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基因组学之总结聚合酶链反应(PCR)技术进展综述聚合酶链反应(polymerasechainreaction，PCR)技术由于PCR简便易行、灵敏度高等优点，该技术被广泛应用于基础研究。但是，由于传统的PCR技术不能准确定量，且操作过程中易污染而使得假阳性率高等缺点，使其在临床上的应用受到限制。鉴于此，对PCR产物进行准确定量便成为迫切的需要。几经探索，先后出现了多种定量PCR(quantitativePCR，Q-PCR)方法，其中结果较为可靠的是竞争性PCR和荧光定量PCR(fluorescencequantitativePC...

聚合酶链反应(PCR)技术进展综述聚合酶链反应(polymerasechainreaction，PCR)技术由于PCR简便易行、灵敏度高等优点，该技术被广泛应用于基础研究。但是，由于传统的PCR技术不能准确定量，且操作过程中易污染而使得假阳性率高等缺点，使其在临床上的应用受到限制。鉴于此，对PCR产物进行准确定量便成为迫切的需要。几经探索，先后出现了多种定量PCR(quantitativePCR，Q-PCR) 方法，其中结果较为可靠的是竞争性PCR和荧光定量PCR(fluorescencequantitativePCR，FQ-PCR)。随着生命科学和医学检测的不断发展，人们越来越希望在保证PCR反应特异性、灵敏性、保真度的同时，能够尽量缩短反应的时间，即实现快速PCR(RapidPCRorFastPCR)。快速PCR技术不仅可使样品在有限的时间内可以尽快得到扩增，而且可以显著增加可检测的样品数量，显然，在大批量样本检测和传染病快速诊断等方面将会有重要的应用前景。例如，快速PCR在临床检测中可大大加快疾病的诊断效率；在生物恐怖袭击时能有效帮助快速鉴定可疑物中有害生物的存在与否；同时，由于PCR已经渗入到现代生物学研究的各个方面，快速PCR的实现必然可以使许多科学研究工作的进展显著加快，最终影响到整个生物学发展的速度。近年来，快速PCR技术得到了可喜的进展。从聚合酶的改进、添加剂的开发以及热循环仪的革新创造三个不同途径上分别进行的研发表明。生物的性状和生物对各种生物、理化及致病因子的应答，本质上都是基因在时间上或空间上选择性表达，即基因的差异表达的结果，因而，获取差异表达的基因信息，将有助于了解生物的生理变化和病理改变的分子机制。研究基因差异表达主要技术有：消减文库筛选、差异杂交、代表性差异分析、基因表达序列分析、电子消减技术和mRNA差异显示PCR技术等(mRNADifferentialDisplayPCR，简称DD-PCR[4])。迄今为止，上面的几种方法已成功地用于基因差异表达的研究。尤其是mRNA差异显示PCR技术，虽然发明只有短短十几年，已经取得了令人瞩目的科研成果，原因是它具备需要总RNA的量极少，不需要纯化的mRNA，操作简便、快速、灵敏等优点，故已被许多生命科学实验室作为一种重要工具，应用于体内和体外差异表达基因的筛选，研究基因功能。基因分析的定量化是对基因诊断的要求和未来发展的趋势。总的来说，定量PCR技术的研究方兴未艾，还有诸多问题有待解决，如竞争性PCR中竞争性模板制备较难，且与待测模板的扩增效率也难以达到完全相同；Taqman技术中Taq酶的外切酶活性能影响定量；AmpliSensor技术仍无法区分引物二聚体形成的非特异扩增信号，且每次PCR反应前需进行AmpliSensor标记，增加了操作步骤及成本；分子信标技术所用探针与模板结合的稳定性还不理想；以及Lightcycler技术因两个探针均与模板结合而影响了扩增效率等；此外，荧光定量PCR技术均存在探针标记的成本较高，不便普及的问题，分析灵敏度仍需不断提高。以上表明对定量PCR技术的研究还需不断深入。相信在不久的将来，会有结果更精确、成本更低的定量PCR技术出现，在实验研究及临床诊断上得到广泛的应用。PCR技术总体来讲已经成为一个较为成熟的技术，但随着研究和应用领域不断增长的新需求，PCR仍存在相当巨大的改进空间。这其中，快速PCR技术的探索无疑是一项重要的拓展工作。如上所述，通过提高酶的活性、加入适合的添加剂以及对热循环仪中使用的温度改变方式进行改进，已经从不同程度上实现了快速PCR。如果能将三者的优势有机地结合起来，则扩增速度有望进一步提高我们认为，针对该技术的面向普及应用的评价仍需深入，在实际使用过程中也不能单纯盲目地求快，而应当根据研究对象的不同，在保证PCR反应的特异性、灵敏性以及高产量的情况下实现快速PCR。从目前的研究结果看，各种快速PCR试剂(包括酶，添加剂)在PCR反应的特异性、灵敏度、产量方面的系统评价显然不够，应该引起研究者的重视。随着更多新方法的发明，随着各学科间交叉合作的深入，快速PCR技术会进一步完善和系统化，给所有生物学工作者带来新的惊喜。mRNA差异显示PCR是一种比较灵活、全面的检测细胞和组织差异表达基因的方法，该方法具有其他许多方法无法比拟的优点，但是也存在一些问题，近年来的科学研究针对一些问题已经做了改进，人们相信，随着时间的推移，该方法必然在促进差异基因的研究中作出更大贡献。

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