沙门氏菌生化鉴定
沙门氏菌生化试验判定步骤
表
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三糖铁琼脂 赖氨酸脱羧酶 初步判断 斜面 底层 产气 硫化氢
产碱 红 产酸 黄 ,(,) ,(,) 黑 , 紫 可疑沙门氏菌 产碱 红 产酸 黄 ,(,) ,(,) 黑 , 黄 可疑沙门氏菌 产酸 黄 产酸 黄 ,(,) ,(,) 黑 , 紫 可疑沙门氏菌 三糖铁琼脂原理
分析
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:本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。用于观察细菌对糖的利用和硫化氢(变黑)的产生。该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1,只能利用葡萄糖的细菌,葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄,但因量少,生成的少量酸,因接触空气而氧化,加之细菌利用培养基中含氮物质,生成碱性产物,故使斜面后来又变红,底部由于是在厌氧状态下,酸类不被氧化,所以仍保持黄色。而发酵乳糖的细菌(e.coli),则产生大量的酸,使整个培养基呈现黄色。如培养基接种后产生黑色沉淀,是因为某些细菌能分解含硫氨基酸,生成硫化氢,硫化氢和培养基中的铁盐反应,生成黑色的硫化亚铁沉淀。
底层产酸:是因为细菌分解糖类物质使酚红退色变黄。
斜面产碱,低层产酸:是细菌分解葡萄糖(不能分解乳糖和蔗糖),由于量较少进而分解蛋白胨而产碱变红。因为底层是厌氧环境,葡萄糖分解慢,,,小时培养后还没分解蛋白胨产碱;而斜面是需氧环境分解较快,一般,小时左右就把葡萄糖分解完(此时斜面也是酸性),但继而分解蛋白胨产碱,斜面又转为碱性。
2,志贺氏菌:都能分解葡萄糖,产酸不产气,大多不发酵乳糖,
不产生H2S。
4,大肠杆菌:能分解葡萄糖产酸产气,大多数能分解乳糖,不产
生H2S。
3,沙门氏菌:能分解葡萄糖,不发酵乳糖,大多数产生H2S,多
数产气。
赖氨酸脱羧酶试验
1、试验管及对照管均要加一层约10mm厚的灭菌石蜡或矿物油以覆盖表面,此可使培养基中的溶解氧通过细菌消耗掉,并控制培养基的pH。
2、阳性试验管培养初期(10—12h)因发酵葡萄糖产酸变黄,继续培养由于氨基酸脱羧产生胺类而使培养基由酸变碱,故又由黄变为紫色。阴性试验管则始终呈黄色。
氨基酸脱羧酶试验 (1)原理:某些细菌可产生氨基酸脱羧酶使氨基酸脱羧生成胺和二氧化碳。由于胺的生成使培养基变为碱性,可用指示剂指示出来。 (2)
方法
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:将待检菌分别接种于1支氨基酸(赖氨酸,鸟氨酸或精氨酸)脱羧酶试验管和1支氨基酸脱羧酶对照管(无氨基酸),各覆盖至少0.5cm高度的无菌石蜡油,35?孵育1~4d,观察结果。 (3)结果:若为溴甲酚紫指示剂,则试验管紫色为阳性,黄色为阴性,对照管应为黄色。 (4)应用:主要用于某些细菌种间的鉴别,如赖氨酸用于产气肠杆菌(阳性)与阴沟肠杆菌(阴性);鸟氨酸用于阴沟肠杆菌(阳性)和克雷伯菌(阴性);精氨酸用于阴沟肠杆菌(阳性)和产气肠杆菌(阴性)等。
精氨酸双水解酶试验 (1)原理:精氨酸经两次水解后,生成鸟氨酸、氨及二氧化碳。鸟氨酸又在脱羧酶的作用下生成腐胺。氨及腐胺均为碱性物质,故可使培养基变碱,用指示剂指示出来。 (2)方法:将待检菌接种于试验培养上,置35?孵箱孵育1~4d,观察结果。 (3)结果:溴甲酚紫指示剂呈紫色为阳性,酚红指示剂呈红色为阳性。黄色为阴性。 (4)应用:主要用于肠杆菌科及假单胞菌属的鉴定。
非发酵菌:是一大群不发酵葡萄糖或以氧化形式利用糖、需氧或兼性厌氧、无芽孢的革兰阴性杆菌。
表2
序号 硫化氢(H2S) 靛基质 尿素酶 氰化钾(KCN) 赖氨酸脱羧酶
1 , 黑 , 不变 , 黄 , 澄清 , 紫
2 , 黑 , 红色环 , 黄 , 澄清 , 紫
3 , 黄 , 不变 , 黄 , 澄清 ,,, (紫/黄) 注:,阳性;,阴性;,,,阴性或阳性
反应1:典型沙门氏菌,如尿素、KCN和赖氨酸3项中有1项异常,按表3进行。如有2项异常为非沙门氏菌。 表3
尿素酶 氰化钾(KCN) 赖氨酸脱羧酶 判定结果
, 黄 , 澄清 , 黄 甲型副伤寒沙门氏菌(要求血清学鉴定结果)
, 黄 , 混浊 , 紫 沙门氏菌?或?(要求符合本群生化特性)
, 红 , 澄清 , 紫 沙门氏菌个别变体(要求血清学鉴定结果) 注:,阳性;,阴性。
反应2:补做甘露醇和山梨醇试验,沙门氏菌靛基质阳性变体两项试验结果均为阳性,但需要结合血清学鉴定结果进行判定。
反应3:补做ONPG。ONPG为阴性,同时赖氨酸脱羧酶为阳性;赖氨酸脱羧酶为阴性时为甲型副伤寒沙门氏菌。
必要时按表4进行沙门氏菌生活群的鉴别
表4
项目 ? ? ? ? ? ? 卫矛醇 , 黄 动力 , 黄 动力 , 绿/蓝无动力 , 绿/蓝无动力 , 黄 动力 , 绿/蓝无动力 山梨醇 , 黄 , 黄 , 黄 , 黄 , 黄 , 绿/蓝 水杨苷 , 绿/蓝 , 绿/蓝 , 绿/蓝 , 黄 , 绿/蓝 , 绿/蓝 ONPG , 不变 , 不变 , 黄 , 不变 , 不变 , 不变 丙二酸盐 , 不变/黄 , 蓝 , 蓝 , 不变/黄 , 不变/黄 , 不变/黄
KCN , 澄清 , 澄清 , 澄清 , 混浊 , 混浊 , 澄清 注:,阳性;,阴性。