平菇ACCC50596菌株液体菌种培养研究_cropped

平菇ACCC50596菌株液体菌种培养研究_cropped 年 3 月 2004 ( )2004 内蒙古大学学报 自然科学版 M a r. 第 3 5 卷 第 2 期 A c ta Sc ien t ia rum N a tu ra lium U n ive r sita t is N e iM o ngo l V o l. 35 N o. 2 () 文章编号: 1000- 1638 20040220238203 Ξ 平菇 菌株液体菌种培养研究50596 A CCC 李 王秀 赵晓平 ()包头师范学院生命科学系, 内蒙古 包头 014030 摘要: 采用单因子试验统计方法对平菇 A CCC 50596 菌株液体菌种培养的培养基和培养条件 进行了优化筛选, 获得了液体菌种的培养基最佳配方和最佳培养条件. 关键词: 平菇; 单因子试验统计法; 液体菌种; 培养基; 培养条件 中图分类号: Q 939. 9 文献标识码: A 平菇是深受广大消费者喜爱的营养食品, 常吃平菇会提高人体免疫机能. 平菇栽培技术比较粗 放, 周期相对较短, 故为广大栽培者所青睐. 但是制种所用时间较长, 由母种到原种, 再到栽培种, 需要50, 60 时间. 若种菇户条件不太理想, 所需时间更长, 因此影响了平菇的质量和产量以及场地的周 d 转和经济效益. 因此, 近年来, 人们都想采用液体菌种, 以缩短生产栽培周期, 提高产品质量和产量. 平菇 子实体为灰褐色, 产量高, 风味浓郁, 菌肉厚实, 深受人们喜爱. 笔者采用单因 50596, A CCC (子试验统计法, 即固定其他条件逐个选择某个因子的最佳条件, 最后把每个因子的最佳条件选出, 组 ) 合成最优配方或条件. 对平菇 菌株的液体菌种培养和培养条件进行了优化筛选, 选出 50596 A CCC 了适合平菇 液体菌种培养的最优培养基和培养条件.50596 A CCC 1 材料和方法 1. 1 材料 1. 1. 1 菌种 平菇 中国农业菌种中心提供.50596, A CCC ( ) 1. 1. 2 培养基 ?斜面培养基为 培养基; ?碳源试验基础培养基 质量分数% : 蛋白胨 1. 0,PDA ( ) 磷酸二氢钾 0. 1, 磷酸镁 0. 05, 10 ƒ100; ?氮源试验基础培养基 质量分数% : 葡萄糖 20,V B 1 m g mL 磷酸二氢钾 0. 1, 磷酸镁 0. 05, 10 100.ƒV B 1 m g mL 1. 2 方法 2 1. 2. 1 培养方法 500 三角瓶装入 150 培养液, 1. 05 ƒ灭菌 30 . 冷却后在无菌室 mL mL k g cm m in 2 接入 1 大小的试管斜面菌种. 24 ?下静置 24, 48 , 在旋转式摇床上于 24 ?下培养 7 , 摇床的 cm h d 转速为 120 ƒ.rm in 1. 2. 2 测定 用上海雷磁仪器厂生产的 —3型酸度计测定.pH PH SB 1. 2. 3 菌丝干重测定 以 40 目筛网过滤, 收集菌丝体, 清水冲洗 3 次, 65 ?烘至恒重后测定.2 结果与分析 2. 1 液体培养基的优化 2. 1. 1 碳源筛选试验 在碳源试验基础培养基中分别加入 5 种碳源, 试验浓度为 2. 0% , 每种碳源 Ξ 收稿日期: 2002205210 () 基金项目: 国家科技部农业成果转化资金资助项目 国科发农社字〔2001〕567 号 () 作者简介: 李王秀 1946, , 女, 包头人, 教授, 主要搞食用菌栽培研究, 发表过 10 余篇 论文 政研论文下载论文大学下载论文大学下载关于长拳的论文浙大论文封面下载 . 设三个重复, 玉米粉先经 50 目筛网过筛, 试验结果见表 1. 从表 1 中可以看出, 平菇 对玉米粉、蔗糖、可溶性淀粉等都能较好地利用, 考虑到成 50596 A CCC 本合算, 宜以玉米粉为碳素来源. 2. 1. 2 氮源筛选试验 在氮源试验基础培养基中分别加入 6 种常见氮源, 试验浓度为 2. 0% , 每一 种氮源设三个重复, 其中麸皮、豆饼粉要经煮汁过滤除残渣等处理. 试验结果见表 1. 从表 1 种可以看出, 平菇 不能较好的利用无机氮源, 而对有机氮源的利用较好, 其 50596 A CCC 中以对麸皮利用最好. 2. 1. 3 不同玉米粉浓度对菌丝生长的影响 综合考虑碳、氮源的试验结果, 确定以玉米粉和麸皮为 液体培养基的碳、氮源. 将麸皮的浓度固定为 2. 