物或固态、气态化合物溶于某种溶剂中，配制成一定浓度，装入注射器等定量容器，经过导管注入胃内。 优点：剂量准确 缺点：工作量大；可能损伤食道或误入气管；与人的接触方式差异很大。1、经口（胃肠道）染毒喂饲将化合物拌入饲料和水中，需计算每日进食量和饮水量，折算摄入剂量。 优点：符合人接触化合物的方式 缺点：可能拒食；挥发性化合物可使摄入量下降，且有经过呼吸道吸入的可能；化合物易水解或与食物中的化学成分起反应。吞咽胶囊 将一定剂量受试化合物装入药用胶囊内，强制放到动物的后咽部迫使动物咽下。家兔及猫、狗等大动物可用此法。 优点：剂量准确，尤其适用于易挥发、易水解和有异味的化合物。研究生产条件下以气体、蒸气、粉尘、烟、雾等形式存在于车间空气中的工业毒物，评价环境空气污染物，以吸入为给药途径的药物，常常采用经呼吸道染毒的途径。2、经呼吸道染毒静式吸入在固定体积的密闭容器中，加入定量的易挥发液态化合物或气态化合物。将动物置于其中，一般2h。尤其是适用于小动物接触易挥发液态化合物的急性毒性研究。优点：设备简单；操作方便；消耗化合物少缺点：柜内空气组成、环境条件不稳定；化合物浓度难以恒定。动式吸入染毒柜——空气流动面罩吸入——避免化合物经皮吸入优点：剂量准确缺点：装置复杂；消耗大；可能造成污染经皮肤染毒的方式：先使用化学法脱毛（常用脱毛剂为硫化钡加滑石粉1：4或硫化钠加淀粉1：4）或机械法脱毛（剪剃去毛），将动物脊柱两侧背毛脱去，去毛面积常为体表面积的10％。局部涂敷受试物并以玻璃纸覆盖固定一定时间接触染毒。3、经皮肤染毒对注射药品或需作比较毒性观察的药品进行急性毒性试验时，须作经注射途径染毒。注射途径可分为静脉注射或滴注、腹腔注射(ip)、肌内注射(im)、皮下注射(sc)、皮内注射(id)、椎管内注射等。4、经注射途径染毒1.查阅文献：分析受试化合物的化学结构和其理化性质，依此查阅文献，找出与受试化合物化学结构与理化性质近似化合物的毒性资料，并以其LD50(LC50)值作为受试化合物的预期毒性中值。2.试验：以文献LD50为中值，取倍差，设3－4个梯度，找出大致的100%死亡和0%死亡的范围。（LD10-90的范围）。（六）染毒剂量设计3.正式试验：i＝（logLD100-logLD0）/（n-1）组距，即相邻两个剂量组对数差或相邻组比值的对数值。一般设5－7个剂量组。 1 2 3 4 5 6 LgLD0 LgLD0+i LgLD0+2i LgLD0+3i LgLD0+4i •••改良寇氏法（Karber）霍恩氏法（Horn）威尔氏法（Weil）概率单位法其他计算方法LD50计算方法对未知毒性的化学物，估计毒性较低时，预试验也可以5g/kg剂量进行摸索，来决定是否需正式求LD50。一般来说，化学物LD50如大于5g/kg已表明毒性不大。我国药品的毒理研究 指导原则 医疗器械检查指导原则中药新药临床指导原则抗肿瘤药物临床应用指导原则医院消毒剂的选用原则新药研发生产技术转移 规定要以最大容积最高浓度给予动物后未见死亡，方可不进一步试验求出LD50值。急性毒性试验除设立几个剂量组外，是否设正常和溶剂对照组，根据需要确定。急性毒性试验一般是以死亡为主要 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 内容。除此之外还要注意：中毒体征及发生过程；死亡情况和时间分布；体重；病理形态学变化。（七）毒性作用观察1、中毒体征及发生过程应详细观察和记录动物出现的中毒体征、发生时间和体征发展的经过。机体对毒物作用的反应可以表现出各个系统的特征。2、死亡情况和时间分布急性毒性试验中实验动物的死亡数是计算LD50值的依据，动物死亡数量每增加或减少一只都会对LD50值产生明显影响，因此应认真观察和记录。分析中毒死亡时间的分布规律，也可以提供重要信息。3、体重实验动物体重变化指标，可以反映动物中毒后综合性整体变化，是一个比较客观简便的量化指标。