生物医学类国家自然科学基金面上项目——生物医学2

项目类别 申报学科代码1 科学部编号 A C03030301 国家自然科学基金 申 请 书 关于书的成语关于读书的排比句社区图书漂流公约怎么写关于读书的小报汉书pdf 项目名称：Toll受体基因单核苷酸多态性与感染性ARDS易感性相关 申 请 者：缪长虹 所在单位：复旦大学  邮政编码：200032 通讯地址：上海市医学院路138号 电 话：021-64041990-2331 传 真：021-64037324 申请日期：2002年1月6日 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 二00二年制 填 报 说 明 一、填写申请书前，请先查阅国家自然科学基金有关项目申请办法及规定。申请书各项内容，要实事求是，逐条认真填写。表达要明确、严谨，字迹要清晰易辨。外来语要同时用原文和中文表达。第一次出现的缩写词，须注出全称。 二、申请书为十六开本，复印时用B5复印纸，于左侧装订成册。第三页起各栏空格不够时，请自行加页。一式六份（至少一份为原件），由所在单位审查签署意见后，按申报学科投送国家自然科学基金委员会对口科学部。地区科学基金项目，申请书另报送省（自治区）科委一份原件。 三、封面右上角“科学部编号”由对口科学部填写，项目类别和申报学科代码1由申请者填写。 四、下列人员不得作为申请项目的负责人提出申请，但可作为项目组成员参加研究： —在读（含在职）研究生 —已离退休的科研人员 —申请单位的兼职科研人员 五、申请者和项目组中具有高级专业技术职务的主要成员申请（含参加）的项目数，连同在研的国家自然科学基金项目数（不含重点项目、重大项目），不得超过两项。 六、同一项目组研究内容相近的项目，只允许报送一个学科。 七、申请者可因同类项目竞争等原因，提出不宜评议本项目的专家名单（姓名与单位，3人以内），密封于信封中，钉在申请书原件封面，或另专函相关学科，供科学部选择同行评议人时参考。科学部将对此信息保密。 八、国家自然科学基金委员会通讯地址：北京市海淀区花园北路35号东门 邮政编码：100083 一、简表 研 究 项 目 名 称 中文 Toll 样 受 体 单 核 苷 酸 多 态 性 与 感 染 性 ARDS 易 感 性 的 相 关 性 英文 Relationship between single nucleotide polymorphism of TLR and the incidence of ARDS 类别 A.自由申请 B.高技术探索 C.青年 D.地区 高技术探索 项目主题号 E.重大 F.重点 H.专项 A 申报学科 名称1 麻醉学 名称2 A. 基础研究 B. 应用基础 代码1 C03030301 代码2 B 申请金额 2 2 . 0 0 万元 起止年月 2003年1 月至 2005年 12 月 所用实验室 A. 国家重点 B. 部门开放 实验室编号 23618703 B 申 请 者 姓 名 中文 缪 长 虹 性 别 A. 男 出生年月 1966年1月17日 民 族 名称 汉 拼音 Miao chang hong B. 女 A 身份证号 320302640117327 代码 01 专业技术职务 名称 副教授 学位 A. 博士 B. 硕士 C. 学士 A 博士学位授予国别或 地 区 国(地区)名 中国 A. 院士 B. 博士生导师 C. 博士后 代码 012 代 码 156 所在单位 名 称 复旦大学附属中山医院 系（所） 麻醉科 单位代码 20043301 性 质 A. 高等院校 B. 科研机构 C. 其它 邮政编码 200032 隶属 关系 名称 教育部 A 申请者电话 021-64041900 代码 360 所在地 省 (自治区、直辖市) 上海市(县)徐汇区 医学院 (路) 168号 项 目 组 总人数 高级 中级 初级 博士后 博士生 硕士生 参加单位数 7 1 2 1 3 2 姓名 身份证号 专业技术职务 所在单位名称及代码 项目中 的分工 签字 朱彪 360102691211583 博士生 复旦大学附属中山医院20043301 分子生物实验和分析 主要成员(不含申请者) 李昌麟 140103196902142405 博士生 中国科学院上海细胞所20003108 分子生物实验和分析 赵靖 140103196402242436 博士后 中国科学院上海细胞所20003108 SNP位点的筛选 白浪 310104690331281 主治医师 复旦大学附属华山医院20043301 标本收集 丁明 310110730208541 主管技师 复旦大学附属中山医院20043301 RELP分析 朱光发 340302630824021 博士生 