黄芪多糖对克氏原螯虾抗白斑综合征病毒_wssv_感染的效果研究_洪徐鹏

黄芪多糖对克氏原螯虾抗白斑综合征病毒_wssv_感染的效果研究_洪徐鹏 文章编号: 1674 , 5566( 2014) 03 , 0423 , 06 黄芪多糖对克氏原螯虾抗白斑综合征病毒( WSSV) 感染的效果研究 1， 1， 1， 1 4 5 5 5 唐建清 ( 1( 上海海洋大学 水产与生命学院，上海 201306; 2( 上海海洋大学 省部共建水产种质资源挖掘与利用教育部重点实 验室，上海 201306; 3( 上海海洋大学 农业部淡水水产种质资源重点实验室，上海 201306; 4( 扬州大学 兽医学院，江 苏 扬州 225009; 5( 江苏省淡水水产研究所，江苏 南京 210017) 摘 要: 研 究 了 基 础 饲 料 中 添 加 不 同 浓 度 的 黄 芪 多 糖 研究亮点: 由 白 斑 综 合 征 病 ( astragalus polysaccharides，APS) 对克氏 原 螯 虾 ( Procambarus clarkii ) 抗 白 斑 综 合 征 毒( WSSV ) 引 起 的 白 斑 病 是 病毒 ( white spot syndrome virus，WSSV ) 的 效 果。 用 添 加 0% 、0( 2% 、 近十多 年 来 对 对 虾 养 殖 危 害 0( 4% 、0( 8% 黄芪 多 糖 的 基 础 饲 料 作 为 药 饵，投 喂 20 d 后，对 各 组 最大的病毒性疾病，本文通过 经 在饲料 中 添 加 不 同 浓 度 的 黄 PC, 检测 WSSV 呈阴性的健康克氏原螯虾进行 WSSV 病毒悬液腹节背 芪多糖，通过感染实验和组织 部注 射 攻 毒 试 验，当 添 加 0% 黄 芪 多 糖 的 阳 性 对 照 组 中 死 亡 率 病理检 测 等 方 法 研 究 了 黄 芪 达 到 多 糖 对 克 氏 原 螯 虾 抗 WSSV 100% 时，添加 0( 2% 、0( 4% 、0( 8% 黄 芪 多 糖 实 验 组 的 死 亡 率 分 别 的效果，对探索由 WSSV 感染 为 引起的 白 斑 病 的 防 控 具 有 良 ( 86( 67 ? 13( 33) % 、( 91( 11 ? 7( 70 ) % 、( 73( 33 ? 17( 64 ) % 。为 了 评 价 好指导意义。 黄芪多糖对克氏原螯虾各器官组织的影响，对其鳃、肝胰腺、心肌组织进 关键词: 黄芪多糖; 白斑综合 行病理组织切片观察，结果 发 现: 添 加 0% 黄 芪 多 糖 的 阳 性 对 照 组 中 征病毒; 克 氏 原 螯 虾; 病 理 组 克 织切片 中图分类号: S 945 氏原螯虾的鳃、肝胰腺、心肌组织出现细胞排列无序、细胞破裂、核仁皱 文献标志码: A 缩等明显的病理变化; 而添加 0( 8% 黄芪多糖的实验组中克氏原螯虾的 鳃、肝胰腺组织未见明显病变，心肌组织核仁出现一定程度的皱缩，但细 胞尚未破裂。研究表明: 与 阳 性 对 照 组 相 比，添 加 0( 8% 的 黄 芪 多 糖 可 提高 26( 67% 的 存 活 率，对 克 氏 原 螯 虾 抗 WSSV 感 染 有 很 好 的 提 高 效 果，可望在生产中收到良好的经济效益。 WSSV) 是一种具有囊膜的杆状病毒,4,，地理分布 黄芪多糖( astragalus polysaccharides，APS) 是 一种从中草药黄芪中提取的免疫多糖，具有抗病 广、流行范围 大、传 染 性 强、发 病 时 间 短，目 前 尚 ,1, ，有 研 究 报 道 黄 芪 多 糖 可 以 无有 效 的 药 物 能 够 控 制 疫 情，是 中 国 明 对 虾 ,2, 。克氏 ( Fenneropenaeus chinensis ) 、 凡 纳 滨 对 虾 原螯虾( Procambarus clarkii) 俗称小龙虾，属节肢 ( Litopenaeus vannamei ) 、 拟 穴 青 蟹 ( Scylla 动物门 ( Arthropoda) 、甲 壳 纲 ( Crstacea ) 、十 足 目 paramamosain) 养 殖 中 的 主 要 病 原,5 , 6,。 研 究 表 ( Decapoda) ，是目前我国养殖最广的淡水螯虾品 明 WSSV 具有广泛的宿主，可以感染甲壳纲十足 ,3, ,7, ，在我国 长 江 中 下 游 地 区 广 泛 养 殖，其 肉 质 。