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CHRONO-LOG560Ca全血血小板聚集分析系统操作手册 仅供体外诊断使用用于检测全血或富血小板血浆的血小板聚集和ATP释放，另外可以检测钙离子流。目录总括与说明—————————————————————————————１血小板聚集实验的原理————————————————————————2光学聚集法――—－—－—－—－—－—－—－—－—－—－—－—3电阻法―――――――――――――――――――――――――――4荧光ＡＴＰ释放法――――――――――――――――――――――4系统特点——————————————————————————————5电阻法―――――――————————————————————5一般特点――――――――――――――――――――――――――5操作说明—————————————————————————————6　电阻法――――――――――――――――――――――――――――6光学聚集法――――――――――――――――――――――――――9荧光法(ATP释放)――――――――――――――――――――――――11运行ＡＴＰ 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 ―――――――――――—————————————12结果―――――――――――――――――――――――――――――――13　电阻法―――――――――――――――――――――――――――13光学聚集法――――――――――――――――――――――――――13荧光法(ATP释放)―――――――――――――――――――――――13结果的解释―――――――――――――――――――――――――――14筛选过程――――――――――――――――――――――――――――――16　　　样本要求————————————————————————————16　　　　全面的过程――――――――――――――――――――――――——19离子钙，形状改变和在含发光物质的血小板中的聚集―――――――31药物干扰―――――――――――――――――――――――――――――――35危险性―――――――――――――――――――――――――――――――35保养与服务―――――――――――――――――――――――――――――36电子探针组件――――――――――――――――――36光路与隔膜―――――――――――――――――――36自动定标过程――――――――――――――――――――――――――――37典型聚集释放曲线――――――――――――――――――――――――――附录Ａ总括与说明血管损伤后，血小板粘附于血管的损伤处，聚集、合成前列腺素，释放5-羟色氨、ADP、ATP。前列腺素的合成与释放产物会引起更进一步的聚集。同时血浆凝固开始、凝血酶产生、纤维蛋白形成和血小板栓子堵塞损伤的血管。由于细胞膜糖蛋白、细胞内储存颗粒、血小板酶、血浆凝血因子缺乏常引起过量出血，人临床表现为：鼻衄、损伤、擦伤失血过多。另外,外科手术的患者尽管经常存在血小板功能障碍,但直到出血不止、或术后出血不止才能发现．在1962年,Born描述了用ADP诱导的血小板聚集并改革用比浊计测量富血小板血浆的聚集过程.这种改变包括:预温37度,搅拌和用 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 笔记录一定时间内透过光的变化.在1977年，Feinman设计了一台仪器,同时测量血小板聚集和ATP释放。这台仪器利用紫外光测量聚集,在聚集光路的右侧放置敏感的光度计，通过荧光的产生测量ATP的释放.在1980年，Cardinal和Flower设计了电阻法测量全血中的聚集,非常小的电流通过两个电极,当电极刚与血接触时,在其表面会附着一层血小板,当聚集剂加入后,更多的血小板会聚集在其表面,引起电阻增加。电阻法的测量和荧光的测量又构成了一台全血荧光聚集仪。在1984年，Wojenski和Sliver发现了一种快速的方法去进行常规实验室的操作。这种方法就是同时测量聚集和ATP的释放,用血量为5毫升,30分钟内完成检测。这种方法避免富血小板血浆的准备时间。在1985年Johnson创造了一种方法去检测洗涤血小板的钙流,这种方法有利于研究钙离子在血小板聚集中的作用。参考文献血小板聚集实验的原理众所周知，血小板必须在一系列条件和不同试剂存在的情况下才能发生聚集。“血小板聚集”是一个术语，用来表示血小板与血小板之间的粘附。在全血或富血小板血浆中加入致聚剂，这种现象能被诱发。血小板的聚集有赖于钙离子、纤维蛋白原、单个或多个的血浆因子和致聚剂的存在。使用不同种类和浓度的致聚剂，血小板的聚集也有不同的变化。比如光学法，ADP、肾上腺素、胶原、和瑞斯托霉素被广泛应用于监测和提供最快速的基本诊断信息。这些试剂的选择有其理论依据：ADP和肾上腺素都包含在血小板的储存颗粒中，它们在原始血栓形成时释放出来并诱发进一步的血小板聚集。所以体外的血小板和致聚剂的反应被 证明 住所证明下载场所使用证明下载诊断证明下载住所证明下载爱问住所证明下载爱问 有助于确定出血性疾病的病因。另一方面，胶原虽然在血管的结缔组织中而不在血小板中。但血管损伤后它被认为是第一个聚集或凝固前因子。因此，胶原血小板的体外实验也是非常重要的。其他试剂如凝血酶、瑞斯托霉素、钙离子载A23187、花生四烯酸、凝血因子VIII、血清胺也被用于血小板实验。血小板聚集实验是目前最有用的血小板功能体外诊断实验。它能提供其他技术不可能或很难得到的结果，帮助疾病的诊断以及治疗措施的合理选择。这项实验累积起来的经验描绘了先天和获得性血小板功能障碍的图谱。血小板聚集实验的临床意义是获得性或类似性质的血小板功能缺陷的检测和诊断。加入特定的聚集试剂后，血小板是否聚集是区别不同类型的血小板功能障碍的依据。如下表所示： 血小板功能缺陷聚集的研究 缺陷 ADP诱导聚集 胶原诱导聚集 瑞氏托酶素诱导聚集 血小板无力症 减少 减少 正常 血小板减少症 正常（1期） 减少 正常 假性血友病 正常 正常 异常 非类固醇抗炎药 正常（1期） 减少 异常三种类型的聚集实验:·PRP中的光学聚集法·全血中的电阻法·ATP释放（荧光）的检测光学聚集法血小板的体外聚集可以反映血小板在体内形成初始凝血块的能力。血浆悬液中的血小板通过相对低离心力的离心从经过抗凝处理的血液样本中分离。离心的产物称为富血小板血浆（PRP）。贫血小板血浆（PPP）的制备是通过血液样本的相对高速离心得到的。Born型聚集仪或光学聚集仪是一个带有一个（或多个）加热到37摄氏度样品室的固定波长的分光光度计。同时进行持续的样品搅拌，因为在血小板和血小板的接触是决定血小板体外聚集的必要因素。Chrono-log的样品室设计可以使一束红外线同时通过两个比色杯，一个盛有PRP（样品）另一个盛有PPP（对照）。硅photodiodes检测可以通过样品的光线：认为ＰＲＰ的透光率是０％或者说是０％聚集；认为ＰＰＰ的透光率是１００％或者说是１００％聚集。Photodiodes检测到的透光率的变化量转化为仪器的记录。双孔双红外线束的设计确保了重复性，并允许同时测量聚集和荧光。每个通道有一个分离的孔用于检测（ＰＲＰ或洗脱的血小板；０％透光率）和校正对照（ＰＰＰ或缓冲液；１００％透光率）样品。光学聚集量和持续测量的检测样本和对照样本的透光率变化是成比例的。揿下按钮设置好０％和１００％透光率的基线。高灵敏度的双孔双光束的检测系统，在检测样本和对照样本之间仅需３０＊１０９的差异数即可检测。如果样本不足以进行精确的检测，聚集输出量将在两条基线检测持续循环以警告操作者。当血小板对刺激物（兴奋剂；聚集剂）产生应答而发生变形时，其变大的体积使PRP的透光率降低：这将记录为样本的透光率相对于PPP降低。如果聚集剂的剂量足够大可以引起血小板之间的黏附而形成聚集，越来越多的光线可以通过PRP样本。透光随时间的改变被记录下来，其变化趋向于贫血小板血浆，即达到100%的透光率。体外聚集记录表达的含义：·形状变化·第一波聚集（原始聚集），可能先背离PRP基线后再回到PRP基线。·不可逆的第二波聚集，发生在血小板未知颗粒成分变为刺激物并引发额外的聚集。聚集曲线还可以表明：·刺激物（聚集百分比）引起的透光率变化的最大值。·聚集的范围或速率，每分钟的聚集百分比变化复合聚集剂和配剂常用于血小板刺激。不同的聚集剂刺激血小板聚集的不同途径。不同浓度的兴奋剂可以引出一系列曲线（剂量应答曲线）。这些检测组的应答模式与已建立好正常模式和异常模式做比较。普遍认为这些信息与血小板凝血功能成分有关。全血中的电阻法血小板的体外聚集可以反映血小板在体内形成初始凝血块的能力。在抗凝血液中检测血小板，无需从血液中的其他组分中进行血小板分离。由于不需要标本离心来得到光学上的透明细胞悬液，因而可以检测完整的血小板群体。减少检测过程的耗时；血液中有形成分对血小板的影响也能表现出来。全血血小板聚集仪，要求样本加热到37度。要准备可重复使用的搅拌子后一次性搅拌子。将搅拌子和样本一起放到检测杯中。阻抗法聚集与光学法不同。电极要放到检测杯中用于检测。电极有两金属线。