总糖和还原糖的测定二
??3,5
掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。
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在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖
量。
OHNOOH NH22
HOOC+ 还原糖 HOOC
NO2NO2
(DNS)（3－氨基－5－硝基水杨酸）?
黄色 桔红色
3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5g DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000ml容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠溶液325ml，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000ml。
葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖200mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为2.0mg/ml。
6mol/L HCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。
碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。 6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。
0.1% 酚酞指示剂。
藕粉，小麦淀粉或玉米淀粉。
723PC、S22型分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。 一、
取5支15mm×180mm试管，按下
表
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加入2.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。
540
管号 葡萄糖标准液 蒸馏水 葡萄糖含量 OD /ml /ml /mg
0 0 1 0 1 0.2 0.8 0.4
2 0.4 0.6 0.8
3 0.6 0.4 1.2
4 0.8 0.2 1.6
5 1 0 2
在上述试管中分别加入DNS试剂2.0ml，于沸水浴中加热2min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9.0ml，摇匀，在540nm波长处测定光吸收值。以1.0ml蒸馏水代替葡萄糖标准液按同样显色操作为空白调零点。以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
准确称取 0.5g小麦（）粉，放在100ml烧杯中，先以少量蒸馏水(约2 ml)调成糊状，然后加入40ml蒸馏水，混匀，于50? 恒温水浴中保温20min，不时搅拌，使还原糖浸出
混。过滤，将滤液全部收集在50ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。
准确称取0.5g小麦(玉米)淀粉，放在锥形瓶中，加入6mol/L HCl 10ml，蒸馏水15ml，在沸水浴中加热0.5h，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。如
已水解完全，则不呈现蓝色。水解毕，冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6N NaOH溶液中和至溶液呈微红色，并定容到100ml，过滤取滤液10ml于100ml容量瓶中，定容至刻度，混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液，用于总糖测定。
取7支15mm×180mm试管，分别按下表加入试剂：
项目 空白 还原糖 总糖
H
O/ml 1 0 0 0 0 2
样品溶液/ml 0 1 1 1 1
3,5-二硝基水杨酸试剂/ml 2 2 2 2 2
OD值/540nm
加完试剂后，于沸水浴中加热2min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏
水9.0ml，摇匀，在540nm波长处测定光吸收值。测定后，取样品的光吸收平均值在标准曲
线上查出相应的糖量。
按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量：
式中：C??还原糖或总糖提取液的浓度，mg/ml；
V??还原糖或总糖提取液的总体积，ml；
m??样品重量，g；
1000??mg换算成g的系数。
标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行，一起显色和比色
1. 比色时为什么要
设计
领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计
空白管？
2. 比较费林试剂比色法与3,5-二硝基水杨酸比色法测定可溶性淀粉中还原糖和总糖的
结果，这两种方法各有何优点？
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