近 年 来 发 现 在 克 氏 原 螯 虾 鲜美，营养丰富，深受消费者的青睐。 养殖中也广泛流行，给克氏原螯虾养殖业带来巨 014-03修白斑综合 征 病 毒 ( white spot syndrome virus， -12 回 日 期: 收稿日期: 2013-12-07 2 ,8, 。 自 然 条 件 下 ， 经 口 摄 2 3 2 洪徐鹏 ，陆宏达 ，张庆华 ，夏思瑶 ，唐嘉荩 ，丁正峰 ，薛 晖 ， 食 是 基金项目: 国家级大学生创新训练计划项目( B , 5106 , 12 , 0002 ) ; 公益性行业( 农业) 科研专项( 201003070 ) ; 上海高校知识服务 平台( ZF1206) 作者简介: 洪徐鹏( 1993—) ，男，研究方向为水产动物病害。E-mail: xphong1017@ 163( com 通信作者: 张庆华，E-mail: qhzhang@ shou( edu( cn 毒、抗疲劳 等 功 能 提高刺参 的 非 特 异 性 免 疫 力 和 抗 病 力 种 目的大部 分 动 物 大的 经 济 损 失 上 海 海 洋 大 学 学 报 23 卷 424 WSSV 感染宿主的主要途径，即健康对虾摄食携 0( 2% ( C2 组) 、0( 4% ( C3 组) 和 0( 8% ( C4 组) 黄 ,9, 芪多糖的实验组。每组设置 3 个平行，每组投放 ; 在试验 20 只克氏原螯虾，总计用虾 300 只。每天定时投 条件下，WSSV 也可通过浸泡或共居方式传播，只 喂 2 次，食量为克 氏 原 螯 虾 体 重 的 10% 。次 日， 是感染的病 毒 量 很 少，不 足 以 使 对 虾 发 病，而 以 用虹吸管将未利用的饲料吸出。实验期间，每天 潜伏感染的方式存在于对虾体内。 更换 1 /3 的养殖用水。 目前已有 实 验 证 明 WSSV 灭 活 制 剂 和 壳 聚 1( 3 WSSV 病毒悬液的制备 糖、葡聚糖及甲壳素对克氏原螯虾抗白斑综合征 ,10, 经 WSSV 感染死亡且 PC, 检 测 为 阳 性 的 克 ，且有报道称榴莲多糖可提高斑节 ,11, 氏原 螯 虾，去 除 附 肢、甲 壳 等，加 入 5 倍 体 积 的 。我们前期研究发现，0( 4% , 0( 01 mol / L PBS( pH 7( 4) 中，用玻璃匀浆管匀浆 0( 8% 的黄芪多糖可以提高克氏原螯虾的超氧化 处理，匀浆液经 3 000 r / min 离心 20 min，上清液 歧化酶( SOD) 、酸性磷酸酶( ACP) 、溶菌酶( LSZ) ,12, 依次用定性滤纸和直径为 0( 22 μm 的滤膜( 德国 ，但黄芪多糖对抵抗白斑综 MEMB,ANA 公 司 原 产 膜 ) 过 滤 除 菌，制 备 成 合征病毒 感 染 的 效 果 如 何, 目 前 尚 未 见 相 关 WSSV 病毒悬液。 的 报道。本实 验 旨 在 研 究 黄 芪 多 糖 对 克 氏 原 螯 虾 1( 4 人工感染实验 抗 WSSV 感染的效果，为克氏原螯虾中普遍流行 投喂饲料 20 d 后，各组取 15 只健康状况良 的 WSSV 病毒病的防治提供理论依据。 好的克氏原螯虾进行实验，N0 组腹节注射 0( 01 1 材料与方法 mol / L PBS，C1 组、C2 组、C3 组、C4 组 腹 节 注 射 病毒悬液攻毒，每只虾接种量为 100 μL。每天统 黄芪多糖药饵的制备 1( 1 计各组死亡情况，当 C1 组死亡率达到 100% 时， 实验用黄芪多糖( 批号: 20120701，购自大连 计算各组累积死亡率 , D 、存活率 , S 并对各组虾 容海生物 科 技 有 限 公 司 ) ，含 70% 的 有 效 成 份。 进行 PC, 检测。 以江苏省淡 水 水 产 研 究 所 提 供 的 不 含 免 疫 多 糖 ( 1) , D = ?D t / N 的河蟹用饲料为基础饲料，在每 100 g 基础饲料 ( 2) 中分别添加 0 g、0( 2 g、0( 4 g、0( 8 g 的黄芪多糖， , S = 1 , ( ?D t / N) 配制成 0% 、0( 2% 、0( 4% 、0( 8% 的实验 饲 料，自 t 表示 t 天时死亡数量; N 表示实验前各组 式中: D然风干。在干燥条件下密封保存备用。 总量。 1( 2 1( 5 克氏原螯虾的养殖 组织病理学观察 克氏原螯 虾 取 自 江 苏 省 淡 水 水 产 研 究 所 取 N0、C1、C4 组病虾分离心脏、肝胰腺及鳃 组织，经 Bouin's 液固定 24 h 后，用 75% 的乙醇 泗 浸洗，并保 存 备 用。