不同
方法
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检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌结果比较湖北省黄梅县中医医院检验科梅品玉摘要：目的比较不同方法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检出阳性率。方法对我院分离的100株金黄色葡萄球菌同时采用苯唑西林纸片法、普通M-H平板纸片扩散法和PBP2a乳胶凝集法进行检测，比较三种方法对MRSA的检出率结果苯唑西林纸片法与普通M-H平板纸片扩散法相比具有显著性差异（P<0.05），且苯唑西林纸片法与PBP2a乳胶凝集法相比也具有显著性差异（P<0.05）。结论M-H平板纸片扩散法和PBP2a乳胶凝集法两种方法均可得到较满意结果，可作为检测MRSA的可靠方法。关键词：耐甲氧西林；金黄色葡萄球菌；检测金黄色葡萄球菌是临床上常见的毒性较强的细菌，1961年英国学者Jevons就首次发现了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillinresistantStaphylococcusaureus，MRSA），MRSA从发现至今感染几乎遍及全球，且MRSA对所有的β-内酰胺类抗生素都耐药，而且对其他种类的抗生素也经常表现为交叉耐药，由MRSA引起的感染已成为临床抗感染治疗的难
题
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之一[1]。本文对MRSA的三种不同检测方法结果比较，为控制金黄色葡萄球菌感染，指导临床治疗提供参考。1资料与方法1.1实验
材料
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与试剂本研究所用到的实验菌株为2009年3月来本院临床标本分离出的金黄色葡萄球菌100株，
标准
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菌株为金黄色葡萄球菌ATCC25923、ATCC43300，购自卫生部临床检验中心。抗菌药物：1μɡ/片苯唑西林药敏片购自北京天坛生物制品有限公司，苯唑西林标准品购自重庆药友制药有限公司。MRSA琼脂筛选培养基:配置M-H琼脂平板时加入4%NaC，l经高压灭菌，冷却至50℃时加入苯唑西林，使最终浓度为6μɡ/ml倾注平板。1.2方法（1）苯唑西林纸片法（A）：苯唑西林含量为1μg/片，平皿中M-H琼脂厚度为4mm，菌液调至0.5麦氏单位涂布于含40g/LNaCl的M-H平板上，贴上苯唑西林纸片，在35℃环境下孵育24h。抑菌直径≤10mm即判断为耐甲氧西林菌株阳性。质量控制:以金黄色葡萄球菌ATCC（R）43300为MRSA阳性参考菌株，金黄色葡萄球菌ATCC25923为MRSA阴性参考菌株及药敏指控菌株与试验菌株同时进行检测。（2）普通M-H平板纸片扩散法（B）：配制0.5麦氏单位菌液接种于普通M-H平板，贴1μɡ/片苯唑西林药片，35℃，24h观察结果（阴性菌株需孵育48h观察结果）。金黄色葡萄球菌抑菌圈≤13为敏感，11~12为中介，≤10为耐药；凝固酶阴性葡萄球菌≥18为敏感，≤17为耐药。（3）PBP2a乳胶凝集法（C）：采用Slidex!MRSADetection试剂盒检测，严格按试剂盒说明
书
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进行操作。结果判断标准:只有乳胶试剂（R1）反应圈产生凝集，判定PBP2a即为MRSA阳性，R1/R2反应圈均无凝集，判定PBP2a即为MRSA阴性。2结果 对3种方法检出阳性率进行χ2检验，其中苯唑西林纸片法与普通M-H平板纸片扩散法相比具有显著性差异（χ2=1.23，P<0.05）。苯唑西林纸片法与PBP2a乳胶凝集法相比也具有显著性差异（χ2=0.98，P<0.05）。见表1。表13种方法检测MRSA的比较方法阳性（例）阴性（例）阳性率（%）苯唑西林纸片法465446.0M-H平板纸片扩散法643664.0PBP2a乳胶凝集法653565.03结论金黄色葡萄球菌是临床上常见的毒性较强的细菌，自从上世纪40年代青霉素问世后，金黄色葡萄球菌引起的感染性疾病受到较大的控制，但随着青霉素的广泛使用，有些金黄色葡萄球菌产生青霉素酶，能水解β-内酰胺环，表现为对青霉素的耐药。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）是医院感染和社区感染的重要病原菌之一，它对甲氧西林在内的多种抗菌药物耐药，由于该耐药性的遗传物质能够在细菌之间传播，易使所致感染呈暴发流行。常见金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类抗生素的耐药机制主要有两种:一是可产生β-内酰胺酶，水解β-内酰胺类抗生素而致耐药；二是产生过量的青霉素结合蛋白（PBPs），使常用血药浓度的抗生素不能完全破坏细菌细胞壁的合成，部分细菌继续生长。这两类耐药菌的共同特点是仅耐受较低浓度的甲氧西林，使半合成β-内酰胺类抗生素失去抗药性，加大抗生素浓度或使用β-内酰胺酶抑制剂可解除耐药。MRSA的耐药机制不同于以上两种，其特有的mecA基因大量表达一种特殊的青霉素结合蛋白PBP2a，PBP2a与β-内酰胺类抗生素结合活性很低，可替代高亲和力PBPs行使功能而致耐药。由于目前临床上由于MRSA的出现致使感染趋势不断上升，耐药性增强，给临床治疗带来困难[2]。正确快速地检测MRSA并找出有效控制其感染的药物，是目前临床微生物工作的任务之一。MRSA检测方法有PBP2a胶乳凝集法、苯唑西林纸片和M-H平板纸片扩散法等。为了寻找出适合基层医院实验室检测MRSA的简单而又可靠的方法，本研究对对上述3种方法进行了评价。结果显示，苯唑西林纸片法与普通M-H平板纸片扩散法相比具有显著性差异（P<0.05）；苯唑西林纸片法与PBP2a乳胶凝集法相比也具有显著性差异（P<0.05），所以M-H平板纸片扩散法和PBP2a乳胶凝集法两种方法均可得到较满意结果，即可作为检测MRSA的可靠方法。总之，MRSA已经成为主要病原菌之一，它具有高耐药率和多药耐药性，选择一种快速、简便、准确的方法检测MRSA，有利于及时控制感染和医院暴发流行，指导临床合理使用抗菌药物。参考文献：[1]朱以军,李向阳.荧光实时PCR法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的研究[J].中华医院感染学杂志,2007,17(7):898-900[2]吕火祥,沈蓓琼,潘立勇,等.1997~2001年耐甲氧西林葡萄球菌临床分离率及耐药性分析[J].检验医学,2004,19(3):220-224.
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