Qiagen溶液配制及抽提Qiagen溶液配制及抽提一：溶液配制:1.1BufferP1悬浮用)成分：50mMTris.HCl,pH8.0,10mMEDTA,100ug/mLRnaseA配制：2MTris.HCl,pH8.0 25mL 0.5MEDTA,pH8.0 20mL 双蒸水至1L，灭菌使用前每1Lbuffer加入100mgRNAseA，并于4℃保存。1.2BufferP2：（裂解用）成分：200mMNaOH,1%SDS配制：8gNaOH固体溶解于500mL双蒸水中，成0.4MNaOH溶液10gSDS溶于500mL双蒸水中，成...
Qiagen溶液配制及抽提一：溶液配制:1.1BufferP1悬浮用)成分：50mMTris.HCl,pH8.0,10mMEDTA,100ug/mLRnaseA配制：2MTris.HCl,pH8.0 25mL 0.5MEDTA,pH8.0 20mL 双蒸水至1L，灭菌使用前每1Lbuffer加入100mgRNAseA，并于4℃保存。1.2BufferP2：（裂解用）成分：200mMNaOH,1%SDS配制：8gNaOH固体溶解于500mL双蒸水中，成0.4MNaOH溶液10gSDS溶于500mL双蒸水中，成2%SDS溶液使用前将上述两种溶液等体积混合后使用注意：BufferP2混合后不宜放置时间过场，每次配够一周使用的即可。长时间放置容易产生沉淀。若有沉淀产生，在37℃保温一段时间使沉淀溶解。1.3BufferP3：（中和用）成分：3MKAc（醋酸钾），pH4.8配制：将147gKAc溶于350mL双蒸水中，用约60mL冰醋酸调节PH值，然后继续用浓盐酸调节pH值至约5左右.最后定容至500mL。1.4BufferQBT平衡用)成分：750mLNaCl;50mMMOPS.Ph7.0;15%异丙醇，0.15%TritonX-100配制：溶解43.83gNaCl,10.46gMOPS到800mL 双蒸水中，调节pH值至7.0，然后加入150mL异丙醇和15MlTritonX-100,加水定容至1L。1.5BufferQC：（洗涤用）成分：1.0MNaCl，50MmMOPS,Ph7.0配制：溶解58.44gNaCl,10.46MOPS至800mL双蒸水中，调节pH值至7.0,然后加入150mL异丙醇，定容至1L。二：Qiagen-tip20质粒小量提取操作步骤2.1取过夜培养的菌液2mL，12000rpm离心30秒至1分钟，去净上清。2.2用0.3mLBufferP1重新充分悬浮沉淀。2.3加入0.3mLBufferP2，轻轻颠倒摇匀，室温下放置5分钟。注意：此步不应剧烈振荡，否则容易在所提质粒中混入基因组DNA。2.4BufferP2使用后应盖紧盖子，否则NaOH易与空气中的CO2起反应。2.5加入0.3mLBufferP3，轻轻混匀，于4℃冰箱中放置10分钟。12000rpm高速离心15分钟。2.6用1mLBufferQBT平衡Qiagen-tip20柱，并让QBT慢慢流下。2.7将步骤5所得的上清倒入已平衡好的Qiagen-tip20柱，让其慢慢流下。2.8每次用1mLQC清洗Qiagen-tip20柱，清洗3次。2.9用0.8mLQF洗脱DNA。2.10用0.6倍体积（500uL）的异丙醇沉淀质粒，颠倒混匀，室温放置5分钟,12000rpm高速离心15分钟。2.11去上清，用1mL70%乙醇洗涤沉淀，12000rpm高速离心3分钟，去净上清。2.12重复步骤11一次。注意：洗涤时，每次用吸水纸吸一下，尽量去净残余的液体。去净上清很重要，否则除不净多余的盐分，将严重影响的后面的测序反应。2.13抽干多余的乙醇，用30～50uL双蒸水溶解DNA,取2uL电泳检测定量，用于测序。
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