固 定 后 的 组 织 经 酒 精 脱 水， 洪基地，平均体重( 10( 27 ? 1( 6 ) g，平均头胸甲长 石蜡包埋，切片厚度为 5 μm，再用苏木精-伊红染 ( 22( 7 ? 3( 4 ) mm。用 上 游 引 物: 5' , TCACAGG 色，中性树胶封片后在显微镜 ( Leica DMLB2 型) CGTATTGTCTCTCCT , 3' 及 下 游 引 物: 5' , CACGAGTCTACCGTCACAACATC , 3' 进行 WSSV ,8, 的 PC, 检测，扩增产物 为 300 bp 。实 验 用 虾 下观察，用 数 码 摄 像 系 统 ( Leica DC300F 型 ) 拍 照。 均经 PC, 检测呈阴性，实验在 80 cm × 58 cm × 60 1( 6 数据处理 cm 的聚乙烯塑料箱中进行，设置 PVC 管、石棉瓦 实验 数 据 以 平 均 值 ? 标 准 误 差 表 示，采 用 作为掩蔽物，养殖用水为充分曝气 3 d 的自来水， SigmaPlot 12( 0 软 件 对 数 据 进 行 方 差 分 析 每 天 采 用 便 携 式 多 参 数 水 质 分 析 仪 ( YSI- ( ANOVA) 与作图。 ADV6600) 监 测 水 质，pH 7( 4 , 7( 9，总 硬 度 为 100 , 250 mg / L，温 度 为 ( 25 ? 2 ) ? ，溶 解 氧 为 7( 05 , 8( 67 mg / L，在实验室内自然光照，实 验室 2 结果 条件下驯食一周，待用。 2( 1 黄芪多糖对克氏原螯虾抗 WSSV 感染的效 果评价 实验分为基础饲料中添加 0% 黄芪多糖的阴 2 d 时，C4 组死亡率与 C1 组、C2 组和 C3 差性对照组 ( N0 组) 和 阳 性 对 照 组 ( C1 组) 、添 加 带病毒的饵料生物均能感染上该病毒 病毒有作用 对虾的抗病力 等非特异性免疫力 3 期 洪徐鹏，等: 黄芪多糖对克氏原螯虾抗白斑综合征病毒( WSSV) 感染的效果研究 425 异极显著( P , 0( 01) ; 3 d 时，C4 组死亡率与其他 量与其他各实验组病毒含量差异显著 ( P , 各实验组差 异 极 显 著，而 C2 组、C3 组 死 亡 率 与 0( 05) 。本实验结果表明: 饲料中添加 0( 8% 黄芪 C1 组差异显著( P , 0( 05) ; 4 d 时，各实验组之间 多糖对克氏原螯虾抗 WSSV 感染有很好的效果。 差异极显著，C2 组、C4 组与 C1 组差异极显著( 图 1) 。5 d 时，当 C1 组 累 积 死 亡 率 达 到 100% 时， N0 组的累积死亡率为( 11( 11 ? 3( 85) % ，C2 组为 ( 86( 67 ? 13( 33 ) % ，C3 组 为 ( 91( 11 ? 7( 70 ) % ， C4 组为( 73( 33 ? 17( 64 ) % ; 黄 芪 多 糖 浓 度 对 克 氏原螯虾抗 WSSV 感染的效果差异极显著( P , 0( 01) ，C2 组、C4 组与 C1 组差异极显著，C3 组与 C1 组差异不显著 ( P , 0( 05 ) 。通过 数 学 模 型 得 图 3 注射 WSSV 5 d 后 PC, 检测各组 出黄芪 多 糖 浓 度 ( x ) 对 累 积 死 亡 率 ( , D ) 符 克氏原螯虾体内的 WSSV 合 Fig( 3 PC, test for WSSV in Procambrus Clarkii , D = 1 , 1( 44x + 4( 72x2 , 4( 17x3 ，当累积死亡率 body 5 d after injection 为 0 时，对应的黄芪多糖浓度为 1( 02% 。 2( 2 组织病理学观察 C4 组的克氏原螯虾鳃组织未见明显病理变 化( 图版 , 1 ) ; C1 组中，鳃出现严重病变，染色质 碎裂、边缘化，细 胞 破 裂、分 布 也 不 均 匀 ( 图 版 , 2) ; 而 N0 组健康的克氏原螯虾( 图版 , 3) 鳃丝排 列整齐，表面光滑平整，内部上皮细胞分布均匀， 结构清晰。 