仪器检测电极两个电线间的阻抗，而得到结果。在重要的平衡过程中，血小板以单层的形势在金属线暴露的部分，有一个稳定的阻抗值。这个阻抗值为0ohm时的值。当加入聚集试剂后，血小板聚集并包裹到金属线上。会增加电路中的阻抗值。电路中阻抗的变化用ohm显示。加入试剂后仪器通常运行4-6分钟。电阻法的结果通常以下面的方式表示；在测试过程中的ohm每分钟ohm的改变，即斜率。最大聚集率。阻抗的变化直接表明血小板聚集的数量。瑞斯脱酶素诱导的聚集全血阻抗法较敏感。ATP释放（荧光）的检测ATP的释放用的荧光检测方法。发光物的测量师是很简单的测量原理。但是大多数的可见光波长很并且很稳定，要求聚集检测过程中的检测杯的透光度要好。后来都用荧光来检测，避免了可见光的干扰。通过加CHRONO-LUME试剂增强光通道对荧光的敏感。CHRONO可同时检测血小板聚集和ATP的释放。光学法检测聚集通过光路的变化在纪录曲线的改变。阻抗法可测全血或PRP。系统特点电阻法·电极探针：有２根精密的金属丝组成．探针有根足够长的电线，保证在水或生理盐水的清洗过程中能得到简单的清洁·标本量：总计１ml，其中有450ul血．450ul生理盐水，100ulCHRONO-LUME试剂·反应杯：普通塑料P/N367·搅拌磁棒：Ｔeflon涂层P/N368P/N367·搅拌磁棒：disposablesiliconizdedP/N370系统的一般特点·搅拌速度:crystal控制前方面板,每个通道能在OFF到1200RPM之间以100RPM为一个单位调节误差+/-1.0%·温度:加热模块37℃+/-0.2℃,电子控制,前方面板显示.另外可选购测定环境温度的组件.·孵育位:36.5℃+/-1.0℃下,使用1ml反应杯,每个通道6个孵育位.·电气要求:115或230V标本收集标本要求（全血）样本采集完成，要求静脉取样的位置损伤面积要小并且没有郁积。常用的诱导剂除了肾上腺素.血液标本用3.2或3.8的柠檬酸钠1:9抗凝。1份抗凝剂9份全血。样本必须用含标准抗凝剂的真空无菌管收集。测试肾上腺素的血液标本抗凝剂要求：在每毫升1.5%的柠檬酸钠中加2U/ML的HEP混合做抗凝剂。取1份抗凝剂9份全血。样本收集不需要禁食，但不能做剧烈运动。不能吸烟。检测前10天或2周禁止服用影响血小板功能药物。药物对血小板功能的影响在药物影响一章中有详细说明。样本收集完毕应该立即检测。三小时内必须检测完毕。样本应保存在室温。（24℃-27℃）标本要求（富血小板血浆）样本采集完成，要求静脉取样的位置损伤面积要小并且没有郁积。血液标本用3.2或3.8的柠檬酸钠1:9抗凝。1份抗凝剂9份全血。标本收集时为了不让血小板激活。用塑料试管或硅化的玻璃管。标本采集前，不能做剧烈运动。不能吸烟。检测前10天或2周禁止服用影响血小板功能药物。药物对血小板功能的影响在药物影响一章中有详细说明。标本采集完30分钟就可以用于测试，2.5小时完成实验。样本应保存在室温。（24℃-27℃）血浆的准备1、用颠倒浑匀的方式混合标本，不要使劲摇晃。2、制备富血小板血浆：用100克的离心力15分钟，离心标本。用移液枪吸取PRP放到塑料试管中。试管上标明病人姓名、标本类型。3、制备贫血小板血浆：用2400克的离心力20分钟，离心标本。用移液枪吸取PRP放到塑料试管中。试管上标明病人姓名、标本类型。操作说明电阻聚集法可使用全血、稀释血、富血小板血浆、乏血小板血浆。标本收集参见本手册标本收集一章操作质控和血标本可以平行测定。以下过程采用的是单通道仪器。每个孵育孔内要放置一个干净的含1ml生理盐水的反应杯，以便干净的探针能接触到，不用时保持反应杯的温度。当孵育孔准备好时，放入新反应杯和搅拌磁棒。开始预热。注意：预热一个标本的同时测定另一个标本，将缩短实验时间。打开开关，等待聚集仪温度显示到37℃。1)放入5个P/N367反应杯至孵育孔中。2)每个反应杯都放入P/N370或者P/N368搅拌磁棒3)预热反应杯10分钟。4)吸取1ml标本到一个已经预热的反应杯中如果测定的是稀释血液，请准备大量的稀释血和无菌等张盐水。或者，在加入血之前，吸取所需的无菌等张盐水到反应杯里预热。总量要达到1ml.。 警告：生理盐水稀释全血时，必须使用不含防腐剂的盐水。许多试剂纯的等张生理盐水和一些灌注液、浸液含有诸如苯甲醇之类的抑制血小板聚集和分泌的防腐剂。诊断用途的典型的稀释度为1：2（1份血，1份盐水）。其他用途的，血可能要稀释到1：10（1份血，9份盐水）。5）选择Small/Large/Impedance滑动开关上的Impendance档。6）预热孵育孔内的标本5分钟7）打开加热盖，放入含有标本和搅拌磁棒的反应杯。8）选择需要的搅拌速度，建议1000或者1200rpm9）将电极探针装配并连接好.560CA在预热孔的前面.而500CA在预热孔的左边.10）用金属线将电极探针缠绕完整.将金属线放在探针的后面,将加热块的盖子关闭完全.11）拿下记录笔.打开记录仪12）用“Zeroknob”点，让红色的阻抗取图表中央点。顺时针旋转“Indepancezeroknob”使红色的阻抗笔移动到右边。逆时针则到左边。13)温电极，样本会减少其阻抗值让红色的阻抗笔向左移动。当红色的阻抗笔停止向左移动时，证明电极何比色杯达到了需要的37℃。如果红色的阻抗笔走到了图表的外面。用“Impendancezeroknob”从新复位。14）用聚集仪上的“Impendancezeroknob”将红色的阻抗笔调到最初的纪录。左边的10（或90）。15)仪器记录两分钟。以确认基线已经建立。如果曲线往左移动说明样本仍在预温。用“Impendancezeroknob”根据需要从设置基线。16）按住聚集仪上的定标按钮，仪器会自动产生标准20ohm的环形阻抗。让红色的阻抗笔往右移动。同时，另一个手用聚集仪上的“impendancegainknob”在表格中的基线上标记50。这个步骤标定仪器在标准20ohm的阻抗下，记录笔移动40个小方格。顺时针旋转“impedanceknob”将加快纪录笔的移动速度，逆时针将降低其移动速度。17）打开加热块盖，加CHRONO-PAR试剂到样本中。可用P/N388或353微量加样器。每天的试验完成后都要丢掉microbore。为了保护plunger更换一个干净的microbore。18）关闭加热块盖子，仪器纪录反应时间内的曲线。1-6分钟。19）试验完成，拿走纪录笔，关掉记录仪。20）打开加热块盖子，从样本中取走电极。如果用的是P/N370一次性搅拌子,扔掉检测杯和搅拌子,如果用的是P/N368可重复使用的搅拌子,用P/N362搅拌子磁棒回收,扔掉检测杯.用蒸馏水以搅拌的方式清洗电极.将电极上的聚集物取走.用生理盐水冲洗并用”KIMPWIPES”檫干电极,放到下一个样本中由于检测.如果不是连续检测样本,将电极放在有生理盐水的检测杯中,并将其放在预温孔备用.最后一个试验完成后,用流动水清洗电极,檫干并放在一个清洁\干燥的检测杯中.如果没有纤维样物质.就没必要用含腐蚀剂的化学试剂来清洗电极.因为这些化学试剂会破坏电极表面的绝缘体,而导致电极不能做出基线.损坏的电极无法修理,必须从新更换.单通道500-CAP/N369电极。双通道560-CAP/N369电极.如果要对电极进行消毒,将家用消毒剂1:10倍稀释后,清洁10秒,然后用蒸馏水清洗干净即可.结果结果通常以试剂加入后在反应时间内的OHM的变化来表示或以测试过程中的最大聚集率表示.如果IMPEDANCEGAIN已经设置好．那么４０个小方格代表２０OHM．　　　　每个大方格是５个OHM　　　　每个小方格市０．５个OHM曲线反应部分的切线为斜率．与１分钟的反应建立一个三角形．其高为一分钟的聚集率．根据表格可以直接判断出结果和最恰当的OHM．光学法聚集用于血小板含量丰富血浆和洗涤血小板的检测．样本收集样本收集在样本收集中有详细描述．操作1)打开聚集仪和记录仪电源，等待仪器温度上升到３７℃．2)用Small/large/inpedance开关选择大／小反应位．小位置用P/N3１２　５００ul检测杯．用P/N382insertassembly，将p/n382放到加热块中的样本检测孔．当用p/n3１２比色杯和p/n382检测时，必须将p/n３６５隔离物放到检测杯下面，使样本的体积增加２５０ul．注意：每个仪器都有其相匹配的p/n382．每个通道都有双样本模式．再insertassembly下面有仪器型号和通道数的明确标注．如果原始的insertassembly被更换，那么仪器通道与insertassembly必须有专业工程师从新配置．　　大位置用１mlp/n367比色杯／　3)将选择好的检测放到预温孔，预热５分钟．　　4)加p/n3１３搅拌子（可重复使用）到p/n3１２检测杯　　5)加５００ul样本到p/n3１２检测杯．或加２５０ul样本到比底部有p/n3６５的p/n3１２检测杯．　　6)加５００ul参比到p/n3１２检测杯（PPP或缓冲液）　　7)打开加热块盖子将样本放到PRP检测孔．将参比物放到PPP检测孔．8)关闭预热块盖子．9)选择需要的搅拌速度１０００—１２００rpm10)放下纪录笔。打开纪录仪。11)按住“baseline”钮。聚集仪上的（lowerred）笔会从纪录纸上的左边从１０到９０。