[设计]叶绿素含量测定

[设计]叶绿素含量测定[设计]叶绿素含量测定一、叶绿素提取方法(直接浸提法)(植物生理学实验技术，高俊凤主编，北京:高等教育出版社，2006) (1)取烤烟中部幼嫩叶片，去除叶脉后剪成0.2cm左右的细丝或小块混合均匀后，称取0.10~0.20g，放入50mL离心管中; (2)在离心管中加入0.5mL纯丙酮和10~15mL80%的丙酮，并仔细将粘附在瓶壁边缘的叶片碎末洗到丙酮溶液中去，盖上瓶塞，室温下置暗处浸提过夜，其间摇动3~4次; (3)次日取出离心管，观察叶组织已全部变白时，表示叶绿素已浸提干净，然后用80%丙酮定容至25mL...

[ 设计 ]叶绿素含量测定一、叶绿素提取方法(直接浸提法)(植物生理学实验技术，高俊凤主编，北京:高等教育出版社，2006) (1)取烤烟中部幼嫩叶片，去除叶脉后剪成0.2cm左右的细丝或小块混合均匀后，称取0.10~0.20g，放入50mL离心管中; (2)在离心管中加入0.5mL纯丙酮和10~15mL80%的丙酮，并仔细将粘附在瓶壁边缘的叶片碎末洗到丙酮溶液中去，盖上瓶塞，室温下置暗处浸提过夜，其间摇动3~4次; (3)次日取出离心管，观察叶组织已全部变白时，表示叶绿素已浸提干净，然后用80%丙酮定容至25mL刻度，过滤或离心(25?， -13~5min,12000r?min)后，进行比色测定。 (4)比色测定:将叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内，用分光光度计分别在波长645nm、663nm和652nm下测定吸光度，以80%丙酮为空白对照。 -1(5)按下列公式分别计算叶绿素a、b和叶绿素的总浓度(mg?L) C=12.72×A-2.59×A(叶绿素a的浓度) a663645 C=22.88×A-4.67×A(叶绿素b的浓度) b663645 C=C+C=20.29×A+8.05×ATab645663 由于叶绿素a、b在652nm处的吸收峰相交，二者具有相同的比吸收系数(均为34.5)，也可以在此波长下测定一次吸光度(A)而652求出叶绿素含量: A，1000652C,T34.5 -1(6)求得色素浓度后再按下式计算组织中各色素含量(用mg?g鲜重或干重表示) C，V-1T叶绿体色素含量(mg,g FW),，nFW，1000 式中，C:叶绿体色素的浓度(mg?L-1);FW:鲜重(g);V:提取液T总体积(mL);n:稀释倍数(在此处为1)。二、丙酮乙醇混合液法(植物生理学实验技术，郝建军主编，辽宁科学技术出版社，2001年再版) 1、将丙酮、无水乙醇按1:1体积混合成浸提液 2、称取0.1g，剪成细丝置于盛混合液的试管中，加塞置于暗处，于室温(10~30?)条件下浸提，每个一定时间观察浸提情况，以材料完全变白为准。用混合浸提液作空白调零，测定663nm、645nm和652nm处测光密度(一般隔夜测定)。注意事项 (1) 为了避免叶绿素光解，操作时应在弱光下进行，研磨时间应尽量短些，以不超过两分钟为宜。 (2) 叶绿体色素提取液不能浑浊。可在710nm或750nm下测量吸光度，其值应小于当波长为叶绿素a吸收峰时消光度值的5%，否则应重新过滤。 (3)用分光光度计法测定叶绿素含量，对分光光度计的波长精确度要求较高。如果波长与原吸收峰波长相差1nm,则叶绿素a的测定误差为2%，叶绿素b为19%，使用前必须对分光光度计的波长进行校正。校正方法除按仪器说明书外，还应以纯的叶绿素a和叶绿素来来校正。因为即使使用国产仪器中性能较好的7200型分光光度计，经校正后再600~700nm波段中的读数误差还可能有?2nm，这对测定叶绿素a:b值已有影响。叶绿素含量测定记载表色素浓度色素含量吸光度 -1-1 mg?g mg?L处理时间(h) 重复 FW(g) V(mL) T'''A A A C C C C C C 645652663abTabT 1 2 CK 0 3 平均值 1 2 24 3 平均值 1 2 CK+Cd 48 3 平均值 1 2 96 3 平均值 1 2 +P 0 3 平均值 1 2 24 3 平均值 1 2 +P+Cd 48 3 平均值 1 2 96 3 平均值

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