C4 组的克氏原螯虾心肌组织核仁皱缩，细胞 尚未破裂( 图版 , 4) ; 而感染 WSSV 后 C1 组的克 图 1 注射感染 WSSV 后克氏原螯虾累积死亡率 氏原螯虾心 肌 细 胞 核 肿 胀，核 浓 染 并 固 缩，细 胞 Fig( 1 Cumulative mortality of Procambarus clarkii 排列杂乱无章，界限 消 失 ( 图 版 , 5 ) ; N0 组 健 康 after injection of WSSV 螯虾的 心 肌 组 织 内 细 胞 排 列 有 序，细 胞 界 限 分 明，细胞完整( 图版 , 6) 。 C4 组的克氏原螯虾肝胰腺尚未见明显病变 ( 图版 , 7 ) 。C1 组 克 氏 原 螯 虾 感 染 WSSV 后 细 胞呈现空泡化，细胞 核 固 缩 ( 图 版 , 8 ) ; N0 组 健 康的克氏原螯虾肝 胰 腺 细 胞 饱 满，色 泽 红 润 ( 图 版 , 9) 。 讨论 -223 白斑综合征 病 毒 ( WSSV) 具 有 泛 嗜 性，凡 纳 自然宿主 滨对虾、中 国 明 对 虾、斑 节 对 虾 等 都 是 WSSV 的 ,5 , 6, ; 拟穴青蟹也是 WSSV 的自然宿主， 图 2 黄芪多糖浓度对累积死亡率 , D 的影响 内累积和增殖 可以通 过 摄 食 携 带 WSSV 饵 料 而 使 WSSV 在 体 Fig( 2 The effect of APS concentration on , D 斑综合征病毒的中间宿主 ,13, ; 朱斐等认为，克氏原螯虾是白 ,14, 。在本实验中存活 通过 PC, 检测，C1 组、C2 组、C3 组、C4 组的 的克氏原螯虾中均检测出 WSSV 阳性，说明克氏 WSSV 均呈阳性，N0 组 WSSV 呈阴性。由 PC, 产 原螯虾也是白斑综合征病毒的宿主之一，可以引物的电泳条带可知: 0( 8% APS 的添加组中病毒含 上 海 海 洋 大 学 学 报 23 卷 426 起克氏原螯虾的大规模死亡。 图版 鳃、心肌、肝胰腺组织切片光镜观察 Plate Gills，heart，hepatopancreas sections under light microscope 1( C4 组鳃; 2( C1 组鳃，箭头示鳃组织细胞破裂，核固缩; 3( N0 组鳃; 4( C4 组心肌，箭头示核仁固缩、细胞尚未破裂; 5( C1 组心肌，箭 头示核浓染并固缩，细胞排列杂乱无章; 6( N0 组心肌; 7( C4 组肝胰腺; 8( C1 组肝胰腺，箭头示肝胰腺细胞呈现空泡化; 9( N0 组肝胰 腺。 虾蟹类的免疫系统以非特异性免疫为主，也 定的细胞内，进 一 步 促 进 免 疫 因 子 的 合 成，这 些 ,15 , 16, 。研 免疫因子又可协助免疫细胞清除病原等异物，进 有报道称无脊椎动物具有获得性免疫 ,20, 究表明，对克氏原螯虾注射灭活的 WSSV，可提高 。黄芪多糖可以提高克氏 一步发挥免疫功能 ,17, ; 李战军等研究 原螯虾体内非特异性免疫相关酶的活性，特别是 克氏原螯虾对 WSSV 的抗病力 ,12, 表明，中国明 对 虾 可 能 存 在 类 免 疫 保 护 作 用，超氧化物歧化酶 ( SOD) ，从 而 氧 化 杀 死 体 内 对 虾类抗病力与接种疫苗的活力有关 ,18, ; 另有研究 的病原生物。阴 性 对 照 组 N0 中 出 现 少 量 死 亡， 表明，WSSV 可以在对虾体内潜伏感染，携带少量 与克 氏 原 螯 虾 生 性 好 斗 和 恃 强 凌 弱 的 习 性 有 关 ,21, 病毒的对虾可以继续生存而不引起暴发性死亡。 。本实验 中 0( 2% 、0( 4% 、0( 8% 黄 芪 多 糖 虽然潜伏感染看似是一种静止状态，而当对虾受 浓度 组 的 相 对 存 活 率 为 13( 33% ? 13( 33% 、 到外源性刺激引起机体免疫功能降低时，可引发 8( 89% ? 7( 70% 和 26( 67% ? 17( 64% ; 其 中 以 对虾体内病毒的大量扩增而发病，从而有利于病 0( 8% 组的免 疫 保 护 效 果 最 好，存 活 率 显 著 高 于 毒的 传 播 与 扩 散 ,19, 。 因 此 添 加 0( 2% 、0( 4% 、 其它组( P , 0( 05 ) ，这可能与黄芪多糖对克氏原 螯虾 的 非 特 异 性 免 疫 有 促 进 作 用 有 关 ,12, 0( 8% 黄芪多糖的实验组在 2 , 3 d 时死亡率减缓 。 