复旦大学附属儿科医院20043301 标本收集 －1－ 研究内容和意义 摘要 采 用 聚 合 酶 链 反 应 PCR 结 合 RsaI、MaeIII、Mnl 限 制 性 内 切 酶 及 酶 解 产 物 的 RELP 基 因 分 析 技 术 对 TLR4 和 TLR2 基 因 启 动 子 的 单 核 苷 酸 已 知 位 点 的 多 态 性 及 变 性 高 效 液 相 色 谱 （DHPLC） 和 基 因 测 序 结 合 筛 选 位 点 多 态 性 与 感 染 性 ARDS 易 感 性 相 关 性 分 析 ， 为 ARDS 的 遗 传 性 诊 断- 提 供 理 论 依 据 ， 为 根 本 解 决 这 一 世 界 医 学 难 题 提 供 新 的 思 路 和 方 法 。 主题词 1. 主题词数量不多于三个；2. 主题词之间空一格（英文用/分隔）。 中文 单 核 苷 酸 多 态 性 感 染 性 呼 吸 窘 迫 综 合 征 英文 single nucleotide polymorohism/ septic / Acute respiratory distress sydrome 简 表 填 写 要 求 一、简表内容将输入计算机，必须逐项认真填写，采用国家公布的标准简化汉字。简表中所有代码以最新发布的《国家自然科学基金申请项目分类目录及代码》为准填写。高技术探索课题主题号按《高技术新概念新构思探索课题项目指南》中主题号填写，申请其重点项目时项目类别也填写B，并在申请书封面右上角加注“高技术探索课题重点项目”。 二、凡选择性栏目，将相应提示符A、B等之一填入该栏的右下角。 三、部分栏目填写要求： 项目名称——应确切反映研究内容和范围，最多不超过25个汉字 (包括标点符号）。 基础研究——指以认识自然现象、探索自然规律为目的，不直接考虑应用目标的研究活动。 应用基础研究——指有广泛应用前景，但以获取新原理、新技术、新方法为主要目的的研究。 申报学科——申请项目所属的最基础学科。如涉及多学科可填写两个，先填为主学科。 申请金额——以万元为单位，用阿拉伯数字表示，注意小数点。 起止年月——起始时间从申请的次年1月算起。终止时间为完成年度的 12月。 所用实验室——系指研究项目将利用的实验室，仅填写国家计委批准的国家重点实验室或部门批准的开放实验室。 所在单位名称及代码——按单位公章填写全称。例如“中国科学院西安光学精密机械研究所”不得填“中科院西安光机所”或“西安光机所”。全称中的数字，一律写中文，例如：中国航天工业总公司第七○一所。首次申请国家自然科学基金的单位，尚未编入单位代码，其代码暂不填写。 参加单位数——指研究项目组主要成员所在单位数，包括主持单位和合作单位(合作者所在单位)，以阿拉伯数字表示。 项目组主要成员——指在项目组内对学术思想、技术路线的制订与理论分析及对项目的完成起重要作用的人员，本人应在申请书上亲自签名。本栏双线右侧内容不输入计算机。 研究内容和意义——摘要与主题词均录入软盘。 －2－ 二、立论依据 （包括项目的研究意义、国内外研究现状分析，并附主要参考文献及出处） 对基础研究，着重结合国际科学发展趋势，论述项目的科学意义； 对应用基础研究，着重结合学科前沿、围绕国民经济和社会发展中的重要科技问题，论述其应用情景。 一、研究意义 急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome, ARDS)，是多种原因引起的急性呼吸衰竭，临床上以呼吸窘迫，顽固性低氧血症和非心源性肺水肿为特征，病死率高达50%以上，其中尤以感染性ARDS死亡率最高,按94年美欧联席会议ARDS诊断标准，在欧美国家其发病率为1.5～2.5/10万/年，按此标准我国以十亿人口计算，每年有1.5～2.5万人发病，其造成的经济损失及死亡人数远超过不可抗拒灾难所致损失。目前国内外对其现有的治疗手段如各种通气方式包括允许性高碳酸血症通气和液体通气、一氧化氮吸入治疗，药物免疫治疗如抗内毒素单抗，IL-1受体拮抗剂(IL-1ra)，TNFα及其受体拮抗剂应用，持续动静脉血滤，体外膜肺氧合，肺泡表面活性物质，肺血管扩张剂PGE2等(1，2,3,)，尽管能够改善临床表现和症状，但都不能根本逆转其已存在的结构改变，其病死率仍高达50%～70％。 如何在临床上建立一种或几种敏感的、可信的预测指标，对具高危ARDS发生倾向患者进行前瞻性早期预测，尽早减轻和除去导致ARDS的原发病或诱因，阻遏ARDS病理进程，降低死亡率，当是ARDS治疗的首要措施，可能是解决这一世界难题的关键，将对我国国民经济和人民健康起到十分积极的影响。 