实验7-ACE基因多态性分析实验7-ACE基因多态性分析实验概要实验目的实验原理实验操作结果和分析注意事项思考题一、实验目的从微量来源的组织细胞中抽提基因组DNAPCR法分析基因多态性分析基因组DNA来源：颊粘膜上皮细胞二、实验原理基因组DNA抽提碱裂解法抽提基因组DNA（本实验）用蛋白酶K和苯酚提取大分子DNA裂解-蛋白酶K-沉淀法快速提取DNAACE基因多态性分析PCR方法分析基因多态性ACE基因多态性分析(血管紧张素转换酶,Angiotensinconvertingenzyme,ACE)基因诊断：利用现代分子生物学和分子遗传学的方法，从...
实验7-ACE基因多态性分析实验概要实验目的实验原理实验操作结果和分析注意事项思考题一、实验目的从微量来源的组织细胞中抽提基因组DNAPCR法分析基因多态性分析基因组DNA来源：颊粘膜上皮细胞二、实验原理基因组DNA抽提碱裂解法抽提基因组DNA（本实验）用蛋白酶K和苯酚提取大分子DNA裂解-蛋白酶K-沉淀法快速提取DNAACE基因多态性分析PCR方法分析基因多态性ACE基因多态性分析(血管紧张素转换酶,Angiotensinconvertingenzyme,ACE)基因诊断：利用现代分子生物学和分子遗传学的方法，从DNA、RNA水平检测基因的存在、结构异常和表达状态，从而对疾病做出诊断的方法。基因多态性：指在一随机婚配的群体中，染色体同一基因座位点上有两种或两种以上的基因型，它可决定人体对疾病的易感性、临床表现多样性和对药物治疗反应的差异性。真核生物基因组中非编码序列多于编码序列基因组编码序列非编码序列调控序列重复序列串联重复序列（串联排列：大卫星、小卫星、微卫星）散在重复序列（散在分布：Alu家族）重复单位长度：1-几千bp；重复次数：几次-几百万次Alu家族重复单位：300bp左右；130+31+130bp具Alu酶切位点30-50万次功能：基因调控Alu元件的插入、删除和重组与许多先天性遗传疾病和癌症相关淋巴细胞染色体：绿色为Alu序列ACE基因分析的理论基础ACE基因第16内含子存在一段长度为287bp（Alu序列）的插入/缺失（I/D）多态性片段，I/D多态性与血液ACE水平有明确关系，DD型ACE水平最高，ID次之，II最低。左室肥大患者中DD型频率明显增高。实验原理以DNA为模板，ACE基因特异的引物序列位于287bp插入/缺失片段的两侧进行PCR扩增，故II型扩增片段长度约为490bp，DD型扩增片段长度约为190bp，ID型扩增片段为２个，分别为190bp和490bp。根据PCR扩增片段的大小可进行多态性分析。插入片段插入型（I型）缺失型（D型）三、操作步骤基因组DNA抽提PCR反应琼脂糖凝胶电泳检测1.基因组DNA抽提溶液Ⅰ10ml漱口20秒收集漱口水；3000g×5min×RT，弃上清；溶液Ⅱ250μl重悬沉淀；3000g×1min，弃上清； 溶液Ⅲ250μl重悬沉淀，振荡10秒；（变性）转至1.5ml离心管，99℃×5min；加溶液IV50μl振荡5秒；（中和）3000g×5min，上清转移至新0.5ml离心管，取5ul用于PCR.(4%蔗糖溶液)(NaOH)(Tris-HCl)2.PCR反应取消毒的0.2ml离心管，加入下列成分：2×PCRBuffermix10μlDNA模板5μl引物混合物(10μMeach)2μlddH2O3μl 总体系20μl扩增程序为：94℃变性5min94℃变性30s55℃复性30s72℃延伸40s72℃延伸10min,4℃保存35个循环3.琼脂糖电泳检测制备1.5％琼脂糖凝胶点样，电泳紫外灯下观察结果四、实验结果：ACE基因多态性电泳图2k1k750bp500bp250bp100bp五、注意事项1.清洁口腔，充分漱口。2.裂解细胞后震荡时间不易长，以免DNA断裂。六、思考题1.何为基因多态性？2.基因多态性的临床意义有哪些？
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