在 可能与病毒 扩 增 但 并 未 引 起 死 亡 以 及 与 克 氏 PC, 检测中，由 于 提 取 组 织 部 位、组 织 块 质 量 大 原 小相同以及体外扩增程序一致，所呈现出的条带 螯虾的自身免疫有关。当病原入侵时，甲壳动物 可反映 出 各 组 织 中 模 板 DNA 含 量 的 差 异。 因通过体液免疫因子等识别病原，将信息传递到特 3 期 洪徐鹏，等: 黄芪多糖对克氏原螯虾抗白斑综合征病毒( WSSV) 感染的效果研究 427 2 , 26( 此，0( 8% 黄 芪 多 糖 组 的 WSSV 含 量 显 著 低 于 其 ,7, BALAK,ISHNAN P，P,AVEEN ,，SEETHAPPA A，et al( 他各组。而 0( 8% 组在 3 d 后的死亡率显著低于 Biology，host range，pathogenesis and diagnosis of white spot 阳性对照组及 0( 2% 、0( 4% 组，且肝胰腺、鳃组织 syndrome virus,J,( India Journal of Virology，2012，23( 2 ) : 细胞尚未见明显病变，说明 0( 8% 的黄芪多糖可 161 , 174( 以提高克氏原螯虾对 WSSV 的抗病力。 丁正峰，薛晖，夏爱军，等( 白斑综合征病毒在养殖克氏原 ,8, 螯虾中感染 流 行 研 究,J,( 南 京 农 业 大 学 学 报，2008，31 本实验研究表明: 0( 8% 黄芪多糖可以增强 ( 4) : 129 , 133( 克氏原螯虾对 WSSV 抗病力，但对于攻毒的病毒 何建国，周化民，姚伯，等( 白斑综合征杆状病毒的感染途 ,9, 悬液活力是 否 有 影 响 以 及 具 体 抗 病 机 理 仍 有 径和宿主种类,J,( 中 山 大 学 学 报: 自 然 科 学 版，1999，38 待 ( 2) : 65 , 69( 进一步实验证明。在 20 d 时，C2 组、C4 组与 C1 组差异 极 显 著，C3 组 与 C1 组 差 异 不 显 著 ( P , ,10, 朱斐( 对虾白 斑 综 合 征 病 毒 灭 活 制 剂 及 多 糖 对 克 氏 原 螯 虾抗 WSSV 作用的研究,D,( 杭州: 浙江大学，2009( 0( 05) ，C3 组与 C2 组、C4 组差异不显著; 其具体 Studies on the ,11 , PHOLDAENG K， PONGSAMA,T S( 原因仍 需 通 过 进 一 步 浓 度 梯 度 实 验 研 究 证 明。 immunomodulatory effect of polysaccharide gel extracted from 由黄芪多糖对累积死亡率函数模型分析可知，当 Durio zibethinus in Penaeus monodon shrimp against Vibrio 添加 1( 02% 的黄芪多糖时可使克氏原螯虾累积 harveyi and WSSV,J,( Fish , Shellfish Immunology，2010， 死亡率为 0; 至于黄芪多糖最佳添加浓度，还需通 28: 555 , 561( ,12, 洪徐鹏，夏思瑶，唐嘉荩，等( 黄芪多糖对克氏原螯虾生长 过实验证明。 和非特异 性 免 疫 指 标 的 影 响,J,( 上 海 海 洋 大 学 学 报， 黄芪多糖是中草药黄芪中提取的免疫多糖， 2013，22( 4) : 571 , 576( 具有绿色、健康、无残留的特点，将其作为克氏原 ,13, 周俊芳，房文红，胡琳琳，等( 白斑综合 征 病 毒 ( WSSV) 在 螯虾白斑综合征的防治药物可以减少药物残留， 拟穴青蟹体内增殖的研究,J,( 海洋渔业，2012，34( 1 ) : 71 同时具有良好的经济效益，也可运用在凡纳滨对 , 75( 进作用 。本实验结果表明: 添加 0( 8% 黄芪多 ,14, 朱斐，吕梦园，许 梓 荣( 白 斑 综 合 征 病 毒 感 染 克 氏 原 螯 虾 虾的养殖中。研究表明添加 0( 4% , 0( 8% 黄 芪 后的 PC, 检测及组 织 病 理 学 研 究,J,( 淡 水 渔 业，2012， 多糖对克氏 原 螯 虾 生 长 及 非 特 异 性 免 疫 均 有 促 ,12, 42( 6) : 43 , 48( A,ALA CHAVES M，SEQUEI,A T( Is there any kind of ,15, 糖对克氏原螯虾抵抗 WSSV 的感染有明显效果， adaptive immunity in invertebrates,J,( Aquaculture，2000， 因此可以将黄芪多糖作为饲料添加剂，在获得较 191( 1 /4) : 247 , 258( 1 ( KU,TZ J，F,ANZ K( Innate defence : evidence for memory 高收益的同时减少病害的发生。 ,16, in invertebrate immunity , J , ( Nature，2003，425 ( 6953 ) : 37 , 38( 参考文献: ,17, ZHU F，DU H，MIAO Z G，et al( Protection of Procambarus , , 高慧，韩森，叶凤兰，等( 黄芪多糖的免疫学研究进展,J, clarkii against white spot syndrome virus using inactivated 饲料研究，2007( 6) : 35 , 36( WSSV,J,( Fish , Shellfish Immunology，2009，26 ( 5 ) : 685 许拉，樊英，李天保，等( 黄芪多糖微胶囊制备及对刺参抗 ,2, , 690( 病力的影响,J,( 渔业科学进展，2013，34( 1) : 172 , 176( ,18, 李战军，孟宪红，孔杰，等( 中国对虾对白斑综合征病毒的 中华人 民 共 和 国 农 业 部 渔 业 局( 中 国 渔 业 年 鉴,M,( 北 ,3, 类免疫反应与验证,J,( 中国水产科学，2012，19 ( 6 ) : 989 京: 中国农业出版社，2012( , 993( ESCOBEDO B C M，ALDAY S V，WILLE M，et al( A ,4, ,19, 张涛，郭志勋，黄建华，等( 低剂量对虾白斑综合征病毒粗 review on the morphology， molecular characterization， 提液对斑节对虾体内潜伏期病毒及血细胞的影响,J,( 水 morphogenesis and pathogenesis of white spot syndrome virus 产学报，2012，36( 10) : 1544 , 1553( ,J,( Journal of Fish Diseases，2008，31( 1) : 1 , 18( ,20, 杨玉姣，王国良，金珊，等( 环境胁迫对对虾免疫系统的影 雷质文，黄倢，史成银，等( 白斑综合征病毒 ( WSSV) 的宿 ,5, 响研究,J,( 水产科学，2006，25( 12) : 652 , 655( 主调查,J,( 海洋与湖沼，2002，33( 3) : 250 , 258( ,21, 谢文星，董 方 勇，谢 山，等( 克 氏 原 螯 虾 的 食 性、繁 殖 和 栖 S NCHEZ-PAZ A( White spot syndrome virus: an overview ,6, 息习性研究,J,( 水利渔业，2008，28( 4) : 63 , 65(on an emergent concern,J,( Veterinary ,esearch，2010，41: 上 海 海 洋 大 学 学 报 23 卷 428 Effect of Astragalus Polysaccharide on the anti-infection of white spot syndrome virus ( WSSV) in Procambarus clarkia HONG Xu-peng1，2 ，LU Hong-da1，3 ，ZHANG Qing-hua1，2 ，XIA Si-yao1 ，TANG Jia-jin4 ，DING Zheng-feng5 ， XUE Hui5 ，TANG Jian-qing5 ( 1( College of Fisheries and Life Science，Shanghai Ocean University，Shanghai 201306，China; 2( Key Laboratory of Exploration and Utilization of Aquatic Genetic ,esources，Minitry of Education，Shanghai Ocean University，Shanghai 201306， China; 3( Key Laboratory of Freshwater Fishery