二、国内外研究现状 国内外许多细胞因子基因多态性与脓毒症的相关性研究表明：肿瘤坏死因子(TNF)基因多态性TNF NCOI等位基因TNFB2是脓毒症患者TNF-α高水平表达和不良预后的基因标志(4)；IL-1受体拮抗剂IL-1ra VNTR基因的多态性和脓毒症脏器功能损害易感性密切相关，等位基因IL-1raA2是脓毒症脏器功能损害的高危遗传标志(5)；IL-10基因启动子区域中IL-10-1082基因多态性与脓毒症的易感性密切相关，IL-10-1082等位基因1是脓毒症发生的高危遗传标志。细胞因子基因多态性可能影响细胞因子产生水平和细胞因子反应强度，在某些免疫炎症性疾病的病理过程中起着一定的作用，细胞因子基因型将有可能为免疫炎症性疾病的遗传学诊断、免疫防治提供理论依据，尽管许多学者探讨了肿瘤坏死因子(TNF)、IL-1受体拮抗剂、IL-10的预警价值，试图发现其与脓毒症病程的关系，但各种细胞因子在炎症反应网络调节中的始动因素作用并不明确，因此结果大多并不理想，亦决定了上述各种细胞因子等位基因多态性在全身性感染易感性预测方面的局限性。 内毒素作用于机体炎症细胞，可导致多种炎症细胞激活和一系列炎症介质的释放，释放的炎症介质或细胞因子再激活炎症细胞，使机体的损伤信号进一步放大和加强。这种炎症反应是全身性的，称为全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrame, SIRS)。感染性ARDS是全身性感染的最后阶段的器官损伤的一种表现，但并不是同一病理生理过程，因此肿瘤坏死因子(TNF)、IL-1受体拮抗剂、IL-10细胞因子等位基因多态性在感染性ARDS易感性预测方面的更加明显的局限性。 Toll样受体(TLRs)是一个较大的天然免疫识别受体家族，这些受体识别微生物病原体相关的分子谱型(PAMP, Pathogen-Associated Molecular Patterns)，并且诱导免疫反应。宿主对病原体的反应依赖免疫系统，在哺乳动物，免疫系统有天然免疫(巨噬细胞、嗜中性细胞和补体等)和适应性免疫(由抗原T、B淋巴细胞介导)所组成。单核/巨噬细胞不仅是天然免疫的重要效应细胞，也是天然免疫和适应性免疫的桥梁，其最重要的功能之一是特异识别入侵机体的各种微生物。TLR是单核/巨噬细胞特异识别各种微生物的重要受体分子， －3－ 例如，LPS低反应小鼠(C3H/HeJ和C57BL10/ScCr)是因为TLR4基因的缺陷, 提示了TLR4在介导LPS信号中的重要作用。研究进一步证明，单核/巨噬细胞对LPS的识别不仅需要CD14分子，还需要TLR4和MD-2(分泌的20-30kDa多聚糖蛋白)受体复合物的存在才能有效传递来自LPS的信号。Dziarski等指出，MD-2能够增强TLR2对LPS和革兰氏阴性、阳性细菌的反应。因此TLR4和TLR2对全身炎症反应的启动阶段的识别作用，使得TLR4和TLR2很可能成为基因多态性在感染性ARDS易感性预测方面的热点，某些已知位点已经被用来研究脓毒症的相互关系，结果有矛盾（6、7、8），与ARDS的关系和新位点的筛选及与ARDS的关系尚未见报道。 参考文献 1． Lozano JA, Castro JA, Rodrigo I. Partial liquid ventilation with perfluorocarbons for treatment of ARDS in burns. Burns 2001 Sep;27(6):635-42 2． Yoshinari D, Takeyoshi I, Koibuchi Y, Matsumoto K, Kawashima Y, Koyama T, Ohwada S, Morishita Y. Effects of a dual inhibitor of tumor necrosis factor-alpha and interleukin-1 on lipopolysaccharide-induced lung injury in rats: involvement of the p38 mitogen-activated protein kinase pathway. Crit Care Med 2001 Mar;29(3):628-34 3． Evans DA, Wilmott RW, Whitsett JA Surfactant replacement therapy for adult respiratory distress syndrome in children. Pediatr Pulmonol 1996 May; 21(5):328-36 4． Stuber F,Petersen M,Bokelmann F,et al. A genomic polymorphism within the tumor necrosis factor locus influences plasma tumor necrosis factor-alpha concentrations and outcome of patients with severe sepsis.Crit Care Med,1996,24:381-384. 