紫杉醇纳米脂质体的制备与大鼠体内药动学

一 , 中国新药杂志 年第 巧 卷第 期 紫杉醇纳米脂质体的制备与大鼠体 内药动学 王青松 , 沙先谊 , 韩丽妹 , 郭 洁 , 方晓玲 复旦 大学药学院药剂教研 室 , 上海 〔摘要 〕 目的 制备紫杉醇新型纳米脂质体并研 究其在大 鼠体 内的药动学 。 方法 采用 薄膜分散超声结合冷 冻干燥制备紫杉醇纳米脂质体 。 大 鼠尾静脉注 射紫杉醇脂 质体及 市售紫杉醇注 射液 , 血 浆样品经 乙醚提取 后用反 相高效液相色谱法 一 检测血 桨紫杉醇浓度 , 并用 软件包估算药动学参数 。 色谱条件如下 色 谱柱 为 , , , , , , 拜 , , 流动相为 · 一 ’乙 酸按缓冲液 一 乙睛 , 流速 · , 检测波长 , 地西 浮为内标 。 结果 制 备的紫杉醇纳米脂质体的体积权重粒径为 士 , 包封率大于 , 符合药典 规定 关于下班后关闭电源的规定党章中关于入党时间的规定公务员考核规定下载规定办法文件下载宁波关于闷顶的规定 , 且 内与葡萄糖注射液配 伍稳定 。 紫杉醇脂质体及 市售紫杉醇注 射液 经 大 鼠尾 静脉注 射后 均符合二 室模型 脂质体组 的消除半衰期 显著长于 组 〔 士 , 〕其 他 药 动学参数 经 方 差分 析均 无 显 著性差 异 。 紫杉 醇脂 质体 与 的 。 , 、 比 值 为 。 结论 制备的紫杉醇纳米脂质体在大 鼠体 内的药动物参数与市售紫杉醇注 射液 比较 , 稍有延 长 , 。 值 相近 。 关键词 」 紫衫醇 纳米脂质体 药动学 【中图分类号 , 〔文献标识码 文章编号 〕 一 一 一 一 , , 一 , 一 , , 一 ‘ , 叮 , , , 仁 」 。 一 ‘,二 一 一 , 并 , 一 , · 一 ’ , 。 · 一 ’ , , 士 一 一 一 , 士 士 , · 〔 紫杉醇 , 是从 超 过 个 天然化合物抗 癌活性 筛选 中发 现 的杰 出成果 , 美 国国立癌症研究所 , 称 为近 年来化疗药 物研究 中最 重大 的进展之一 。 具有独特 的微管稳定作用 而 被 广泛用于乳腺癌 、 卵巢癌 、前列腺癌 、 头颈部肿瘤 、 非小细胞 性 肿瘤 以及 类 风湿性 关 节 炎 的治疗川 。 化学结构 为 一双 褚的 伪生 物 碱 , 化学 结 构式 一 一 如图 。 图 紫杉醇的化学结构 , 水 中溶解 度仅为 · 一 ’。 由于分子结 构的复杂性 , 改变 值 、 成盐 、 加人助溶 剂等方法 都不能很好地解决其溶解度 问题 〔了。 普通 〕叮 上 市制剂处方 中增溶剂为聚 氧 乙烯蓖麻油 一无水 乙醇 , 该制剂临床疗效确切 , 但 由于 处方 中 叩 引起 的急性过敏毒性很大 , 因 此临床要求使用特殊 的输液器械 , 并在使用前给予 抗过敏类预防药物 , 即使如此仍有超过 的严重过 敏反应发生 , 甚至可引起死亡 , 这大大限制 了 的 临床应用 。 因此对 新剂型 的研究一直以来都非 常活跃 。 已经报道的剂型主要包括脂质体 、血红蛋 白 结合物 、纳米粒 、胶束 、微球 、包合物 、微乳等 〔 〕。 国外从 世 纪 年代初就 已经开始 脂 质体研究 , 结果表明制成脂质体后 明显降低 了毒性 , 且保持 了 与市售 注 射液 相 同的抗肿 瘤 活 性 。 国内也 有相 关 研 究 报 道风 〕, 并 在 年 上 市 了 脂质体 , 商品名力朴素 。 但 国内脂质体制剂 的 开发仍局限在使用磷脂 胆 固醇 的脂质体处方 ’〕, 冻干品复溶后粒径增大 , 药物易泄漏析出 。 