0% , 无机盐及生长因子的浓度如前所述. 玉米粉浓度 设 5 个, 分别为 2. 0% 、4. 0% 、6. 0% 、8. 0% 、10. 0% , 每一浓度设三个重复, 培养结果见表 1. 从表 1 可以看出, 菌丝生长量在一定范围内随玉米粉的浓度增大而提高, 并且以 6. 0% 时生长量 为最高; 进一步提高玉米粉浓度, 菌丝产量反而降低. 所以宜采用 5. 0%, 6. 0% 的浓度. 2. 1. 4 不同麸皮浓度对菌丝生长的影响 试验时玉米粉的浓度定为 6% , 麸皮浓度设 6 个, 分别为0. 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5、3. 0, 每一浓度设三个重复, 其他无机盐及生长因子浓度同前所述. 试验结果见 表 1. 从表 1 可以看出, 麸皮浓度对平菇 菌丝生长量的影响趋势与玉米粉类似. 麸皮的浓 50596 A CCC 度以 2. 0% 为佳. 表 1 不同碳源、氮源、玉米份浓度、麸皮浓度对菌丝产量的影响 1 Table The in f luen ce of d if f eren t Carbon an d N itrogen source s on the output of f un gus hypha 碳源的影响 氮源的影响 玉米粉浓度 麸皮浓度 ()()碳源浓度 2% 菌丝产量 gL 氮源浓度 2% 菌丝产量 gL 浓度 % 菌丝产量 gL 浓度 % 菌丝产量 gL ƒƒƒƒ 葡萄糖 6. 46?0. 03 硫酸铵 2. 23?0. 01 ?0. 04 ?0. 04 2. 0 15. 840. 5 17. 23 果糖 蔗尿素 蛋白胨 4. 0 1. 0 5. 24?0. 041. 02?0. 0118. 24?0. 0318. 74?0. 03 6. 0 1. 5 糖 玉米9. 08?0. 01酵母浸出汁 5. 26?0. 0220. 08?0. 0220. 54?0. 04 8. 0 2. 0 粉 10. 18?0. 02麸皮 9. 17?0. 0117. 62?0. 0322. 16?0. 04 可溶性淀粉豆饼粉10. 0 2. 5 6. 48?0. 0318. 22?0. 0114. 82?0. 0320. 03?0. 02 3. 0 13. 04?0. 0317. 18?0. 04 注: 菌丝产量为平均值?标准差 由上述可见, 平菇 液体菌种培养的适宜培养基组成为: 玉米粉 6.0% , 麸皮 2. 0% , 50596 A CCC 磷酸二氢钾 0. 1% , 硫酸镁 0. 05% , 10 100 .ƒV B 1 m gmL 2. 2 摇瓶培养条件试验 2. 2. 1 培养起始 pH 值对菌丝产量的影响 将上述所定培养基用 0. 1N H C l 和 0. 1N N aO H 调成 5 () 种不同的 分别为 4、5、6、7、8, 接种培养后, 测菌丝干重, 结果见表 2.pH 表 2 不同 值对菌丝产量的影响 pH 由表 2 可知, 在 pH 6, 7 时, 菌丝产量最高, 该 2 Table In f luen ce of pH on the output 值与培养基的自然 值相近.pH pH of f un gus hypha 2. 22 培养温度对菌丝产量的影响 在摇瓶培养过 ()pH 值 菌丝产量 ƒ gL 程中, 在不同温度时, 取样测定菌丝生物量. 发现在 4 15. 37?0. 04 15 ?, 30 ?温度范围内, 随着温度的升高, 菌丝生 5 18. 56?0. 03长速度加快, 生物量最大值出现在 24 ?. 如果温度 6 21. 78?0. 01升高到 35 ?, 则菌丝停止生长. 测定结果如图 1 所 7 22. 34?0. 02 8 17. 41?0. 03 示. 可见其最适培养温度应为 24 ?.2. 2. 3 通气量对菌丝产量的影响 摇床的转速直接影响着通气量的大小, 从而影响着菌丝的产量. 转速大, 通气量亦大, 剪切量增大, 菌丝球的数量增多, 其半径显著减小. 实验发现, 通气量的大小对平 菇 的菌丝产量影响并不明显. 选择 120 ƒ的转速即能很好地满足其生长需要. 转速50596 A CCC rm in 增加至 160 rƒm in 时, 由于剪切作用增强, 使菌丝生长时不再成规则圆球形, 菌丝产量也有所下降. 2. 2. 4 培养时间对菌丝产量的影响 随着培养时间的延长, 菌丝产量迅速增加. 定时取样进行测定.测定结果如图 2 所示. 