自动设置１００％的基线。12)放开“baseline”钮。聚集仪上的（lowerred）笔会从纪录纸上的右边从１０到９０。自动设置０％的基线。如果聚集仪上的笔（lowerred）在表格上的基线中来回移动，可能有以下几个原因。　１、样本杯和参笔杯位置放错。　　　２、样本中血小板的数量小于３０＊１０９／l3、检测杯没有放好。　等待足够长的时间，确保０％的基线已经建立完成。　　　13)打开加热块盖子，用p/n３８８或３５３微量加样枪加入CHRONO-PAR试剂。每天的试验完成后都要丢掉microbore。为了保护plunger更换一个干净的microbor14)关闭加热块盖子，仪器纪录反应时间内的曲线。1-6分钟。　　15)试验完成，拿走纪录笔，关掉记录仪。16)打开加热块盖子，从样本中取走电极。如果用的是P/N３１３可重复使用的搅拌子,用P/N362搅拌子磁棒回收,扔掉检测杯.　　将参比留作下一个标本检测时用。或者仍掉结果：　结果通常用聚集率和斜率表示在光学系统的自动设置表格中显示，１００％聚集等于８个大方格：　那么：每个大方格表示的聚集率为１２．５％　　　　每个小方格表示的聚集率为１．２５％　根据纪录的表格可直接确定结果并 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 出完整的报告。再取曲线速度最快的点作出切线，就可以得到斜率，根据１分钟的反应建立一个三角形。三角形的高即为１分钟内血小板的聚集率的改变。用斜率的形势表现出来　每个大方格每分钟的聚集率为１２．５％　每个小方格每分钟的聚集率为１．２５％发光物的检测（ATP释放反应）可用于全血、稀释血浆、PRP和洗涤血小板的检测。打开光电倍增管的电源时，只要关掉加热快的盖子，发光的强度就能被检测出来。除非加入CHRONO-LUME试剂光的信号不会改变。在运行实验前应运行标准。发光物的检测过程与前面的光学法聚集和阻抗法聚集一样，除了下面几项例外：检测前加试剂时，加样要块。样本检测前有以下几个步骤：1、阻抗法加全血或稀释血浆９００ul到P/N３６７检测杯。后加１００ul试剂。2、阻抗法作PRP或洗涤血小板时，加９５０UL到P/N３６７检测杯，后加５０UL　CHRONO-LUME试剂。3、光学法聚集做PRP或洗涤血小板时，加４７５ul到P/N３１２，后加２５ulCHRONO-LUME试剂4、光学法聚集，在P/N３１２检测杯下面放一个P/N３６５的橡皮垫，做PRP或洗涤血小板时，加２３８ul样本，后加１２ul　CHRONO-LUME试剂做ATP试验前，必须先做标准。ATP标准的定标使发光物的检测以nm的形式报告。ATP标准的运行：将P/N３６７检测杯放到预温孔。加P/N３７０一次性搅拌子或P/N３６８可回收的搅拌子到检测杯。预温检测杯１０分钟或更长。加１毫升样本到预温好的检测杯。　　做ATP标准的样本要做如下处理：1、全血，９００ul或稀释好的全血。2、PRP或洗涤血小板，如果用稀释样本检测，要大量稀释血浆。将稀释需要的无菌的等渗的盐水加入到比色杯中，后按需要加入预温好的全血体积。使总体积达到１毫升。诊断用时，可将血液１：２稀释（１全血＋１盐水），也可以将血液进行１：１０稀释（１全血＋９盐水）1)将样本在预温孔预温５分钟。2)通过旋转Rotary　gain开关使荧光强度减少到最小。3)打开加热块盖子，将含样本的检测杯放到样本孔。4)关上加热块盖子。5)样本预温５分钟。6)放下纪录笔，打开纪录仪．7)上面记录荧光物强度的绿色的笔将会移动到右边１０／９０处．8)加CHRONO-LUME试剂到样本中．9)让纪录表格运行２分钟．10)打开加热块盖子，用P/N３８８微量加样枪加入５ulCHRONO-LUMEATP标准到样本中，加入的ATP浓度为２nm．11)关闭加热块盖子，直到有荧光反应峰值．逆时针旋转LuminescenceGain开关来增加荧光强度，接着，继续以逐步增强的方式来增大LuminescenceGain,直到发光曲线达到图表中５０％点．纪录下LuminescenceGain值．表格能描述在２nmATP存在情况下，也能通过表格的描述计算聚集反应中ATP的释放．12)一旦，反应的最高峰达到并被记录。拿起记录笔关掉记录仪。　13)打开加热孔盖。如果搅拌子是重复使用的。用P/N３６２搅拌磁棒回收，丢掉比色杯。　吸收峰为２nmATP的值，用mm或小方格表示，这个值用于计算聚集过程中样本的吸收与标准的比较，从而得到ATP释放的绝对值。ATP释放的测量加2nmATP标准到样本后，计算公式简化为test=［样本吸收峰（mm或小方格）／标准物吸收峰（mm或小方格）］×２nm结果结果的计算：阻抗法通常以试剂加入后在反应时间内的OHM的变化来表示如果IMPEDANCEGAIN已经设置好．那么４个大方格代表２０OHM．　　　　每个大方格是５个OHM　　　　每个小方格市０．５个OHM曲线反应部分的切线为斜率．与１分钟的反应建立一个三角形．其高为一分钟的聚集率．根据表格可以直接判断出结果和最恰当的OHM。光学法光学法聚集以反应时间内的聚集率表示．０％的基线与１００％的基线间确认为１００％的聚集率．当用表格纪录时，PRP的基线基本上再１０而PPP的基线在９０．它们之间有８０个小方格．因此每个小方格的表示１００％／８０即１．２５％．荧光法（ATP释放）荧光法以MM活小方格来记录．加2nmATP标准到样本后，计算公式简化为test=［样本吸收峰（mm或小方格）／标准物吸收峰（mm或小方格）］×２nm结果解释全血和PRP的聚集和ATP释放反映曲线可作如下解释：1、与不受药物干扰的正常质控的直接比较。2、与被公认和确定的正常值比较。3、用“rulesofthumb”比较凝血酶的聚集与ATP的释放。比较ATP的释放和胶原、AA的聚集。发表的聚集范围和ATP的释放范围如下；正常 试剂浓度 阻抗值（OHM） 全血中ATPnm PRP(%) 凝血酶1u/ml —— >0.5 ---- 胶原2Ug/ml 21±3*6分钟时 1.1±0.3* >60 花生四稀酸0.5Mm 11±3*6分钟时 1.0±0.2* >60 Ris1.0Mg/ml1,3 >5四分钟时并且或者lag小于70秒 --- >60 ADP5Um2 9±4*六分钟时 0.3±0.2* >60聚集反应对花生四稀酸（AA）无响应，表明聚集反应受环氧化物的抑制。反应在无聚集或正常范围内来回摆动证明在监测前有用药史。有些血拴或心血管疾病对血小板的聚集反应与环氧化物受到抑制类似。血小板活化时，膜磷脂代谢释放AA。AA通过环氧化酶代谢血栓烷合成酶生成血栓烷A2。只有在环氧化酶作用下，才能生成血栓烷A2，阿斯匹林及同类药物抑制血小板聚集和ATP的释放。当血小板储藏池有缺陷时，有血栓烷A2生成，所以有聚集反应，但是没有ATP的释放。ADP诱导的全血聚集要求ADP的浓度(20Um)较PRP诱导聚集时要高.原因可能是红细胞能吸收部分ADP.对凝血酶的释放响应与血栓烷无关,对胶原的聚集、释放反应部分依赖于血栓烷。AA的聚集和释放完全依赖于血栓烷。因此，“rulesofthumb”规则描述为：1)对凝血酶的释放反应缺乏或减少可能是储藏池的缺乏或是释放反应的缺陷。2)胶原的释放较凝血酶的释放要减少一半。表明血栓烷合成酶有减少。3)对AA没有聚集也没有释放则确定血栓烷合成酶有损坏。4)对AA只有聚集没有释放，可能是由于储藏池的减少或分泌的缺陷。VWD是血浆VWF因子缺乏引起的血小板黏附反应的缺陷。在VWF和GPIb受体存在下，Ris能诱导血小板黏附，当血小板对Ris的聚集没有响应时，提示为VWD疾病或GPIb受体缺乏。然而，两相的间隔时间的延长表明标本不正常。可用0.3ng/ml的Ris来区别。血小板数量过多，并且聚集曲线异常，当服用ASA、ibuprofen或同类药物后，Ris的聚集会消失。因为，VWF和Fg受体会有到第二相聚集。对Ris无聚集可能是GPIb受体缺乏。用正常血浆或高浓度的VWF能纠正聚集反应。说明，是VWD而不是BSS.异常的GPIIB-IIIA能使除了Ris外所有的诱导剂结果异常。异常结果：服用阿斯匹林后 试剂浓度 阻抗值（OHM） 全血中ATPnm PRP(%) 凝血酶1u/ml —— 0．3±0.1 ---- 胶原2Ug/ml 14±4*6分钟时 0．3±0.1* <30 花生四稀酸0.5Mm <0。5 <0。1 <20 Ris1.25Mg/ml 12±3* <0。1 <30 ADP5Um2 8±5*六分钟时 <0。1 >60先天性的确血栓烷合成酶异常结果与其很相似。严重的VWD 试剂浓度 阻抗值（OHM） 全血中ATPnm PRP(%) 胶原2Ug/ml 18．56分钟时 1．3 60 花生四稀酸0.5Mm 13六分钟时 1．3 60 Ris1.25Mg/ml <1 <0。1 <1。0 ADP5Um2 15 0．4 60在BernardSoulierSyndrome其结果类似。血小板功能不全 试剂浓度 阻抗值（OHM） 全血中ATPnm PRP(%) 胶原2Ug/ml 106分钟时 0.4 8 花生四稀酸0.5Mm <0。