null 实验四 柱层析分离芦丁和槲皮素以及聚酰胺TLC鉴定芦丁和槲皮素 实验四 柱层析分离芦丁和槲皮素以及聚酰胺TLC鉴定芦丁和槲皮素 一 、实验目的
一 、实验目的
掌握用聚酰胺柱层析分离芦丁和槲皮素的
方法
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。二、实验原理二、实验原理1. 槲皮素与芦丁的结构槲皮素芦丁二、实验原理二、实验原理根据聚酰胺的“双重功能”来进行分离。
一）．比较黄酮苷
1. 展开剂的极性较大（水溶性溶剂所占比例>50%）时，如：含水醇或水：甲醇：丁酮：乙酰丙酮=65：15：15：5; 洗脱先后顺序:
三糖苷>双糖苷>单糖苷>苷元
理论: 用反相色谱理论来解释。二、实验原理二、实验原理2）. 展开剂的极性较小（脂溶性溶剂所占比例>50%）时，如：苯：丁酮：甲醇 = 60：20：20; 洗脱先后顺序:
极性小的先洗脱，极性大的后洗脱。
用正相色谱理论来解释。二、实验原理二、实验原理二）．黄酮苷元之间的比较：
用氢键吸附的原理来解释。二、实验原理二、实验原理 本实验利用聚酰胺在乙醇-水系统中，洗脱原理与RP-18的洗脱原理类似，因此，芦丁先从聚酰胺柱上洗脱出来，槲皮素后从聚酰胺柱上洗脱出来。三．实验操作步骤三．实验操作步骤（一） 柱层析分离芦丁和槲皮素
1. 装柱 聚酰胺5g，加水50ml，搅匀，倒入层析柱中（打开层析柱活塞，让水滴出，让聚酰胺自由沉降而填实。注意保持液面1cm高度。） 三．实验操作步骤三．实验操作步骤2. 加样 芦丁和槲皮素各0.03g ,加甲醇2ml溶解，加聚酰胺0.03 g，在水浴上除尽甲醇，将所拌样品轻轻的置于柱上端。
3. 洗脱 加好样品后，先用50%的乙醇冲洗，
待两层析带之间的距离约1cm后，再用90%的
乙醇冲洗。三．实验操作步骤三．实验操作步骤4. 收集 用试管收集，每试管接收30 ml。
5. 检测 分离结果用TLC检测。（二）芦丁和槲皮素聚酰胺色谱柱层析后的试样进行聚酰胺薄膜层析操作（二）芦丁和槲皮素聚酰胺色谱柱层析后的试样进行聚酰胺薄膜层析操作1. 配制展开剂，甲醇：丙酮：苯＝8：1：1
2. 将展开剂倒入展开缸中，展开缸中展开剂的高度4mm左右。
3. 画基线，基线距底边1.0～1.5cm；
4. 点样（点样顺序：试样1、试样2、芦丁、槲皮素)，点样一般为圆点，点样直径一般不大于2 mm，点样时必须注意勿伤薄层
表
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面。（二）芦丁和槲皮素聚酰胺色谱柱层析后的试样进行聚酰胺薄膜层析操作（二）芦丁和槲皮素聚酰胺色谱柱层析后的试样进行聚酰胺薄膜层析操作5. 将点好样品的聚酰胺薄膜放入展开缸中无展开剂的一侧预饱和15min。
6. 倾斜展开缸，使展开剂到入展开缸的另一个槽中，聚酰胺薄膜浸入展开剂的深度为距圆点5 mm为宜，一般展距为8 cm,取出薄层板，晾干。
7. 喷1％的AlCl3显色。
8. 实验结果见图1。 四．体会与讨论
四．体会与讨论
1. 画出聚酰胺薄膜层析鉴定芦丁和槲皮素
分析
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图
浙公网安备 33021202002483