从小鼠肺中分离仙台病毒和检出仙台病毒抗原的研究
群 ,离乳合并 1 周内的 4 , 6 周龄的小鼠 29 只 。人工感染者用仙台病毒 D95 株 516 × 3 10TC ID50/ 0 . 02 ml 滴鼻感染无仙台病毒抗体 SP F 小鼠 10 只和有仙台病毒抗体的小鼠 19
只 ,感染后 4,7d 处死检查 。
2 标本制备 以上小鼠处死后取肺做成 10 %的肺悬液 ,2500rp m 离心 20 min ,取上清冻 存于 - 30 ?备作病毒分离 , 另取气管和肺 , 洗涤去血液 , 用剪刀剪成小块 , 添加 p H712 PB S
2 ml ,用吸管轻轻吹打下来 ,低速离心去上清 ,用沉淀物滴在多孔玻片上 ,以细胞分散不重叠为
佳 ,每标本滴 2 块玻片 ,每玻片滴 12 孔 ,吹干 ,冷丙酮固定 10 min ,干后 ,冻存于 - 30 ?备用 。
( ) ( ) 一块作免疫荧光法 IFA,另一块作免疫酶法 I EA,然后按常规分别检查 。
( ) 3 病毒分离 按常规方法将上述标本接种于 9,10 日龄鸡胚尿囊腔 ,鸡胚 C E细胞和 ( ) ( ) ( ) 猴肾 M K细胞 。以血凝 HA或血吸附 HAd作指标以判定结果 ,并以仙台病毒免疫血清作
( ) 血凝抑制 H I试验作鉴定 。
( ) 4 免疫酶法 I EA仙台病毒阳性血清采自用仙台病毒免疫的 SP F 小鼠 ,阴性血清采自
无仙台病毒感染的 SP F 小鼠和采自仙台病毒抗体阴性 ,鼠肝炎病毒抗体阳性小鼠 ,酶联葡萄
() 球菌蛋白 A 酶 - SPA,SPA 纯品购自上海生物制品所 ,按 Wilso n 方法进行标记 。具体操作 :
待检标本滴加仙台病毒阳性血清 4 孔 ,两种阴性血清各两孔 。PB S4 孔 ,作用后滴加酶 - SPA ,
( 滴加 PB S 者有两孔不加酶 - SPA ,以作内原性酶的对照 。然后用底物液染色 底物液用 1983 1 年 Cevenini 的配方,文献即 3 ,3 二氨基联苯胺 4 mg ,丙酮 0 . 5 ml ,p H7 . 3 PB S 10 ml ,33 %双氧
μ水 10l 15 min ,镜检 。阳性血清孔内阳性细胞染成棕色 ,各对照孔内的细胞无颜色反应即能 判定结果 。
( )( 5 间接免疫荧光法 IFA仙台病毒阳性 ,阴性血清同免疫酶法 , 抗小鼠 Ig G 荧光血清
来自美国 Lo bund 实验室 。待检标本如免疫酶法滴加阳性 ,阴性血清和 PB S ,作用后滴加小鼠Ig G 荧光抗体 ,滴加 PB S 者有 2 孔不滴加荧光抗体作自发荧光对照 。阳性血清孔内阳性细胞 发绿色荧光 ,各对照孔的细胞无荧光反应 ,即能判定结果 。
结果和讨论
1 病毒分离结果见附
表
关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf
,待检标本接种鸡胚尿囊腔的方法最敏感 ,接种 M K 细胞次之 ,
( ) 而接种 C E 细胞最低 。接种标本的第一代鸡胚尿液血凝素 HA滴度很低 , 原液只有“ 6 ,8 ”,而传至第二代 , HA 滴度可达 1?32 或更高 。同样接种标本的第一代 M K 和 C E 细胞 ,血吸 ( )( 附HAd“ + , 6 ; , HA 不明显 ,传至第二代 , HAd 加强 , HA 明显 M K 细胞 1 ?32 或更高 , C E
) 细胞 1?2,1?32。鉴于上述情况 ,以上三种方法都需要传 2 代才能判定结果 。分离病毒的代
() 表株与仙台病毒的参考株 来自中国预防医学科学院病毒所作交互 H I 试验 ,结果抗原比为
1107?1 ,可见两株病毒抗原性一致 。
C E 细胞来源容易 ,仍不失为可选用的细胞 。此外 ,我们还试用了 B H K - 21 ,Vero 和 MA- 104 等传代细胞 ,均能支持仙台病毒的繁殖 ,但病毒产量随传代次数增多而减少 ,故不适用 于病毒分离工作 。
2 I EA 和 IFA 检出仙台病毒抗原I EA 和 IFA 的检出率较病毒分离率低 , I EA 和 IFA与病毒分离的符合率各为 8212 %和 80 % 。I EA 和 IFA 的符合率为 8818 % ,全部标本未发现
() 有内源性酶和自发荧光 见附表。
仙台病毒的分离和仙台病毒抗原检出的比较附表
病 毒 分 离I EA IFA 鸡胚细胞细胞CE M K 标本检查数( )( )阳性数% 阳性数% ( )( )( )阳性数% 阳性数% 阳性数%
13 ( )( )( ) 10 76192 8 61154 9 69123 未作未作 ( ) ( ) ( ) ( ) 45 17 3717813 28189未作 5 3313312 26167
I EA 和 IFA 检出仙台病毒抗原方法简便 ,快速 ,当天可以出结果 ,对确诊病毒抗原有实际2 () 使用价值 ,Maeda1984使用 IFA 检查自然和人工感染仙台病毒的小鼠和大鼠气管细胞和 肺细胞的仙台病毒抗原 ,并和病毒分离相比较 ,结果表明 IFA 检出气管细胞的仙台病毒抗原 的检出率和仙台病毒的分离率基本一致 ,而 IFA 检出肺细胞的仙台病毒抗原的检出率明显低 于病毒分离率 。我们采用气管细胞和肺细胞混合涂片 ,结果 I EA 和 IFA 检出仙台病毒抗原的 检出率只低于病毒的分离率 。
() I EA 因不需要特殊设备 荧光显微镜更显出其优越性 。普通实验室均能做并容易推广 ,
因一般常用的底物液染色阳性细胞着色太浅 ,判定结果有困难 ,我们改用 Cevenini 的底物配1 方,阳性细胞的着色加深 ,从而提高了诊断的准确性和检出率 。
意见和建议 。
另外 ,会议还通过了“中国实验动物学会第三届理事会常务理事及工作人员分工”、“中国
实验动物学会学科专业委员会负责人名单”、“全国各省 、市 、自治区及相关部委联络执行委员 名单”“、中国实验动物学会授予荣誉人员的名单”,大会同意增选中国医学科学院实验动物研 究所所长刘一农教授为中国实验动物学会第三届理事会副理事长 。刘一农教授在会上作了 “国际实验动物动态的报告”。
此次会议的成功召开 ,对今后我国的实验动物科学事业的发展 ,尤其是对中国实验动物学 会今后的建设及健康发展 ,无疑起到了巨大的推动作用 。为我国的实验动物科学事业以更大
() 赵宏旭的步伐跨入二十一世纪 ,树立了又一个里程碑 。
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