因此在观察实验动物中毒体征的同时，对存活动物应定期多次称量动物的体重变化，一般为每周1次或2次。体重可以反映动物中毒后的整体变化。对存活动物尤其是对低于LD50剂量组的存活动物。应在观察期28天内称量其体重的变化，以便了解受试物引起毒效应的持续时间。4、病理检查对死亡动物应及时进行大体解剖，肉眼观察大体病理变化，如脏器外观、大小、色泽的变化，有无充血、出血、水肿或其他改变，如有改变须取材作组织病理学检查。对存活动物在观察期结束时亦应进行解剖检查，必要时做组织病理学检查。高剂量组动物染毒后常在数分钟或数十分钟内出现死亡，染毒以后应即刻开始观察动物的中毒表现和死亡情况。给药当天应连续或多次观察，以后可根据情况，每天2次或多次观察直到试验周期结束。急性毒性试验观察周期一般为7-28天。（八）观察时间和周期 四、急性毒性分级和评价 LD50标志着一个化合物毒性的大小，所以常用作急性毒性分级。毒性大小于LD50值成反比，LD50越小，毒性越大，反之，毒性越小。除了LD50以外，还应当报告LD5095%可信限范围、急性毒作用带等指标，并尽可能详尽描述中毒特征、症状表现、出现时间、死亡前兆、毒性作用的发生、发展、恢复经过，以及体重、剖检和病理学变化等。从而全面的对急性毒性做出评价。五、经典急性毒性试验的局限性1.消耗的动物量大2.获得的信息有限3.测得的LD50仅仅是一个近似值4.在安全性评价中仅评价动物死亡和简单的症状观察是不够的，更需要的是生理学、血液学及其它化验检查所提供的深入细致的毒性信息。一、基本概念二、试验目的三、亚慢性毒性试验设计及其评价第二节亚慢性毒性作用及其试验与评价方法一、基本概念亚慢性毒性作用是指实验动物连续多日接触较大剂量的外来化学物所出现的中毒效应。试验染毒期限应为3～6个月，或一般为实验动物生命期的1/10~1/30。如用小鼠，试验期通常为3个月，大鼠3~6个月，狗4~12个月。动物研究期限相当于寿命期(％)和人染毒的时间二、试验目的（1）进一步探索受试物的毒作用特点和靶器官；（2）了解受试物有无蓄积作用，是否产生耐受性；（3）分析受试物的剂量-效应关系；（4）初步估计不出现毒性作用的最大耐受剂量（NOEL或NOAEL）和出现毒性的最小有作用剂量（MED）；（5）为慢性毒性试验的剂量设计和观察指标提供依据；（6）为受试物的毒理机制提供基础资料。三、亚慢性毒性试验设计在遗传毒理学及一些前期的试验难以做出明确评价时需要进行亚慢性毒性试验。根据前期的试验结果来设计亚慢性毒性试验，其试验的周期从几个月到一年不等。在整个亚慢性试验期间，动物均应摄食试验饲料。受试物可掺入饲料中，也可掺入饮水中。不得巳时可采用灌胃法进行。（l）物种和品系一般要求两种实验动物，一种是啮齿类，一种是非啮齿类，以便全面地了解受试物的毒性。基本上均使用大鼠和犬，有时用猴，这取决于受试物的重要性和试验条件。亚慢性经皮毒性试验，可用兔或豚鼠。大鼠常用Wistar和Sprague-Dawley。犬的亚慢性毒性试验多使用Beagle犬。1、实验动物的选择（2）性别、年龄和动物数性别：一般每组雌雄各半；年龄：刚断乳不久的动物大鼠6～8周龄（体重80～100g）动物数：大鼠、小鼠每组不少于20只；犬、猴每组不少于6只。（3）微生物学寄生虫学等级和饲养环境亚慢性毒性试验周期较长，观察指标较多，实验动物的质量、喂饲条件和试验环境明显影响受试物的毒性反应。实验动物分四级：普通级、清洁级、无特定病原体级（SPF级）、无菌级。犬和猴分为普通级和SPF两级。亚慢性毒性试验，应使用清洁级及以上等级大小鼠，并饲养在屏障环境内进行试验。2、染毒方式一是应当尽量选择和人类接触途径相似的方式；二是应当与预期进行的慢性毒作用研究的接触途径相一致。一般以经口、经呼吸道和经皮染毒为多。染毒频率通常每日一次，连续给予，如试验期为3个月或超过3个月时，也可每周6次。