本研究 制备了包封率高稳定性好 的纳米脂质体 , 并对 脂质体及市售注射剂 在大 鼠体 内的药动学 进行 比较 。 材料与方法 药物 、试剂 、 仪器与实验动物 脂质体 自制 注射液 商品名 , 公司 甲醇 江苏汉邦科技有限 责任公 司 , 色谱纯 乙 睛 记 , , 色谱纯 肝素钠 上 海第一生化药业 有限公 司 , 生 化试剂 无水 乙 醚 中国医药上海化 学试剂公 司 , 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 纯 地西伴对照 品 上海 药 品检验所 , 纯度 重蒸水 自制 。 “ 型 电位 及 粒 度 测 定 仪 美 国 公司 一 探头超声波细 胞粉碎仪 宁波新芝生物科技股份有限公司 冷冻 干燥机 一 一 型涡漩混合器 上海 医 科 大学 仪 器 厂 一 台式 离 心 机 上海 安 亭科 学 仪器 厂 岛 津 高效 液 相 色谱仪 公 司 , 包 括 一 紫外检测 器 与 一 泵 色谱柱 , 拜 及 保 护 柱 公 司 。 。 一 超滤 管 截流相对分子质量 , 美 国 公司 。 只健康 大鼠 , 雌雄各半 , 体重 士 , 中国新药杂志 年第 巧 卷第 期 复旦大学实验动物 中心 提供 , 动物合格证号 沪 一 。 纳米脂质体的制备 称取 注射用大豆磷脂 磷脂酚胆 碱含 量 , 含磷脂酞甘油 、 磷 脂酞丝 氨酸等负 电荷脂 质 、 置 茄形 瓶 中 , 氯 仿 一 甲醇 混合溶剂 溶解完全 。 旋转蒸发器上小 心抽干有机溶剂成均匀薄膜 , 薄膜置真空干燥器 内 于燥过夜 。 以 蔗糖溶液水化干燥薄膜得白 色乳状脂 质混悬液 。 将该脂质混悬液转移至 管内 , 调整探头超声波细胞粉碎仪探头位置与功 率 , 间歇超声该乳状液 得淡蓝略带蓝色乳光的 脂质体胶体溶液 , 。 拜 微孔滤膜过滤整粒并除去 超生探头上掉下 的钦粒 。 分装到西林瓶内 , 一 ℃ 预冻 以上 , 再转移至 一 ℃预冻 冻结 , 上冻 干机冷冻干燥 得 脂质体冻干品 , 通氮气 , 压盖密封 。 ℃避光储藏 。 脂质体胶体溶液 中含大 豆磷脂 , 含量为 · 一 ’。 血浆 浓度的测定 色谱 条件 参照文献困 并进行改进 。 流动相 乙睛 一 · 一 ‘ 乙 酸钱缓 冲液 乙酸调 , 检测波长为 。 , 流速为 , · 运 一 ’ , 进 样量为 拜 血样处理 取血浆 、 , 加人 内标地西伴 · 一 ’ 拜 , 涡漩混合 、 后 , 用 无水 乙 醚提取 , 振摇 , · 一 ‘离心 。 , 取上 层有机溶剂于 ℃水浴上氮气吹干 , 用 拜 乙 睛溶解 , 取 拜 进样 分析 。 脂质体大鼠药动学研究 取 犯 只健康 大 鼠 , 随机分为两组 , 分别尾 静脉注射 二 及 脂质体注射 , 剂量按 计均为 · 一 ‘ 给药前用 葡萄糖 注射液将 稀释至含 ’ 一 ‘ 脂质体冻干品 给药前用注射用水水化 , 再用 葡萄糖注射液稀释 至含 · 一 ‘ , 于给药后 , , , , , , , , 眼眶取血 , 置肝素抗凝管中 , · 一 ’离心 , 分离血浆 , 一 ℃ 储存备用 。 数据处理方法 血药浓度数据处理方法采用中国药理学会编写的 软件包进行药动学参数计算 。 两种制剂药动学参 数的比较采用 统计分析软件进行方差分析 。 结 果 脂质体性质考察 二边业望竺鱼三卫‘醚巨 缈 , 中冈新药杂志 年第 卷第 期 形态 与粒 径 显 微镜 结 合透射 电镜 检 查 无 包封率 采 用 超 滤法测定 脂质体包 封 结晶析出 。 