Germplasm ,esource ，Ministry of Agriculture，Shanghai Ocean University， Shanghai 201306，China; 4( College of Veterinary Medicine，Yangzhou University，Yangzhou 225009，Jiangsu，China; 5( Freshwater Fisheries ,esearch Institute of Jiangsu Province，Nanjing 210017，Jiangsu，China) Abstract: We studied the effects of anti-infection of white spot syndrome virus ( WSSV) by adding different concentrations of astragalus polysaccharides ( APS) to the basal diet in Procambarus clarkii( The healthy P( clarkii which were negative of WSSV by PC, detection were injected intraperitoneally，with 100 μL WSSV， and fed with 0% ，0( 2% ，0( 4% ，0( 8% of APS bait( After feeding 20 d，the result revealed that when the positive control group mortality rate was 100 ? 0% ，the mortality of 0( 2% ，0( 4% ，0( 8 % APS addition groups were 86( 67% ? 13( 33% ，91( 11% ? 7( 70% ，73( 33% ? 17( 64% ，respectively( In order to evaluate the effect of APS on visceral organs，such as gill，hepatopancreas，and myocardial tissue in P( clarkii，the tissue sections were observed( The results showed that there was significant pathological change like nuclear pyknosis，cell ruptured and arranged desultorily in the group of 0% APS bait，but there were no obviously pathological changes in the gills and hepatopancreas， whereas nucleoli displayed a certain degree of shrinkage，while the cells have not yet broken in the myocardial tissue in the group of adding 0( 8% APS bait( This experiment showed that the survival rate can be increased to 26( 67% when adding 0( 8% APS bait compared with the positive control in P( clarkii( The APS can significantly improve the effect of resistance of P( clarkii to the WSSV infection，and it can be expected to receive good economic benefits in the actual aquaculture production( Key words: astragalus polysaccharides; white spot syndrome virus( WSSV) ; Procambarus clarkii; pathologic tissue slice