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7残留宿主菌蛋白检验标准操作规范

7残留宿主菌蛋白检验标准操作规范残留宿主菌蛋白检验标准操作规范1、目的：规范残留宿主菌蛋白检验的标准操作。2、适用范围：本法是根据《中国药典》2010版三部附录ⅨE酵母工程菌菌体蛋白质测定法及制定，适用于E2HSA原液的残留宿主菌蛋白的检验。3、设备与材料：3.1、设备：酶标仪、微孔板恒温振荡器。3.2、材料：Cygnus公司毕赤酵母宿主菌蛋白酶联免疫检测试剂盒。4、操作步骤：1)、样品处理：取供试品适量，用蒸馏水稀释成0.5mg/ml左右。2)、取实验板，每孔加入25μl标准品（0ng/ml、1ng/ml、4ng/ml、20ng/ml、75ng...

残留宿主菌蛋白检验标准操作规范1、目的：规范残留宿主菌蛋白检验的标准操作。2、适用范围：本法是根据《中国药典》2010版三部附录ⅨE酵母工程菌菌体蛋白质测定法及制定，适用于E2HSA原液的残留宿主菌蛋白的检验。3、设备与材料：3.1、设备：酶标仪、微孔板恒温振荡器。3.2、材料：Cygnus公司毕赤酵母宿主菌蛋白酶联免疫检测试剂盒。4、操作步骤：1)、样品处理：取供试品适量，用蒸馏水稀释成0.5mg/ml左右。2)、取实验板，每孔加入25μl标准品（0ng/ml、1ng/ml、4ng/ml、20ng/ml、75ng/ml、250ng/ml）和样品。3)、加入100μlHRP-毕赤酵母抗体。4)、保鲜膜密封，放在振荡器上，25℃，180rpm孵育3小时。（如果没有振荡器，则在室温下孵育5小时）。5)、配制洗液：用蒸馏水按1：20的比例稀释母液。6)、洗板：甩去液体，拍干，每孔加入300μl洗液，甩去液体，拍干，重复4次，拍干。7)、显色：每孔加入100μlTMB显色液，避光，25℃，孵育30min，无需震摇。8)、终止：每孔加入100μl终止液。9)、在450/630nm读数，对标准品浓度和吸光度进行四参数回归，根据回归方程计算样品的浓度。5、记录与计算：以标准品溶液吸光度对其相应的浓度做标准曲线，并以供试品溶液吸光度在标准曲线上得到相应菌体蛋白质含量，按以下公式计算：供试品残留菌体蛋白量（%）=c∙n∙100/（T∙106）式中c为供试品溶液中菌体蛋白质含量，ng/mln为供试品稀释倍数T为供试品蛋白质含量，mg/ml6、结果与判定：宿主菌蛋白残留量应不高于蛋白质总量的0.050%。

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