56分钟时 0.3 8 Ris1.25Mg/ml 7.56分钟时 <0.1 70 ADP5Um2 <0.56分钟时 <0.1 <0.1血小板储藏池缺陷 试剂浓度 阻抗值（OHM） 全血中ATPnm PRP(%) 凝血酶1u/ml —— <0.1 80 胶原2Ug/ml 206分钟时 <0.1 70 花生四稀酸1Mm 126分钟时 <0.1 70血小板释放反应的缺乏，聚集反应的结果与其很相似。确认:为了确认疾病，必须作特殊的实验。质控：好的实验室必须做正常质控。阳性质控收集服用ASA的病人和诊断为VWD的病人。过程有如下三个过程1、血的快速检测ASA、,布洛芬摄取和VWD疾病的过程。2、 评价 LEC评价法下载LEC评价法下载评价量规免费下载学院评价表文档下载学院评价表文档下载 血小板功能的过程。3、检查钙离子、血小板形态和聚集功能的过程。筛选过程推断筛选过程用于全血中阿斯匹林、布洛芬摄取和VWD的确快速确诊。阿斯匹林、布洛芬和同类药物抑制血小板的环氧化物酶。在环氧化物酶作用下，可以生成TXA2，能引起聚集反应。聚集反应对花生四稀酸（AA）无响应表明有阿斯匹林、布洛芬和同类药物的摄取。VWD是血浆VWF因子缺乏引起的血小板黏附反应的缺陷。在VWF和GPIb受体存在下，Ris能诱导血小板黏附，当血小板对Ris的聚集没有响应时，提示为VWD疾病或GPIb受体缺乏。样本要求（全血）样本采集完成，要求静脉取样的位置损伤面积要小并且没有郁积。常用的诱导剂除了肾上腺素.血液标本用3.2或3.8的柠檬酸钠1:9抗凝。1份抗凝剂9份全血。样本必须用含标准抗凝剂的真空无菌管收集。测试肾上腺素的血液标本抗凝剂要求：在每毫升1.5%的柠檬酸钠中加2U/ML的HEP混合做抗凝剂。取1份抗凝剂9份全血。样本收集不需要禁食，但不能做剧烈运动。不能吸烟。检测前10天或2周禁止服用影响血小板功能药物。药物对血小板功能的影响在药物影响一章中有详细说明。样本收集完毕应该立即检测。三小时内必须检测完毕。样本应保存在室温。（24℃-27℃）在聚集实验中，P/N365像披垫能被用到。将其放在P/N312检测杯中。具体过程如下：1、取下像披垫上白色不干胶纸。2、不要用手接触到其表面。3、将像披垫放到PRP管的底部。有胶的一面与试管底部相连。并确认以粘贴好。4、将管子放到检测孔，按常规操作。5、实验完毕，那走试管。6、将像披垫与测试杯分离，保持粘胶表面的干净。7、像披垫可重复使用。如果粘胶表面干净并且干燥。可以重复使用20次。8、如果像披垫掉在检测孔里。A用长针从检测孔的边缘将像披垫翻起。B将针沿边缘刺到像披垫中。将其取出。检测准备对于双通道模式的560ca，CHRONO-PARR花生四烯酸和瑞斯西丁素检测可以平行进行。下面的程序采取单通道系统。一个孵育孔用来装盛有1ml生理盐水的清洁的比色杯，当清洁的探针组件不用时可以放置于此杯中以保持温度。新的比色杯和搅拌棒置于空出的孵育孔以确保提供预温的比色杯。要指出的是当一个样本预温时另一个样本正在进行检测，因此缩短了检测运行的时间。1.00将2个P/N367比色杯放入孵育孔。1.01在每个比色杯中加入一个P/N370搅拌棒。1.02将比色杯预温10分钟或稍长1.03用1ml生理盐水稀释1ml加了柠檬酸盐的血液。1.04调整小/大/电阻滑片至电阻位。注意：生理盐水稀释血液时，使用不含防腐剂的盐。许多等渗盐溶液及一些冲洗和浸泡溶液含有如苯甲基乙醇等防腐剂，会抑制聚集和分泌。检测程序1.00吸取1ml稀释血液加入预温的比色杯。1.01预温孔预温样品5分钟。1.02打开加热区盖，将已预温的盛有有搅拌棒和稀释好的加了柠檬酸盐的血液的比色杯放入已记录样品信息的孔。1.03调整STIRRER搅拌速度到10（1000rpm）。1.04电极探针组件插入位于加热孔一边的接口——一已标记的电极接收器。1.05将电极探针组件稳稳插入样本孔中的比色杯中，电极探针组件上的弹簧勾固定在比色杯里并朝向背面。1.06将电极探针组件的连接线卷起塞在探针的后面。盖紧加热区盖子。1.07将记录笔调低并旋至制表档。1.08用聚集仪上的零电阻旋钮将下面的红色电阻笔置于表格的中点。顺时针旋转向右，逆时针旋转向左。变温的电极探针组件和样本会降低电阻，显示为下面的红色电阻笔向左移动。当左移停止时表明电极探针组件和比色杯达到了期望值37℃。如果下面的红色电阻笔偏出了表格，用零电组旋钮重新定位。1.09用聚集仪上的零电阻旋钮将下面的红色笔的初始位置置于左手10（或90）标记处。1.10运行表格2分钟以确保基线稳定。如果曲线一直偏左则表明样本仍在加温。必要时经常用零电阻旋钮重置曲线。注意：如果曲线右偏表明样本产生了自发聚集。丢弃并重加样本或研究自发聚集的原因。1.11按住聚集仪上的校准钮，使记录笔向右偏。在电路中加入20欧姆的标准电阻，使记录笔向右移动。1.12同时用另一只手调动聚集仪上的电阻增加旋钮使记录笔的移动从基线调整到表格的50标记处。顺时针旋转电阻增加旋钮记录笔增加右移，逆时针旋转减小右移。1.13打开加热区盖并用CHRONOLOGP/N移液器加入10ulCHRONO-PARR花生四烯酸试剂。注意：由于检测仅需要微小的试剂体积，因此应先润洗枪头，排除气泡并避免加入过量的试剂。所以，用试剂反复吸打2－3次；使枪头湿润并排除气泡。然后，擦干枪头外部的试剂。微量移液器的枪头一定要插入比色杯的底部将试剂推入样本。不要在比色杯液面上注入试剂，因为试剂会黏附在比色杯壁上而不能与样本混匀。保持活塞压低以避免血液回流。每个检测更换一个枪头。每天检测结束后丢弃废枪头并加一个干净枪头以保护活塞。1.14关闭加热区盖并运行电阻曲线6分钟。1.15设置检测时间结束后抬高记录笔并关闭表格档。1.16打开加热区盖并将电极探针组件从样本中移开。丢弃比色杯和P/N370一次性搅拌棒。在盛有蒸馏水的烧杯中搅动以清洗电极组件。从电极组件上洗掉红细胞和聚集物。灰色/白色血小板聚集通常被血液着色而肉眼可见。再用同样的搅动方式，用生理盐水清理电极探针组件。最后用KimwipesR刷擦干电极探针组件并插入下一个待测样本。注意：为避免电极探针组件沾染纤维，推荐使用KimwipesR刷。如果在检测样本间存在检测间隔，将电极探针组件放入一个预温孔预温的盛有生理盐水的比色杯中。检测完成后，清洗最后一个样本。用蒸馏水冲洗，干燥后置于一个干净的比色杯中。由于不产生纤维，因此不需要用化学腐蚀剂清理电极探针组件。化学腐蚀剂会破坏电极探针组件的绝缘性而无法设置电阻基线。化学腐蚀的电极探针组件无法修复，只能更换。560－ca配用一对P/N369电极探针组件。如果觉得有必要净化电极探针组件，将其浸入1：10稀释的普通漂白剂中大约10秒，用蒸馏水冲净漂白剂。1.17结果通常为从加入试剂开始在给定的时间间隔里聚集的欧姆数或者式聚集的最大欧姆数。如果使用推荐的设置得到的电阻那么20欧姆即为4个大方格：·每个大方格为5欧姆·每个小方格为0.5欧姆结果直接检查图标记录并报告最近欧姆值。1.18柠檬酸盐稀释血液加入10ulCHRONO-PARR利托菌素试剂（终浓度为1.25mg/ml），盛入另一个比色杯进行重复试验。注意从加入利托菌素试剂到产生应答和电阻变化的时间约为4分钟。结果结果解释典型的结果如上，“阿司匹林类”原因破坏血栓素合成而导致花生四烯酸聚集失败。阿司匹林，布洛芬和非类固醇抗炎症药物抑制血小板环氧合酶。环氧合酶活性是花生四烯酸转变为血栓素A2的要素。血栓素A2的产生引起聚集。因此花生四烯酸聚集失败可能是由阿司匹林，布洛芬或类似药物的吸收引起。冯威勒不兰特病是特征是血小板黏附所需的血浆多因子缺乏（vWF）。抗生素利托菌素导致在vWF和GPI受体存在的血小板黏附。因此，利托菌素聚集失败可能是冯威勒不兰特病或GPI受体缺乏（伯－苏病）引起。利托菌素无应答可能是冯威勒不兰特病。在一些情况下，延长的时间仅比试异常。利托菌素过度应答在II型或冯威勒不兰特病中在，可以用终浓度为.3mg/ml的利托菌素确证检测。定性异常，异常聚集曲线和不聚集通常为阿司匹林，布洛芬或类似药物的吸收引起。利托菌素无聚集可能是由于伯－苏病人的GPI受体缺乏引起的。重复实验中加入正常血浆或一定浓度的vWF可以校正冯威勒不兰特病的结果，而伯－苏病人的结果无法校正。确认最终的诊断要由专门检测确认。全面的过程推断用于诊断血小板功能障碍和VWD。包括血小板膜、磷脂、分泌机制、血栓烷综合酶和血桨中因子的缺乏。要发现上面的异常。必须要做凝血酶对ATP的释放反应，胶原、ADP、AA、Ris的聚集和对ATP的释放.样本要求（全血）样本采集完成，要求静脉取样的位置损伤面积要小并且没有郁积。常用的诱导剂除了肾上腺素.血液标本用3.2或3.8的柠檬酸钠1:9抗凝。1份抗凝剂9份全血。样本必须用含标准抗凝剂的真空无菌管收集。测试肾上腺素的血液标本抗凝剂要求：在每毫升1.5%的柠檬酸钠中加2U/ML的HEP混合做抗凝剂。取1份抗凝剂9份全血。样本收集不需要禁食，但不能做剧烈运动。不能吸烟。检测前10天或2周禁止服用影响血小板功能药物。药物对血小板功能的影响在药物影响一章中有详细说明。样本收集完毕应该立即检测。三小时内必须检测完毕。样本应保存在室温。（24℃-27℃）试验准备：在单通道的500-ca上，值控和标本要依次运行。在双通道的560-ca上，值控和标本可平行运行。下面是单通道的运行过程。