在摇床培养第 7 菌丝产量达最高值, 再延长时间, 则由于发生自溶作用而使 d 生物量下降. ()())(摇床培养时间 培养温度?? dD u ra t io n o f sh ak ing cu ltu re day sT em p e ra tu re o f cu ltu re 图 1 培养温度对菌丝产量的影响图 2 培养时间对菌丝产量的影响 . 1 . 2 F igInf luence o f cu ltu re tem p e ra tu re F igInf luence o f cu ltu red du ra t io n o n th e o u tp u t o f fungu s h yp h a o n th e o u tp u t o f fungu s h yp h a 3 结论 通过单因子试验统计分析方法, 即固定其他条件逐个选择某个因子的最佳条件, 最后把每个因子 的最佳条件选出, 组合成最优的培养基组成和摇瓶培养条件. 通过试验研究, 得 出 适 宜 平 菇 A C 2 CC 50596 的液体菌种培养基组成为: 玉米粉 5. 0%, 6. 0% , 麸皮 2. 0% , KH 2 PO 4 0. 1% , M gSO 4 ? 710 100. 摇瓶培养最佳条件为: 培养基起始 , 7, 培养温度 24 ?, 转速0. 05% , ƒ6H 2O V B 1 m gmLpH 120 ƒ培养时间为 7 ., rm in d 参考文献: 陈 1 北京: 化学工业出版社, 1988. 131, 139, 152, 154. 声. 食用菌的栽培和发酵 [M . 2 宋锡全, 刘保东, 邱奉同. 新编食用菌栽培学 [M . 赤峰: 内蒙古科学技术出版社, 2001. 296, 297. ()责任编委 杨 持 A S tu dy o n th e C u ltu re o f L iqu id S t ra in 50596o f P lea ro tu s os t rea tu s A CCC 2, L I X iu ZHA O X iao p in g (), , 014030, D ep a rtm en t of B iology B a otou N orm a l U n iv e rs ity B a otou P R C : A bstra c tT h e favo u rab le cu ltu re m ed ium an d cu ltu re co n d it io n s fo r liqu id st ra in o f P leu rotu s os2 250596 t rea tu s A CCC w e re stu d ied b y th e m e tho d o f sin g lefac to r t r ia l sta t ist ic tech n iqu e an d op t im iz2 () . 1in g se lec t io n in labo ra to ry o f life sc ien ce o f B ao to u N o rm a l U n ive r sityT h e re su lt s show ed th a t 5. 0%, 6. 0% , 2. 0% , 0. 1% , th e op t im a l cu ltu re m ed ium co n sisted o f m a ize pow de r b ran KH 2 PO 4 () ?710 ƒ100 ; 20. 05% , M gSO 4 H 2O V B 1 m gmL th e op t im a l cu ltu re co n d it io n s w e re th a t th e sta r t in g tem p e ra tu re o f m ed ium w a s 24? w ith pH 6, 7, tu rn in g ra te o f th e sh ak in g b ed w a s 120 rƒm in , du 2 7 .ra t io n w a s day s : ; 2; ; ; Key word sP leu rotu s os t rea tu ssin g lefac to r t r ia l sta t ist ic tech n iqu eliqu id st ra inm ed iu ncu l2 tu re co n d it io n