3、染毒途径（l）经口染毒：灌胃法、喂饲法、胶囊法。（2）经呼吸道染毒：（3）注射：（4）特殊途径：（5）在进行亚慢性毒性试验时，最好结合进行毒代动力学血药浓度的监测。4、剂量选择和分组一般至少应设3个剂量组和1个阴性（溶剂）对照组。低剂量组中剂量组高剂量组阴性对照组组距：3~10倍，最低不小于2倍高剂量组应能引起明显的毒性或少量动物的死亡（少于10%）。低剂量组应无中毒反应，相当于未观察到损害作用剂量（NOAEL）。高低剂量组间设置1个中剂量组，比较理想的中剂量组约相当于观察到有害作用的最低剂量（LOAEL）。原则是，尽量控制在受试动物在整个试验期既不发生死亡，又有明显毒性反应。各组剂量设计的依据：①高剂量组：以急性毒性的阈剂量作为亚慢性毒性试验的最高剂量。或以该受试物LD50的1/20～1/5作为最高剂量②一般在LD50的1/10～1/50之间按等比级数设计其它各组。5.观察指标1234（1）一般性指标包括每日采食量、体重变化（定期称量）、外观特征（被毛光泽、精神状态、呼吸动作、分泌物、排泄物、饮食、活动、行为等）、异常表现和中毒症状等。食物利用率：记录每日饲料消耗量，计算食物利用率（每摄入100g饲料所增长的体重克数）。体重减少是影响了食欲还是消化和吸收。（2）生理生化指标l）血液学检查2）血液生化检查通常为血清天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、尿素氮（BUN）、总蛋白（TP）、清蛋白（ALB）、血糖（GLU）、总胆红素（T-BIL）、肌酐（Crea）、总胆固醇（T-CHO）等。尿液检查包括外观、pH值、蛋白、糖、潜血和沉淀物镜检等，可提供与毒物有关的靶器官毒性和中间代谢产物的信息。（3）系统剖检和组织病理学检查 动物固定在解剖板上，解剖颈部(颌下腺、腮腺、局部淋巴结等)↓取一侧乳腺及腹部皮肤；开腹并扩展切口(胰、脾、生殖器官、肾、肾上腺、直肠、胃、十二指肠、空肠、回肠、肠系膜淋巴结、肝脏等)↓开胸(舌、喉、气管、甲状腺、甲状旁腺、食管、心、肺、胸腺)↓剥离左后肢(肌肉、坐骨神经、股骨)；头皮、耳；↓开颅(颅神经、脑组织、垂体)；暴露脊髓(取出脊髓)1）系统解剖：包括肉眼观察2）脏器重量和脏器系数一般称取心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、卵巢或睾丸、脑等脏器湿重，并计算其脏器系数。也称脏体比值，是指某个脏器的湿重与单位体重的比值，通常以100g或1g体重计。此指标的意义是实验动物在不同年龄期，其各脏器与体重之间重量比值有一定规律；若受试化合物使某个脏器受到损害，则此比值就会发生改变。脏体比值是一个灵敏、有效和经济的指标。3）病理学检查目的是确定化学毒物对机体毒作用的靶部位、损害的性质和程度。病理学检查包括：大体检查、常规组织病理学检查、酶组织化学检查、免疫组织化学检查、细胞超微结构检查等。四、亚慢性毒性作用评价数据分析对试验组和对照组数据根据统计学方法处理，看是否有显著差异、剂量－效应关系和时间－效应关系。以及各项指标之间的相关性。如某物质的亚慢性毒性无作用剂量（NOAEL）小于或等于人的可能摄入量的100倍，则表示毒性很强，应放弃该化学物的使用：在100～300倍之间者，可进行慢性毒性试验；若大于或等于300倍者则不必进行慢性试验，可直接进行毒性评价。一、蓄积毒性作用的基本概念二、蓄积作用的研究方法第三节蓄积毒性作用一、基本概念多次间隔给予小剂量受试物，当给予受试物的时间间隔和剂量超过机体的解毒和排泄能力时，导致受试物在体内蓄积，由此引起的毒性作用称为蓄积毒性作用。1.了解受试物是否具有蓄积作用及蓄积性大小如何;2.评定该化合物是否可引起潜在的慢性毒性危害;3.为制订该物质在食品中的卫生限量 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 时，安全系数的选择提供依据。