一个预热孔放好装有1毫升生理盐水的检测杯。当预热孔达到温度时，放好新的检测杯和搅拌子。当运行一个样本时，可提前预温另一个标本。这样会节省检测时间。1.00将5个P/N367检测杯到预温孔1.01在每个杯子中加入一个P/N370搅拌子1.02预温检测杯10分钟或更长。1.03将标本用生理盐水做1：1稀释。1.04选择Small/Large/Impedance滑动开关上的Impendance档。 警告：生理盐水稀释全血时，必须使用不含防腐剂的盐水。许多试剂纯的等张生理盐水和一些灌注液、浸液含有诸如苯甲醇之类的抑制血小板聚集和分泌的防腐剂。测试过程运行ATP标准1.00加900ul稀释好的样本到预温好的检测杯中。1.01在预温孔预温样本5分钟。1.02旋转Rotary开关，减少Luminescencegain的值到最小。1.03设置搅拌速度为10（1000rpm）1.04打开加热块盖子，将含样本的检测杯放到样本检测孔。1.05加100ulCHRONO-LUME试剂到样本1.06关闭加热块盖子1.07放下纪录笔，打开纪录仪开关1.08上面的绿笔，记录发光物，并且快速的移动到右边10/90标记出1.09允许纪录仪运行2分钟1.10打开加热块盖子，并加5ulCHRONO-LUMEATP标准到样本。ATP标准浓度为2nm每天的试验完成后都要丢掉microbore。为了保护plunger更换一个干净的microbore。1.11关闭加热块盖子，直到有荧光反应峰值．逆时针旋转LuminescenceGain开关来增加荧光强度，接着，继续以逐步增强的方式来增大LuminescenceGain,直到发光曲线达到图表中５０％点．纪录下LuminescenceGain值．1.12一旦反应的最高峰达到并被记录。拿起记录笔关掉记录仪。　1.13打开加热孔盖丢掉比色杯。1.14　吸收峰用mm或小方格表示，这个值用于计算ATP释放的值。凝血酶1.00加900ul稀释好的样本到预温好的检测杯中。1.01在预温孔预温样本5分钟。1.02设置搅拌速度为10（1000rpm）1.03打开加热块盖子，将含样本的检测杯放到样本检测孔。1.04加100ulCHRONO-LUME试剂到样本1.05关闭加热块盖子1.06放下纪录笔，打开纪录仪开关1.07上面的绿笔，记录发光物，并且快速的移动到右边10/90标记出1.08允许纪录仪运行2分钟1.9打开加热块盖子，并加100ulCHRONO-PAR凝血酶试剂到样本。凝血酶试剂标准浓度为1u/ml1.10关闭加热块盖子，观察发光物的变化直到有峰值出现，并且以达到一个平台期，有开始下降。1.11当反应的峰值被记录，拿下记录笔，关掉记录仪。1.12打开加热块盖子，丢掉检测杯。1.13吸收峰用mm或小方格表示。胶原1.00加900ul稀释好的样本到预温好的检测杯中。1.01在预温孔预温样本5分钟。1.02设置搅拌速度为10（1000rpm）1.03打开加热块盖子，将含样本的检测杯放到样本检测孔。1.04加100ulCHRONO-LUME试剂到样本1.05将电极放到样本检测孔。电极上的弹簧片放到监测杯里面。560ca对着通道的后面，500ca对着通道的左边。1.06将每个电极与相应的线连接好。将加热块盖子关闭完全。1.07放下纪录笔，打开纪录仪。1.08用“Zeroknob”点，让红色的阻抗取图表中央点。顺时针旋转“Indepancezeroknob”使红色的阻抗笔移动到右边。逆时针则到左边。预温电极，样本会减少其阻抗值让红色的阻抗笔向左移动。当红色的阻抗笔停止向左移动时，证明电极何比色杯达到了需要的37℃。如果红色的阻抗笔走到了图表的外面。用“Impendancezeroknob”从新复位。1.09用聚集仪上的“Impendancezeroknob”将红色的阻抗笔调到最初的纪录。左边的10（或90）。1.10让仪器记录两分钟。以确认基线已经建立。如果曲线往左移动说明样本仍在预温。用“Impendancezeroknob”根据需要从设置基线。1.11按住聚集仪上的定标按钮，仪器会自动产生标准20ohm的环形阻抗。让红色的阻抗笔往右移动。1.12同时，另一个手用聚集仪上的“impendancegainknob”在表格中的基线上标记50。这个步骤标定仪器在标准20ohm的阻抗下，记录笔移动40个小方格。顺时针旋转“impedanceknob”将加快纪录笔的移动速度，逆时针将降低其移动速度。1.13打开加热块盖，加2ulCHRONO-PARcol试剂到样本中。可用P/N353微量加样器。Col的终浓度为2Ug/ml。每天的试验完成后都要丢掉microbore。为了保护plunger更换一个干净的microbor1.14关闭加热块盖子，仪器纪录反应时间内的曲线。最少6分钟。1.15试验完成，拿走纪录笔，关掉记录仪。1.16打开加热块盖子，从样本中取走电极。扔掉检测杯和搅拌子。用蒸馏水以搅拌的方式清洗电极.将电极上的聚集物取走.用生理盐水冲洗并用”KIMPWIPES”檫干电极,放到下一个样本中由于检测.AA1.00加900ul稀释好的样本到预温好的检测杯中。1.01在预温孔预温样本5分钟。1.02设置搅拌速度为10（1000rpm）1.03打开加热块盖子，将含样本的检测杯放到样本检测孔。1.04加100ulCHRONO-LUME试剂到样本1.05将电极放到样本检测孔。电极上的弹簧片放到监测杯里面。560ca对着通道的后面，500ca对着通道的左边。1.06将每个电极与相应的线连接好。将加热块盖子关闭完全。1.07放下纪录笔，打开纪录仪。1.08用“Zeroknob”点，让红色的阻抗取图表中央点。顺时针旋转“Indepancezeroknob”使红色的阻抗笔移动到右边。逆时针则到左边。预温电极，样本会减少其阻抗值让红色的阻抗笔向左移动。当红色的阻抗笔停止向左移动时，证明电极何比色杯达到了需要的37℃。如果红色的阻抗笔走到了图表的外面。用“Impendancezeroknob”从新复位。1.09用聚集仪上的“Impendancezeroknob”将红色的阻抗笔调到最初的纪录。左边的10（或90）。1.10让仪器记录两分钟。以确认基线已经建立。如果曲线往左移动说明样本仍在预温。用“Impendancezeroknob”根据需要从设置基线。1.11按住聚集仪上的定标按钮，仪器会自动产生标准20ohm的环形阻抗。让红色的阻抗笔往右移动。1.12同时，另一个手用聚集仪上的“impendancegainknob”在表格中的基线上标记50。这个步骤标定仪器在标准20ohm的阻抗下，记录笔移动40个小方格。顺时针旋转“impedanceknob”将加快纪录笔的移动速度，逆时针将降低其移动速度。1.13打开加热块盖，加10ulCHRONO-PARAA试剂到样本中。可用P/N353微量加样器。AA的终浓度为0.5mM.每天的试验完成后都要丢掉microbore。为了保护plunger更换一个干净的microbor1.14关闭加热块盖子，仪器纪录反应时间内的曲线。最少6分钟。1.15试验完成，拿走纪录笔，关掉记录仪。1.16打开加热块盖子，从样本中取走电极。扔掉检测杯和搅拌子。用蒸馏水以搅拌的方式清洗电极.将电极上的聚集物取走.用生理盐水冲洗并用”KIMPWIPES”檫干电极,放到下一个样本中用于检测.ADP1.00加900ul稀释好的样本到预温好的检测杯中。1.01在预温孔预温样本5分钟。1.02设置搅拌速度为10（1000rpm）1.03打开加热块盖子，将含样本的检测杯放到样本检测孔。1.04加100ulCHRONO-LUME试剂到样本1.05将电极放到样本检测孔。电极上的弹簧片放到监测杯里面。560ca对着通道的后面，500ca对着通道的左边。1.06将每个电极与相应的线连接好。将加热块盖子关闭完全。1.07放下纪录笔，打开纪录仪。1.08用“Zeroknob”点，让红色的阻抗取图表中央点。顺时针旋转“Indepancezeroknob”使红色的阻抗笔移动到右边。逆时针则到左边。预温电极，样本会减少其阻抗值让红色的阻抗笔向左移动。当红色的阻抗笔停止向左移动时，证明电极何比色杯达到了需要的37℃。如果红色的阻抗笔走到了图表的外面。用“Impendancezeroknob”从新复位。1.09用聚集仪上的“Impendancezeroknob”将红色的阻抗笔调到最初的纪录。左边的10（或90）。1.10让仪器记录两分钟。以确认基线已经建立。如果曲线往左移动说明样本仍在预温。用“Impendancezeroknob”根据需要从设置基线。1.11按住聚集仪上的定标按钮，仪器会自动产生标准20ohm的环形阻抗。让红色的阻抗笔往右移动。1.12同时，另一个手用聚集仪上的“impendancegainknob”在表格中的基线上标记50。这个步骤标定仪器在标准20ohm的阻抗下，记录笔移动40个小方格。顺时针旋转“impedanceknob”将加快纪录笔的移动速度，逆时针将降低其移动速度。1.13打开加热块盖，加5ULCHRONO-PARADP试剂到样本中。可用P/N353微量加样器。AA的终浓度为5.0uM.每天的试验完成后都要丢掉microbore。为了保护plunger更换一个干净的microbor1.14关闭加热块盖子，仪器纪录反应时间内的曲线。