透射电子显微镜下观察可见圆形或 率 。 取脂质体冻干 品活 量 , 加人注射用水水化 , 静 类圆形粒子 , 如 图 。 粒度仪测 定体积权重 置 水化 完 全 得 脂 质 体 胶 体 溶 液 。 取 超 滤 粒径为 士 , 小于 。 管 , 加 人脂质体胶体溶液 , · 一 ’离 心 , 收集下 清 液 , 分析下 清液 中 含量 游 离 。 测定脂质体胶体溶液 中 总浓度 。 , 根 据 以 下 公 式 计 算包 封 率 包 封率 二 口。 一 游离 总 , 测得包封率均大于 , 符 合药典规定 。 与葡萄糖注射液配伍稳定性 冻干品复溶后 , 用 葡萄糖注射液稀释 倍 , 室温密封放置 , 图 ’ 脂质体透射电镜照 片 又 测定粒径 、包封率 , 均未发生明显变化 , 见表 。 表 脂质体冻干 品复溶后在葡萄糖注射液中 内粒径和包封率的变化 指 标 、 , 卜 粒 径 , 士 土 , 士 土 士 士 包封率 呼 , , , 〕 , 血浆浓度测定方法学验证 方法 专属性 血 浆 中的 杂 质 和 内标 对 的测定无千 扰 。 和地 西 伴 的保 留时间分别为 和 , 此两峰与内源性物质分离 良好 。 以 计算柱效 , 〕 。 标 准 曲线的制 备 精 密称取 对照 品适 量 , 甲醇溶解配制成贮备液 , 将此贮备液配制成不 同 浓度 , 加人大鼠血浆中 , 使其在血浆中浓度为 , , , 的 , , 拼 · 一 ’ , 按 血样预处理方 法提取后进行测定 , 以 浓度 , 林 · 一 ’ 对 与内标的色谱峰面积比值 进行一元线性 回归 , 回 归方程和相 关 系数为 二 十 二 , 线性范围为 一 朴 · 一 ’。 回收率和精密度测定 在空 白大 鼠血浆样品 中加人不同浓度适量 贮备液 , 配制高 、 中 、 低浓 度 , , 拜 · 一 ’ 的血浆 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 样品各 份 , 按 血样 预处 理 方 法处 理 后 测 定峰面 积 另配制等浓度的 甲醇溶液直接测定 , 得峰 面积 , 计算绝对提取回收率 。 高 中低 浓 度样 品 的绝 对 回 收 率 为 一 , 为 一 。 另外对此 种浓度的标准 血浆样 品 于 内重 复测 定 次 , 分别 连 续 测 定 , 计算方法 回收率及 日内 、 日间差异 , 方法 回收率 在 一 , 在 一 。 日内 差异 在 一 , 日间 在 , 。 日内 日间差异均 小于 , 符合生 物样 品 测定要求 。 药动学结果 药浓 ·时间曲线 两种制剂的血药浓度经时曲 一 一 线见 图 。 」 魏 、‘ 脂质体 日 洁 图 静之金 — , , 月污质休 , 一 脂质体和 后药物经时曲线 , 药动 学参数 采用 程 序计算参数 。 。 对静脉给药后 的大 鼠平均血药浓度进行模型嵌合 , 根据最小 原则 可知 脂质体在大鼠体内符合二室开放模型 , 权 重为 , 相关药动学参数见表 。 对 , 叭 , , , , 凡。 , 凡 , 和 进行方差分析 , 脂质体组的 消除半衰期 日 显 著 长 于 组 「 土 、。 土 , 尸 」其他药动学参 数经方差分析均无显著性差异 。 。 ‘ 、由梯形法 计算 , 脂 质体和 的平均 。 、的 比值 为 。 结果见表 。 表 · 一 ’ 脂质体和 的药动学参数 比较 药动学参数 · 一 , 胜丫 “ 才一 入 一 ‘ 卜一 胜 一 卜 卜 · 一 、 卜 · 卜一 脂质体 土 土 , 士 士 ‘ 土 ‘ 土 土 士 土 士 土 土 绳 士 土 士 士 与 比 组 比较 , 。 