4.确定该受试物是否可以用于食品供人类长期食用。（二）目的：*物质蓄积：是指机体少量反复多次接触毒物后，该毒物在机体内逐渐积累。可以用一定的分析方法检测出体内该物质或其代谢产物在体内的增加过程，这种累计随着时间延长而含量增加，当达到中毒阈值时而产生毒性作用。功能蓄积：是指机体少量反复多次接触化学毒物或其他形式的危害物，每次引起的轻微功能损害逐渐积累，当积累到一定程度时出现毒性效应，而这时用检测手段却查不出体内毒物的的存在或增加。蓄积毒性作用产生的因素（1）与接触剂量大小和时间间隔有关（2）与毒物本身的性质有关脂溶性物质水溶性物质贮存库：如血浆蛋白、脂肪组织、肝脏、肾脏、骨骼等是某些毒物的常见贮存库。（3）与动物种属的代谢特点有关二、蓄积作用的研究方法蓄积毒性作用的研究方法有多种，常用方法有蓄积系数法和生物半减期法。（一）蓄积系数法蓄积系数是多次染毒使半数动物出现效应（或死亡）的蓄积剂量［ED50(n)］与一次染毒使半数动物出现相同效应（或死亡）的剂量[ED50(1)]的比值，即：在毒理学中研究化学毒物蓄积作用多选择动物来进行，以动物死亡一半为效应指标，那么上式可改写为：∑LD50(n)K=LD50(1)K值越小，表示化学毒物的蓄积性越大。实验动物对化学毒物发生过敏现象，则可能出现K<1。随着化学毒物蓄积作用减弱，K值增加，通常认为K≥5，其蓄积毒性极弱。1、固定剂量法测定蓄积系数法常选用大、小鼠等小型实验动物，染毒途径多用经口灌胃或腹腔注射。先求出某毒物的LD50，然后选取相同条件的40只（或更多）实验动物，随机分为两组：染毒试验组和对照组，每组至少20只，雌雄各半。在1/20～1/5LD50的范围内选定一个剂量，每日以固定剂量，定时和相同途径对试验组进行染毒，观察记录动物死亡数。当试验组累积发生一半动物死亡即可终止试验。此时，计算累积总接触剂量，根据 公式 小学单位换算公式大全免费下载公式下载行测公式大全下载excel公式下载逻辑回归公式下载 计算K值，然后依上表进行评价。若接触剂量已累积达到5个LD50剂量，也可终止试验，此时计算出K＞5。固定剂量法试验期为25～100天。2、剂量递增法试验方案同上，实验开始时按0.1LD50剂量给予试验组染毒，以4天为一期，每期增加1.5倍。第一个四天按0.1LD50×4天第二个四天按0.15LD50×4天第三个四天按0.22LD50×4天……依次类推。这一方案试验期最长28天。在试验期间，当化学毒物引起动物累积死亡一半时即可终止试验，计算K值进行评价。一般来说，在试验第21天也可结束试验，因为这之前如果动物没有死亡或死亡数不足一半，说明其累积量已达5.26LD50，即K＞5。3、剂量固定的20天蓄积法该法是基于蓄积系数的原理而设计的。它通常采用经口灌胃染毒方式，将动物随机分为5个组，包括阴性对照组和1/20LD50、l/10LD50、l/5LD50和1/2LD50四个剂量组，每组动物数10只，雌雄各半。每日染毒一次，连续染毒20天。观察每组雌雄合计的死亡动物数量。试验结束时根据下列标准进行评定：①1/20LD50组有死亡，且各组呈剂量-反应关系，则为强蓄积性；②1/20LD50组无死亡，且各组呈剂量-反应关系，则为中等蓄积性；③1/20LD50组无死亡，各组也不呈剂量-反应关系，则为无明显蓄积性；④如仅1/2LD50组有死亡，其他组均无死亡，则为弱蓄积性。（二）生物半减期法生物半减期(BiologicalHalf-life,BL,T1/2)，指化学物质进入体内以后，在体内每减少一半所需的时间。对同一化合物在同一种动物体内是一恒值。生物半减期法（t1/2）是用毒物动力学原理描述化学毒物在机体内的蓄积作用。化学毒物在体内蓄积的速度和量与机体单位时间内吸收该物质的速度以及清除速度有关。一般来说，tl/2较短的化学毒物达到蓄积极限所需的时间也短，t1/2长者达到蓄积极限的时间也长。