最少6分钟。1.15试验完成，拿走纪录笔，关掉记录仪。1.16打开加热块盖子，从样本中取走电极。扔掉检测杯和搅拌子。用蒸馏水以搅拌的方式清洗电极.将电极上的聚集物取走.用生理盐水冲洗并用”KIMPWIPES”檫干电极,放到下一个样本中用于检测.Ris不需要检测ATP的释放。没有诊断表明Ris能诱导ATP的释放。1.00加900ul稀释好的样本到预温好的检测杯中。1.01在预温孔预温样本5分钟。1.02设置搅拌速度为10（1000rpm）1.03打开加热块盖子，将含样本的检测杯放到样本检测孔。1.04将电极放到样本检测孔。电极上的弹簧片放到监测杯里面。560ca对着通道的后面，500ca对着通道的左边。1.05将每个电极与相应的线连接好。将加热块盖子关闭完全。1.06放下纪录笔，打开纪录仪。1.07用“Zeroknob”点，让红色的阻抗取图表中央点。顺时针旋转“Indepancezeroknob”使红色的阻抗笔移动到右边。逆时针则到左边。预温电极，样本会减少其阻抗值让红色的阻抗笔向左移动。当红色的阻抗笔停止向左移动时，证明电极何比色杯达到了需要的37℃。如果红色的阻抗笔走到了图表的外面。用“Impendancezeroknob”从新复位。1.08用聚集仪上的“Impendancezeroknob”将红色的阻抗笔调到最初的纪录。左边的10（或90）。1.09让仪器记录两分钟。以确认基线已经建立。如果曲线往左移动说明样本仍在预温。用“Impendancezeroknob”根据需要从设置基线。1.10按住聚集仪上的定标按钮，仪器会自动产生标准20ohm的环形阻抗。让红色的阻抗笔往右移动。1.11同时，另一个手用聚集仪上的“impendancegainknob”在表格中的基线上标记50。这个步骤标定仪器在标准20ohm的阻抗下，记录笔移动40个小方格。顺时针旋转“impedanceknob”将加快纪录笔的移动速度，逆时针将降低其移动速度。1.12打开加热块盖，加10ulCHRONO-PARRis试剂到样本中。可用P/N353微量加样器。AA的终浓度为1.25mg/ml.也有些试验室用终浓度较低的试剂，0.25—1.0mg/ml.每天的试验完成后都要丢掉microbore。为了保护plunger更换一个干净的microbor1.13关闭加热块盖子，让阻抗曲线达到最大值。1.14一旦达到最大值，拿走纪录笔，关掉记录仪。1.16打开加热块盖子，从样本中取走电极。扔掉检测杯和搅拌子。用蒸馏水以搅拌的方式清洗电极.将电极上的聚集物取走.用生理盐水冲洗并用”KIMPWIPES”檫干电极,放到下一个样本中用于检测.如果不是连续检测样本,将电极放在有生理盐水的检测杯中,并将其放在预温孔备用.最后一个试验完成后,用流动水清洗电极,檫干并放在一个清洁\干燥的检测杯中.如果没有纤维样物质.就没必要用含腐蚀剂的化学试剂来清洗电极.因为这些化学试剂会破坏电极表面的绝缘体,而导致电极不能做出基线.损坏的电极无法修理,必须从新更换.单通道500-CAP/N369电极。双通道560-CAP/N369电极。结果计算1.00阻抗法通常以试剂加入后在反应时间内的OHM的变化来表示如果IMPEDANCEGAIN已经设置好．２０OHM为8厘米（4个大方格）．　　　　每两厘米（每个大方格）为５个OHMs　　　　每四毫米（2个小方格）为1个OHM根据表格可以直接判断出结果和最恰当的OHM。1.01表格中发光物的峰值用毫米或小方格来表示。1.02释放反应的结果用ATP的浓度表示（nmol），用下面的方式计算。Lum.oftestGainofstdTestATPnmol=-----------*-----------*ATPnmolestdGainoftestLum.ofstd加2nmATP标准到样本后，计算公式简化为test=［样本吸收峰（mm或小方格）／标准物吸收峰（mm或小方格）］×２nm结果解释全血和PRP的聚集和ATP释放反映曲线可作如下解释：1与不受药物干扰的正常质控的直接比较。2与被公认和确定的正常值比较。3用“rulesofthumb”比较凝血酶的聚集与ATP的释放。比较ATP的释放和胶原、AA的聚集。发表的聚集范围和ATP的释放范围如下；正常 试剂浓度 阻抗值（OHM） 全血中ATPnm 凝血酶1u/ml —— >0.5 胶原2Ug/ml 15—276分钟时 0.5—1.72 花生四稀酸0.5Mm 5-176分钟时 0.6—1.4 Ris1.25Mg/ml >5四分钟时并且或者lag小于70秒 --- ADP5Um2 1--17六分钟时 0.0—0.7血小板活化时，膜磷脂代谢释放AA。AA通过环氧化酶代谢血栓烷合成酶生成血栓烷A2。只有在环氧化酶作用下，才能生成血栓烷A2，阿斯匹林及同类药物抑制血小板聚集和ATP的释放。当血小板储藏池有缺陷时，有血栓烷A2生成，所以有聚集反应，但是没有ATP的释放。ADP诱导的全血聚集要求ADP的浓度(20Um)较PRP诱导聚集时要高.原因可能是红细胞能吸收部分ADP.对凝血酶的释放响应与血栓烷无关,对胶原的聚集、释放反应部分依赖于血栓烷。AA的聚集和释放完全依赖于血栓烷。因此，“rulesofthumb”规则描述为：1、对凝血酶的释放反应缺乏或减少可能是储藏池的缺乏或是释放反应的缺陷。2、胶原的释放较凝血酶的释放要减少一半。表明血栓烷合成酶有减少。3、对AA没有聚集也没有释放则确定血栓烷合成酶有损坏。4、对AA只有聚集没有释放，可能是由于储藏池的减少或分泌的缺陷。VWD是血浆VWF因子缺乏引起的血小板黏附反应的缺陷。在VWF和GPIb受体存在下，Ris能诱导血小板黏附，当血小板对Ris的聚集没有响应时，提示为VWD疾病或GPIb受体缺乏。然而，两相的间隔时间的延长表明标本不正常。可用0.3ng/ml的Ris来区别。血小板数量过多，并且聚集曲线异常，当服用ASA、ibuprofen或同类药物后，Ris的聚集会消失。因为，VWF和Fg受体会有第二相聚集。对Ris无聚集可能是GPIb受体缺乏。用正常血浆或高浓度的VWF能纠正聚集反应。说明，是VWD而不是BSS.异常的GPIIB-IIIA能使除了Ris外所有的诱导剂结果异常。异常结果：服用阿斯匹林后 试剂浓度 阻抗值（OHM） ATPnm 凝血酶1u/ml —— 1.5-2.3 胶原2Ug/ml 6-226分钟时 0.2–0.5 花生四稀酸0.5Mm 1 <0。1 Ris1.25Mg/ml 1–156分钟时 <0。1 ADP5Um2 0-186分钟时 <0。1先天性的确血栓烷合成酶异常结果与其很相似。VWD 试剂浓度 阻抗值（OHM） ATPnm 胶原2Ug/ml 18.56分钟时 1．3 花生四稀酸0.5Mm 136分钟时 1．3 Ris1.25Mg/ml <1 <0。1 ADP5Um2 15 0．4在BernardSoulierSyndrome其结果类似。血小板功能不全 试剂浓度 阻抗值（OHM） ATPnm 胶原2Ug/ml 106分钟时 0.4 花生四稀酸0.5Mm <0。56分钟时 0.3 Ris1.25Mg/ml 7.56分钟时 <0.1 ADP5Um2 <0.56分钟时 <0.1血小板储藏池缺陷 试剂浓度 阻抗值（OHM） ATPnm 凝血酶1u/ml —— <0.1 胶原2Ug/ml 206分钟时 <0.1 花生四稀酸1Mm 126分钟时 <0.1血小板释放反应的缺乏，聚集反应的结果与其很相似。确认:为了确认疾病，必须作特殊的实验。质控：好的实验室必须做正常质控。阳性质控收集服用ASA的病人和诊断为VWD的病人。钙离子，洗涤血小板中发光物质时形态的变化和聚集检测原理诱导剂激活血小板，释放出钙离子，使血小板胞质内的钙离子浓度在1秒内迅速增加。因此，钙离子的增加被看作血小板响应的启动过程。因此，检测检测钙流的变化，同时发生变形和聚集。对血小板功能的研究提供了有价值的工具。检测原理：结合的钙离子发射蓝色的光。发光物的强度表明了钙离子的浓度。检测范围2.5*10-7–2.5*10-9。发光物的来源与处理。做钙离子研究的发光物能从下面的地方获得：FridayHarborPhotoproteinsJ.R.BlinksPostofficeBox3050FridayHarborWA98250U.S.A.电话:(206)378-6384;传真：（206）543–1273发光蛋白质是一种冻干粉，在每毫升含150mMKcl5mM肝素的溶液中加1毫克发光蛋白质。出售的发光蛋白用玻璃的安剖瓶装着，每瓶含1毫克的发光蛋白。用时，冻干得发光蛋白用PH7.4，含7mM的EGTA的去离子水复溶。分装成10等份。每份含发光蛋白3mg/ml。并冰冻到-80度备用。可保持几个月。处理发光蛋白时，一定要注意千万不能被钙离子污染。打开小瓶前用EGTA清洁瓶子的外部。清洗所有可能与发光蛋白有联系的项目，包括用EGTA制备发光蛋白的分装品。所有的水,必须过滤掉钙离子。不然，存在的钙离子将会发光蛋白释放。另一个会释放发光蛋白的污染物是银。不要将ph电极放到任何与发光蛋白接触的溶液中。因为，参比电极会导致银染物。如果必须要测试PH值，从溶液中取一份样本，测量PH值后，将样本丢弃。