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土壤过氧化氢酶的测定方法

土壤过氧化氢酶的测定方法T/NAIAXXXX—2020ICS13.080.30B10团体标准T/NAIAXXXX—2020土壤过氧化氢酶活性的测定（高锰酸钾滴定法）2020-XX-XX发布2020-XX-XX实施宁夏化学分析测试协会发布T/NAIAXXXX—2020前言本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》规定编写。本标准由宁夏昊标检测服务研究院（有限公司）提出。本标准由宁夏化学分析测试协会归口。本标准起草单位：宁夏昊标检测服务研究院（有限公司）、宁夏大学、宁夏农林科学院荒漠所、银川能源学院、宁夏化...

T/NAIAXXXX—2020ICS13.080.30B10团体标准T/NAIAXXXX—2020土壤过氧化氢酶活性的测定（高锰酸钾滴定法）2020-XX-XX发布2020-XX-XX实施宁夏化学分析测试协会发布T/NAIAXXXX—2020前言本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》规定编写。本标准由宁夏昊标检测服务研究院（有限公司）提出。本标准由宁夏化学分析测试协会归口。本标准起草单位：宁夏昊标检测服务研究院（有限公司）、宁夏大学、宁夏农林科学院荒漠所、银川能源学院、宁夏化学分析测试协会。本标准主要起草人：任亚丽、白玲、张亮亮、卜姣姣、杨洁、季波、鲁静、张小飞、刘娜娜。本标准于2020年XX月XX日首次发布。T/NAIAXXXX—2020土壤过氧化氢酶的测定（高锰酸钾滴定法）范围本标准规定了土壤过氧化氢酶的测定方法（高锰酸钾滴定法）。本标准适用于各类土壤过氧化氢酶的测定（高锰酸钾滴定法）。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的应用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T601化学试剂标准滴定溶液的制备GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法NY/T1121.1土壤检测第一部分：土壤样品的采集、处理和贮存原理在4℃条件下，土壤过氧化氢酶酶促分解过氧化氢，用高锰酸钾标准溶液滴定反应剩余过氧化氢，所消耗的高锰酸钾标准溶液体积数来表示过氧化氢酶的活性。试剂和溶液除非另有说明外，本方法均使用符合国家标准的分析纯试剂，分析用水为规定的三级水。GB/T66824.1甲苯（C7H8）。4.2浓硫酸（H2SO4）。4.3过氧化氢（H2O2）。4.44高锰酸钾（K2MnO）。4.5硫酸溶液（0.2mol/L）准确移取5.43mL浓硫酸，缓缓注入400mL水中，冷却后用水定容至500mL。置于4℃冰箱贮存。4.6高锰酸钾标准溶液c（1/54）=K2MnO0.1mol/L称取3.3g（精确至0.0001g）高锰酸钾，溶于1050mL水中，缓缓煮沸15min，冷却，于暗处放置两周，过滤。贮存于棕色瓶中，并按照GB/T601对其进行标定。4.7过氧化氢水溶液（3%）准确量取30%过氧化氢溶液25mL，用水定容至250mL，配成3%过氧化氢水溶液，置T/NAIAXXXX—2020于4℃冰箱贮存，临用时用0.1mol/L高锰酸钾标准溶液（4.6）标定。准确吸取1.00mL3%过氧化氢溶液于50mL三角瓶中，加入5mL水，5mL0.2mol/L的硫酸溶液（4.5），用0.1mol/L的高锰酸钾标准溶液（4.6）标定，所消耗的体积数为16.51mL。备注：由于不同批次的过氧化氢浓度存在差异，因此需要每次滴定前标定，若消耗高锰酸钾标准溶液（4.6）的体积大于或小于16.51mL时，说明过氧化氢的实际浓度大于或小于3%，这种情况就要重新配制过氧化氢溶液重新标定，直到过氧化氢实际浓度等于3%时才能使用。5仪器设备5.1电子天平:感量0.0001g。5.2冰箱（4℃）。5.3酸式滴定管。6操作步骤分别称取5g（精确至0.0001g）土壤（如含量高可适当减少称样量）样品于具塞三角瓶中（用不加土样的作空白对照），加入0.5mL甲苯（4.1），摇匀，于4℃冰箱中放置30min。取出，立刻加入25mL4℃冰箱贮存的3%过氧化氢水溶液（4.7），充分混匀后，再置于4℃冰箱中放置1h。取出，迅速加入25mL贮存于4℃冰箱的0.2mol/L硫酸溶液（4.5），摇匀后过滤。准确吸取1.00mL滤液于50mL三角瓶中，加入5mL水和5mL0.2mol/L硫酸溶液（4.5），用0.1mol/L高锰酸钾标准溶液（4.6）滴定，滴定至紫色褪去出现浅粉色为终点。根据空白和样品的滴定差，求出相当于分解过氧化氢的量所消耗的高锰酸钾标准溶液（4.6）。7结果计算过氧化氢酶活性以1h，1g风干土壤所消耗0.1mol/L高锰酸钾标准溶液的体积数来表示，按式（1）计算：(V0V)T(1)Xfm高锰酸钾滴定度的矫正值，按式（2）计算：c（1/5KMnO4)T(2)0.025式中：过氧化氢酶活性，单位为毫升每克每小时（mL/g·h）；V0空白所消耗的高锰酸钾标准溶液的滴定体积，单位为毫升（mL）；样品所消耗的高锰酸钾标准溶液的滴定体积，单位为毫升（mL）；高锰酸钾滴定度的矫正值；m表示新鲜土壤质量，单位为克（g）；T/NAIAXXXX—2020表示风干土壤占新鲜土壤的比例。结果保留三位有效数字。精密度在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

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