一种化学毒物若以tl/2相等的时间间距染毒，其在体内经过6个t1/2的接触期就可以基本上达到蓄积的极限，此时理论蓄积量达到极限的98.4％。此后即使继续接触该物质，机体内的蓄积量基本上也不会增加。蓄积过程:第一个BL(T1/2)末蓄积量=L×50%第二个BL(T1/2)末蓄积量=L×75%第三个BL(T1/2)末蓄积量=L×87.5%第四个BL(T1/2)末蓄积量=L×93.75%第五个BL(T1/2)末蓄积量=L×96.88%第六个BL(T1/2)末蓄积量=L×98.44%　　一般经过6个生物半减期　即可达蓄积极限值根据tl/2=0.693Ke，通过动物血浆中化学毒物浓度求得tl/2。蓄积极限值A∞——蓄积极限值（mg）a——单位时间内毒物的吸收量（mg/d）T1/2——生物半减期（d）应用：　　可根据一个化合物的t1/2值，计算出它在人体内达到的A∞值，并可计算出达到Ｌ值所需的时间一、慢性毒性的概念二、慢性毒性试验的目的三、慢性毒性试验方法要点四、慢性毒性试验的注意事项第四节慢性毒性试验设计一、慢性毒性的概念是指实验动物或人长期（甚至终生）反复接触外源化学物所产生的毒性效应。所谓“长期”，一般是指2年。对大鼠相当于终生染毒，对兔相当于生命期的36%，对犬为20%，对猴为13％。对于有些远期毒性评价，试验期要求达到7~10年，甚至在有些动物上要包括若干代试验。1、研究慢性毒性剂量-反应（效应）关系。确定长期接触造成有害作用的最低剂量（LOAEL)或阈剂量和未造成有害作用的剂量（NOAEL)；2、为制定外来化学物质在食品中的安全限量，如人体ADI值，最高残留限量MRL值，以及为危险度评价与管理提供毒理学依据；3、观察慢性毒性效应谱、毒作用特点和毒作用靶器官，为毒性机制研究和将毒性结果外推到人提供依据。二、慢性毒性试验的目的三、慢性毒性试验方法要点1、实验动物的选择实际工作中大多用大鼠、犬和猴。年龄：刚断乳的动物小白鼠3周龄大白鼠3~4周龄犬4~6周龄动物数量要明显多于亚慢性试验，每组大鼠40～60只，犬8～12只，雌雄各半。试验结束时，每一性别啮齿类动物数不少于10只，非啮齿类不少于4只。2、染毒途径和时限染毒方法和途径尽量选择和人类接触途径相似的方式。一般采用经口染毒，多采用饲喂法。研究工业毒物一般认为染毒6个月或更长时间，环境毒物与食品的慢性毒性试验染毒期则要求1年以上或2年。3、剂量分组高剂量组不能出现明显中毒，但要有轻微毒性反应；中剂量组应为慢性毒性作用的阈值剂量；低剂量组应为慢性毒性的最大无作用剂量组（NOAEL）。剂量分组：一般设3个染毒剂量组和1个对照组，必要时另设1个溶剂对照组。一般认为以亚慢性毒性试验的LOAEL等确定。以其1/5～1/2为高剂量组，以1/50～1/10为中剂量组，1/100为低剂量组。如无亚慢性试验资料，可以参照LD50值设计剂量。如以l/10LD50，为高剂量组，1/100LD50为中剂量组，l/l000LD50为低剂量组。组间剂量差一般以5～10倍为宜，最低不小于2倍。4、观察指标一般性指标、实验室检查、病理学检查及其它特异性指标的检查四方面。以亚慢性毒性试验所提供的毒效应和靶器官为基础，重点观察在亚慢性毒性试验中已经显现的阳性指标。优先采用亚慢性毒性试验筛选出来的敏感指标或特异性指标。四、慢性毒性试验的注意事项1、实验动物环境的要求实验动物的饲养和试验环境规范化十分重要。2、检测条件的控制3、重视试验前和对照组的检测，动态地、密切地观察检测试验全过程各项指标的变化。慢性毒性作用评价慢性毒性试验所得的最大无作用剂量（以mg/kg体重计）≤人群的可能摄入量的50倍者，表示毒性较强，应予以放弃；在50～100倍之间者，需相关专家共同评议；大于或等于100倍者，则可考虑允许使用于食品，并制定卫生标准。慢性阈剂量和最大无作用剂量越小，卫生标准要求越严格。*