样本的准备：PRP的制备：40毫升柠檬酸盐抗凝的全血在160g离心力作用下，离心15分钟。试剂和器材1、1M枸橼酸2、含EGTA和PGE1的HEPES缓冲盐140mMNaCL5mMEGTA2.7mMKCL1UMPGE10.1%血清蛋白0.1%葡萄糖3.8mMHEPESPH=7.63、HEPES缓冲盐140mMNaCL2.7mMKCL0.1%血清蛋白0.1%葡萄糖3.8mMHEPESPH=7.64、含钙和镁的HEPES缓冲盐140mMNaCL1mM氯化钙2.7mMKCL1m.M氯化镁0.1%血清蛋白0.1%葡萄糖PH=7.6制作缓冲液时，将NaCL、KCL、HEPES作10倍稀释。同样氯化钙、氯化镁也作10倍稀释。5、DMSO货号20684。高级纯的物质。保存在50毫升含氮气的试剂瓶中。DMSO容易受潮，受潮后会释放有毒的亚硫酸盐和硫磺类物质。6、Tritonx-100货号28314。Tritonx-100中含10%的水溶液。7、注射式注射器---Chrono-logP/N9751-20ul注射器。注射器上的加样针型号P/N976，有22个标准量成，2.65英寸长。8、P/N367检测杯。9、P/N370搅拌子。10、普通离心机。11、Eppendorf高速离心机。12、Eppendorf试管。发光蛋白的装载过程1.00再PRP血浆中加9/1000的1M枸橼酸。调解样本的PH值为6.1。1.01将上诉血液用800g离心力15分钟。1.02在原始的PRP中加入等体积的含EGTA和PGE1的HEPES缓冲盐重悬。1.03处理标本如1.011.04加90ul含EGTA和PGE1的HEPES缓冲盐重悬。在1.5毫升的微量试管中加10ul的发光蛋白原液。1.05在1.5分钟内，加6*1ml的DMSO1.06孵育2分钟。1.07加1.0毫升的HEPES缓冲盐1.08用1000g离心力90秒钟。1.09加1.0毫升HEPES缓冲盐重悬。1.10用1000g离心力90秒钟1.11丢弃大量的漂浮物，加1.0毫升的HEPES缓冲盐重悬，更上面一样离心。1.12丢弃大量的漂浮物，保留小球样的物质。1.13最后，在含钙和镁的HEPES缓冲盐中重悬。测试过程打开聚集仪和记录仪。等待温度上升到37度。1.00用small/large/impedance。选择大位置。1.01预温P/N367一次性塑料检测杯。1.02加P/N370搅拌子到每个检测杯。1.03加1ml洗涤过的含发光蛋白的血小板到检测杯。这就是检测样本。1.04加500ul缓冲液到P/N312检测杯。1.05打开加热块盖子，将样本放到检测孔。将参比液放到对照孔。1.06关闭加热块盖子，上面的绿色笔将会移动，表明光电倍增管interlock开关操作正确。1.07选择适当的搅拌速度。1.08将Luminescencegain调节到*0.1档。1.09放下纪录笔，打开纪录仪。1.10按住基线设置钮。在纪录纸上红色的笔会在右边移动10/90行。相当于100%的光变化。放开按钮，红色的纪录笔绘在左边移动10/90行，相当于0%的光变化。上面的绿色的笔记录发光反应前钙水平的基线。如果红色的纪录笔作循环运动。表明没法设置光的变化。有下面几种可能：1、将洗涤的血小板和参比液放反了。2、测试样本与参比液间的血小板计数差别不大。（小于30*109/L）3、检测杯没有放到仪器上。1.11让表格运行足够长的时间确保基线建立完成。1.12加agonist到样本。用P/N97注射器和P/N976加样针通过Lighttight孔加样。注意，当将加样针放到和拿出Lighttight孔时，一定不要打开Lighttight孔的盖子。当吸下一个试剂时，用10mM的EGTA冲洗P/N97注射器和P/N976加样针，然后用chelexedwater冲洗两遍。1.13发光物的变化表明有钙离子流。将Luminescencegain调高会增大发光曲线的振幅。将Luminescencegain调地会减低发光曲线的振幅。若gain值调的较高（*2gain），在10mV振幅上能发现有很大的干扰。这是光倍增管的特性。若gain值调到最低（*0.005）,而Luminescence的信号任超出了表格的接受宽度。用1%的NeutralDensity虑光片可减弱其强度。经常用柔软的抹布檫干净NeutralDensity虑光片上的指纹、檫痕等。如果需要，可以用玻璃清洗剂，如windex。打开加热块盖子，拿住NeutralDensity虑光片的边缘、上面的很小部分，将虑光片放到检测杯和加热墙之间。在560-ca的正面，500-ca的右边。检测完毕记住将NeutralDensity虑光片拿走。虑光片上的小孔由于将其拿出和移走。1.14光发送的减少表明血小板形态有改变。光发送的增加表明聚集的产生。1.15打开加热块盖子，丢弃检测杯和搅拌子。运行后，发光蛋白活性减弱，试验必须马上测试。药物干扰血小板功能受很多药物的干扰。试验前病人应严禁服药。病人的用药史很重要，根据用药情况和检测结果作个表格也很重要。抑制血小板聚集和释放的主要药物为，non-steroidalanti-inflammatories。实验室应注意上述药物。然而，阿斯匹林和ibuprofen在很多柜台药中都含有。检测前一周不能服用阿斯匹林和阿斯匹林复合物。其他影响血小板聚集的药物，在监测前48小时禁服。下面几种类型影响血小板功能的药物；前列腺素E、EDTA、AMP、巯基抑制物。测试过程中抑制释放反应、抑制ADP诱导的聚集、COL诱导的黏附的药物。阿斯匹林（阻断环氧化酶）苯磺唑酮甲灭酸氯喹苯基丁氮酮同时抑制第一相、第二相聚集的药物。二甲基联吡啶二酮其他抑制血小板的药物抗抑郁剂类药物，如ChlorpromazineImipramineAmitriptylinePromethazineClofibrate、Cyprohepatadine、Pyrinolcarbamate、Glycerilquaicolate、Nitrofurantoin、Furosemide、Penicillin阻断Adrenergic的药物。危险做血小板聚集试验没有很大的危害。然而，运输样本和取样时正常的预防时必需的。如果，觉得有必要消毒探测电极。将家用漂白剂1：10倍稀释后，冲洗10秒，然后用蒸馏水清洗干净。仪器内部有高电压，没有允许用户不能擅自打开仪器盖子。注意为确保仪器的安全，仪器必须接地线，不要使用转接器或从电线中除去地线。可用带地线的三相电线。不要将液体或食物放在仪器上。除了比色杯，不要放任何东西到测试孔。风扇口不要方任何东西。通风仪器必须放在通风处，请必须注意以下几点。1、安装时聚集仪不要离墙很近。2、仪器不要放在阳光直射的地方。3、仪器周围不要有热源。4、确保仪器所有的开放部位都保持不受阻断，尤其是风扇。维护与保养电极组所有测试完成后，用水清洗电极，后用蒸馏水清洗一遍。风干并放在干净、干燥的检测杯中。不要用含腐蚀性的化学试剂清洗电极。腐蚀性的试剂会损坏电极表面的绝缘层。绝缘层的损坏会无法给出正确的阻抗基线。损坏的电极无法维修，必须从新更换。光路隔膜反复测量后，测量灯会变暗，可从结果图中的基线上发现。更换P/N365橡皮垫。过程如下。1关机。为了阻止光电管因光线太强而爆坏。2在样本位空的情况下，移走P/N362。3将隔膜块上面有两个螺丝取下来，将P/N365从其上的孔中拿走。4装上新的P/N365，取下P/N365上的白色胶带。5将P/N365放到隔膜块下面的孔中。6重新安装隔膜块。拧紧螺丝。确定隔膜块已装好。螺丝必须拧紧但不能拧过头。打开电源。下面的项目不要求总做。但每年定一次标是必需的。如果要进行定标和维护保养必须请专业的工程师或经过厂家专业培训的工程师。在说明的48节中有维修手册。在加拿大与Chrono-log维修部联系。美国外的其他地方。与当地经销商联系。没有经销商的地方与Chrono-log直接联系。清洗液体清洁剂—用一份的液体清洁剂与3份的水混合来清洁仪器的外部。用一块柔软潮湿的、干净的布，沾清洁液清洁仪器表面。用小的吸尘器将仪器外部的灰尘和脏东西去掉。清洁仪器1、关机。断开与仪器连接的任何东西。2、用吸尘器将仪器夹缝和小孔中的灰尘和脏东西去掉。3、在柔软的湿布上沾好配置好的清洗液。注意：不要让布浸透在清洁液中。也不要使清洁液滴在仪器上。4、用湿布檫试仪器外部。自动定标程序按一个按钮仪器自动对光学通道进行定标，并能确认仪器的光学通道的操作时正确的。通过光检测电路的循环。能调节光路LED的强度。给出合适的定标电压。再两个P/N312检测杯中，每个放5毫升水备用。检测杯不同，在输出电压上会有细微的差别。选择视觉上差别较小的一对。检测杯差别越小，定标会越准确。在一些步骤中会用到秒表或定时器。在500和600系列的仪器，确认检测杯已放到加热块上。在CA系列的仪器，将档位调节到小位置上。定标开关，在仪器的后面。是用钥匙激活得键。当定标程序没有使用时，钥匙不要放在开关上。钥匙要放在安全的地方。如果钥匙丢失，要从工厂从新购买。在严密的操作挂过程中。可能有不正确的结果。最后的5步，检查定标结果的准确性并能使操作人员有结果的纪录。1、打开仪器等待预温10-15分钟。直到加热块的温度达到37℃。有PPP开关的仪器，确认开关设置在PPP样本通道上。并不是通道一就是PPP通道。