[指南]摩尔消光系数
摩尔消光系数
1.简介
2.摩尔消光系数
摩尔消光系数也称摩尔吸光系数(MolarExtinctionCoefficient),是指浓度为1摩尔/升时的吸光系数,ε
表
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示,当浓度用克/升表示时,摩尔吸光系数在数值上等于吸光系数与物质的分子量(M)之积,ε=αM。
详细介绍
分光光度法是基于不同分子结构的物质对电磁辐射的选择性吸收而建立起来的方法~属于分子吸收光谱分析。当光通过溶液时~被测物质分子吸收某一波长的单色光~被吸收的光强度与光通过的距离成正比。虽然现在了解到Bouguer早在1729年已提出上述关系的数学表达式~但通常认为Lambert于1760年最早发现表达式~其数学形式为:
摩尔消光系数:T=I/I0=e-kb
其中I0为入射光强~I为透射光强~e为自然对数的底~k为常数~b
为光程长度(通常以cm表示)。
比尔定律等同于Bouguer定律~只是比尔定律以浓度来表达。将两个定律结合起来~组成Beer-Bouguer定律:
T=I/I0=e-kbc
其中c为吸光物质的浓度(通常以g/L或mg/L为单位)。将上式取以10为底的对数后~得到线性表达式:
A=-logT=-log(I/I0)=log(I0/I)=εbc
其中A为吸光度~ε是摩尔吸收光系数或消光系数。
3.摩尔消光系数
上述表达式通常称为比尔定律。它表明~当特定波长的单色光通过溶液时~样品的吸光度与溶液中吸收物浓度和光通过的距离成正比。
在波长、溶液和温度确定的情况下~摩尔消光系数是由给定物质的特性决定的。实际上~测得的摩尔消光系数也和使用的仪器有关。因此~在定量分析中~通常并不用已知物质的摩尔消光系数~而是用一个或多个已知浓度的待测物质作一条校准或工作曲线。
Lambert-Beer定律
当我们把一束单色光,I0,照射溶液时~一部分光,I,通过溶液~而另一部分光被溶液吸收了。这种吸收是与溶液中物质的浓度和液层的厚度成正比~这就是朗勃特—比尔定律。用数学式表式为:
A=ECL=-log(I/I0)
其中~A为吸光度~E为消光系数~C为溶液浓度~L为液层的厚度。E的值随A和C单位的变化而变化~当溶液的浓度若用mol/L表示,b用cm来表示时~则E用另一符号ε来表示,称为摩尔消光系数:
A=εCL ~从而~摩尔消光系数ε=A/CL。
摩尔消光系数的意义是即每升含有一摩尔核酸磷的溶液在260 nm波长处的消光值,即光密度~或称为光吸收,。其大小反映吸光物质对光的吸收能力~也反映了用吸光度法测定该吸光物质的灵敏度。