尸 , 中国新药杂志 年第 巧 卷第 期 讨 论 有效的 新制剂 。 作者简介 〕 〔通讯作者 〕 王 青松 方晓玲 , 男 , 硕 士研 究生 。 , 女 , 教授 , 博士 生导师 , 主要 从事药物新剂 型研 究 。 联 系 电话 , 一 。 参 考 文 献 , , 「 介, 。 , , 一 , , , 召 ” 了 一 。 、 〕 。。嗜 。￡ , , 一 施斌 , 裴元英 紫杉醇及其制剂研究进展 」 中国 临床药学 杂志 , , 一 周卫 , 吕琦 , 翁 帼英 紫杉 醇 脂 质体在 大 鼠体 内的药 动 学 仁 〕 中国药科 一 大学学报 , , 一 张景勃 , 张志荣 紫杉醇脂质体的制备和质量 评价 LEC评价法下载LEC评价法下载评价量规免费下载学院评价表文档下载学院评价表文档下载 〔 〕华 西 药学杂志 , , 一 , , , ￡ 一 , 理 , , 一 川 飞,‘八、厂一一一 川困 大 鼠尾静脉注射 纳米脂质体和参 比制剂 , 血药浓度经时 曲线表 明 脂质体静 注后血血浆 浓度下降趋势 与注射液基本一致 各药动学参数经 方差分析 , 除消除速率常数 , 日有显著性差异 , 其 他各参数均无显著性差异 。 结果 表 明 纳米脂 质体与已报道 的普通脂 质体 〔 〕体 内行 为有很大不 同 。 周卫等川 报道该脂质体 延 长 到 , 增加 , 其他各药 动学参数也发生显著性变化 。 药动学参数的改变容易引起药效学和不 良反应 的变 化 , 对于新剂型来说需要长期毒性 和 临床实验来进 行考察 。 本研究制备的纳米脂质体不含胆 固醇 , 冻干 品 重建并使用 葡萄糖注射液稀释后脂 质体的粒径 和包封率没有发生明显改变 。 静脉给药后脂质体中 的脂质迅速和血浆 中的蛋 白发生交换 , 离开脂 质体和血浆蛋 白结合 。 故能快速释药 , 基本不改变 现有 制 剂 药 动 学 参 数 的特 点 。 有 望 在保证 现有制剂药效 的前提下不使用 叩 , 消除原有制剂的急性过敏毒性 , 为 临床提供更安全 编辑 朱振 家 接受 日期 。。 一 一 纳米雄黄抗肿瘤作用及在荷瘤小鼠组织 中的分布 徐凌云 ‘ , , 曾繁典 ’ , 叶寒青 , 杨祥 良 , 徐辉碧 ’ 华中科技大学 同济 医学院药理 系 , 生命科学与技术学院 , 武汉 摘要 」 目的 研 究纳米雄黄抗肿瘤作用和在荷瘤小 鼠体 内的分布情况 , 并与原料雄黄进行 比较 。 方 法 采用 计算抑瘤率的方法研 究纳米雄黄对动物移植瘤 生长 的影响 , 应 用 法 检测纳米雄黄对体外培养人 肿 瘤细 胞株 生长 的抑制作用 , 用 石 墨炉原子 吸收光谱 法检测荷瘤小 鼠组 织样 品砷 浓度 。 结果 纳米雄黄对小 鼠艾 氏腹水癌实 体型和小 鼠肝癌 均有抑制作用 , 且 纳米雄黄 · 一 ’剂量组 的抑瘤作用与原料雄黄 ’ 一 ‘ 剂量组 的抑 瘤作用相 当 纳米雄黄对 一 细 胞和 细 胞 的抑制作 用 强 于 原料雄黄 。 纳米雄黄 组肝 、 脾 、 肿瘤 中砷浓度 显 著高于 同剂量原料雄黄组 。 结论 纳米雄黄抗肿瘤作用 强于原料雄黄 , 并具有肝 、 脾和肿瘤组 织靶向性 。 关键词 」 纳米雄黄 抗肿瘤作用 组 织分布 仁中图分类号 〕 文献标识码 」 【文章编号 一 一 一 一 一 一 ‘ , , 一 ’ , 一 , 一 , 一 郡 蔚 , · 郡 , “ 郡 , , 〕 一 》 一 一