2、取两个P/N312检测杯，每个检测杯中加500毫升水。要求检测杯干净，下半部分没有指印。孵育检测杯最小5分钟。3、孵育5分钟后，检查检测杯中是否有气泡，如果有，震动试管去除气泡。4、开始记录输出数据。A联电脑的仪器----打开电脑，在windows下，开启AGGRO/LINK。在聚集菜单下，选择运行试验。B对于图表纪录的仪器---打开纪录仪，开始走纸。5、将装有水的检测杯放到PRP的通道1中。让PPP的通道1空着。按住Baseline按钮，检查基线在100%的聚集处，放掉按钮，基线将到0%处。6、重复第5步操作。7、将一个装水的检测杯放到PRP通道1，另一个放到样本PPP通道1，察看电脑显示屏上的纪录（或图表上的纪录），曲线将在100%基线处。8、每个通道都重复第7步的操作。定标9、将钥匙放到定标开关。用钥匙将定标开关旋转90度，让其处于开的状态。10、将装好水的检测杯放到样本通道1的PRP检测孔，第二个放到样本通道1的PPP检测孔，设置时间1分钟。按住Baseline按钮，开始计时。通道定标需要1分钟，在1分钟内不要触动或移动样本杯。如果移动样本杯，基线将会有错误。在进行下一个试验前，让时间运行完全。11、每个通道都重复第10步。12、设置时间1分钟。拿出两个装水的检测杯并启动时间。时间运行完成，逆时针旋转90度从开关中取出钥匙。快速定标试验13、将一个装水的检测杯放在通道1的PRP检测孔，让通道1的PPP检测孔是空的。按住Baseline按钮，检查基线在100%的聚集处，放掉按钮，基线将到0%处。14、通道2、3、4重复第13步。15、将一个装水的检测杯放到PRP通道1，另一个放到样本PPP通道1，察看电脑显示屏上的纪录（或图表上的纪录），曲线将在100%（误差小于5%）基线处。可以慢慢的旋转检测杯，观察由于检测杯各部分的不同引起的输出变化。注意：如果15步的结果偏差大于5%，表明自动定标的设置不正确。用新的检测杯装水从新测试。如果第二次的结果仍然大于5%，仪器需要保养。与维修部门联系。16、每个通道都重复第15步。17、完成后，打印曲线，标记日期和水测试的定标。保存曲线留作参考，将钥匙保存到安全的地方。讨论清晰的水样本能允许最大量的光线通过。仪器在出厂时，都用水标本作过电压校正。自动定标程序从新设置当水标本在检测孔是的电压。水标本的光密度是相同的，并允许通过样本的光强度是相同的。为1输出，在聚集曲线上为100%基线。由于检察定标过程的设置是正确的。有时，由于检测杯间的差异，导致100%处的偏差大于5%。当观察每个通道的输出时，微微转动检测杯。如果还是偏差大，必须换新的样本和检测杯从新作试验。如果第二次试验运行完成后，记录的偏差仍然在允许范围外，表明系统的光学通道不均衡，有下面几个因素可能导致：光学通道中有脏物或漂流物。清洁仪器从新定标来较正问题。如果问题仍没解决，与维修部门联系或与当地经销商联系。附件A几种类型的聚集和释放曲线一．光学聚集的操作步骤1.将选择好的反应杯并加入编号为P/N313的磁棒放于育温孔，育温5分钟。2.加入500ul检测标本的PRP在反应杯中或250ul检测标本的PRP到编号为P/N312反应杯内（但需加橡皮垫），育温5分钟。3.加入500ul的检测标本的PPP（乏血小板血浆）到另一反应杯中，不需要加磁棒，育温5分钟。4.打开加热盖将检测标本的PRP放入PRP位置，将检测标本的PPP放入PPP位置。5.关闭盖子，调整旋转速度为1000-1200转/分钟。6.按SetBaselines按钮，电脑显示屏上自动设置100%的基线。松开按钮，自动设置0%基线。7.按照所用的试剂种类和方法学加试剂（加之前要记得用无尘吸水纸擦拭枪头保证结果准确）之后马上关闭盖子，防止外界光可能产生影响。8.让曲线运行6-9分钟至其比较平稳时在Aggregoment菜单内选择Stoptest。9.在Edit菜单中选择setstarttimeandstoptime之后选择预编辑的chanal，然后图形中光标点住左边线左键点住拖动此线到开始加试剂的位置，之后光标点住右边线同样拖动至曲线开始趋于平稳的位置，最后Done一下。10.在Edit菜单中选择comput……确认时间后便可计算出聚集率和坡度（坡度代表单位时间内聚集率的变化）。11.得到的结果可以通过File菜单中的print进行打印、Save进行保存。12.四个通道,操作相同如上所述步骤。注意注意：如果曲线往左边走，证明样本中有自发聚集产生。更换样本或检查自发聚集产生的原因。注意：每个试验的试剂用量很少。加样小孔要求是潮湿的并且没有气泡。应此，在用microbore时，现在其中装满试剂，后排出试剂，重复操作2-3次。最后根据要求的试剂量排出多余的试剂。将需要的试剂留下。用微量加样器加样时，加样枪头必须到检测杯的底部，并且快速、完全的加入试剂，千万不要将试剂加到样本的上面，这样会使试剂、样本混合不均匀。移走加样枪时，按一下活塞，以阻止样本进入到microbore中。做每个试验都要更换microbore注意:用KIMPWIPES檫干电极时,不能再电极上留下丝状物.注意:如果曲线往右移动，表明样本内有自身凝集，丢弃并更换样本，调查发生自身凝集的原因。注意：每个试验的试剂用量很少。加样小孔要求是潮湿的并且没有气泡。应此，在用microbore时，现在其中装满试剂，后排出试剂，重复操作2-3次。最后根据要求的试剂量排出多余的试剂。将需要的试剂留下。用微量加样器加样时，加样枪头必须到检测杯的底部，并且快速、完全的加入试剂，千万不要将试剂加到样本的上面，这样会使试剂、样本混合不均匀。移走加样枪时，按一下活塞，以阻止样本进入到microbore中。做每个试验都要更换microbore注意：当用生理盐水稀释全血时，用不含防腐剂的盐水，许多含渗盐水的试剂、冲洗剂中都有防腐剂。他会影响血小版的聚集。注意：加ATP标准物后，关闭加热孔盖子、旋转LuminescenceGain动作一定要迅速。如果动作慢会丢失反应的最高峰。注意：每个试验的试剂用量很少。加样小孔要求是潮湿的并且没有气泡。应此，在用microbore时，现在其中装满试剂，后排出试剂，重复操作2-3次。最后根据要求的试剂量排出多余的试剂。将需要的试剂留下。用微量加样器加样时，加样枪头必须到检测杯的底部，并且快速、完全的加入试剂，千万不要将试剂加到样本的上面，这样会使试剂、样本混合不均匀。移走加样枪时，按一下活塞，以阻止样本进入到microbore中。做每个试验都要更换microbore注意：加ATP标准物后，关闭加热孔盖子、旋转LuminescenceGain动作一定要迅速。如果动作慢会丢失反应的最高峰。注意：如果曲线往左边走，证明样本中有自发聚集产生。更换样本或检查自发聚集产生的原因。注意：每个试验的试剂用量很少。加样小孔要求是潮湿的并且没有气泡。应此，在用microbore时，现在其中装满试剂，后排出试剂，重复操作2-3次。最后根据要求的试剂量排出多余的试剂。将需要的试剂留下。用微量加样器加样时，加样枪头必须到检测杯的底部，并且快速、完全的加入试剂，千万不要将试剂加到样本的上面，这样会使试剂、样本混合不均匀。移走加样枪时，按一下活塞，以阻止样本进入到microbore中。做每个试验都要更换microbore注意:用KIMPWIPES檫干电极时,不能再电极上留下丝状物注意：如果曲线往左边走，证明样本中有自发聚集产生。更换样本或检查自发聚集产生的原因。注意：每个试验的试剂用量很少。加样小孔要求是潮湿的并且没有气泡。应此，在用microbore时，现在其中装满试剂，后排出试剂，重复操作2-3次。最后根据要求的试剂量排出多余的试剂。将需要的试剂留下。用微量加样器加样时，加样枪头必须到检测杯的底部，并且快速、完全的加入试剂，千万不要将试剂加到样本的上面，这样会使试剂、样本混合不均匀。移走加样枪时，按一下活塞，以阻止样本进入到microbore中。做每个试验都要更换microbore注意：如果曲线往左边走，证明样本中有自发聚集产生。更换样本或检查自发聚集产生的原因。由于红细胞对ADP有吸收，每个试验室应建立正常反应的ADP浓度。推荐使用终浓度为20uM的ADP。注意：每个试验的试剂用量很少。加样小孔要求是潮湿的并且没有气泡。应此，在用microbore时，现在其中装满试剂，后排出试剂，重复操作2-3次。最后根据要求的试剂量排出多余的试剂。将需要的试剂留下。用微量加样器加样时，加样枪头必须到检测杯的底部，并且快速、完全的加入试剂，千万不要将试剂加到样本的上面，这样会使试剂、样本混合不均匀。移走加样枪时，按一下活塞，以阻止样本进入到microbore中。做每个试验都要更换microbore注意：如果曲线往左边走，证明样本中有自发聚集产生。更换样本或检查自发聚集产生的原因。注意：每个试验的试剂用量很少。加样小孔要求是潮湿的并且没有气泡。应此，在用microbore时，现在其中装满试剂，后排出试剂，重复操作2-3次。最后根据要求的试剂量排出多余的试剂。将需要的试剂留下。用微量加样器加样时，加样枪头必须到检测杯的底部，并且快速、完全的加入试剂，千万不要将试剂加到样本的上面，这样会使试剂、样本混合不均匀。移走加样枪时，按一下活塞，以阻止样本进入到microbore中。做每个试验都要更换microbore