5． Fang X M,Schroder S,Hoeft A,et al. Comparison of two polymorphisms of the interleukin-1 gene family:interleukin-1 receptor antagonist polymorphism contributes to susceptibility to severe sepsis. Crit Care Med,1999,27(7):1330-1334 6． Read RC, Pullin J, Gregory S, Borrow R, Kaczmarski EB, di Giovine FS, Dower SK, Cannings C, Wilson AG.A functional polymorphism of toll-like receptor 4 is not associated with likelihood or severity of meningococcal disease. J Infect Dis 2001 Sep 1;184(5):640-2 7． Phylogenetic variation and polymorphism at the toll-like receptor 4 locus (TLR4). Smirnova I, Poltorak A, Chan EK, McBride C, Beutler B. Genome Biol 2000;1(1):RESEARCH002 8． Lorenz E, Mira JP, Cornish KL, Arbour NC, Schwartz DA.A novel polymorphism in the toll-like receptor 2 gene and its potential association with staphylococcal infection. Infect Immun 2000 Nov;68(11):6398-401 三、研究方案 1. 研究目标、研究内容和拟解决的关键问题 研究目标： 1． 从基因水平检测TLR2、TLR4、MD2基因启动子区域已知单核苷酸多态性位点。 2． 筛选出TLR2、TLR4、MD2基因启动子区域未知单核苷酸多态性位点。 3． 确立适合临床应用的感染性呼吸窘迫综合征的易感性指标。 研究内容： 1． DNA标本：采用盐析法从病例组和对照组个体的外周血单核细胞中提取基因组DNA。 2． 引物：自行设计寡核苷酸序列和合成。 3． 聚合酶链反应(PCR)。 4． 限制性内切酶酶解：RnsaI、MaeIII或MnlI限制性内切酶酶切。 5． 酶解产物的基因型分析：琼脂糖凝胶电泳及0.1%溴化乙锭染色方法，已知基因多态位点采用限制性片段长度多态性（RFLP）观察分析编码TLR4的基因启动子Cys98 --> Gly; Pro436 --> Leu和的TLR2基因启动子1619,1359,1145,809,159 的基因型多态性。 6． 未知的TLR2、TLR4、MD2基因调控区和编码区新单核苷酸多态(SNP)位点的筛选与确定方法：PCR (变性梯度凝胶电泳（DGGE）或变性高压液相（DHPLC）筛选SNP位点(DNA测序确定SNP位点。 7． 统计分析： 等位基因和基因型的频率、Hardy-Weinberg吻合度检验、Logistic回归分析 拟解决的关键问题 1． 确定ARDS易感性与TLR2、TLR4、MD2基因启动子的单核苷酸多态性已知位点的相关性。 2． 筛选出ARDS易感性与TLR2、TLR4、MD2基因启动子的单核苷酸多态性新位点。 3． 自行设计寡核苷酸序列进行PCR的扩增。 －4－ 2. 拟采取的研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析 （1） 研究方法 1． 外科手术后ARDS患者均来自中山医院和华山医院加强医疗病房（ICU）。 2． 相互间无血缘关系、来自血库不同时期的献血员为正常对照组。 3． DNA标本：外周血单核细胞中提取基因组DNA。 4． 引物：自行设计寡核苷酸序列和合成。 5． 聚合酶链反应(PCR) 6． 限制性内切酶酶解 7． 酶解产物的基因型分析 (二) 技术路线 （三）可行性分析： 1、复旦大学附属中山医院有外科ICU，可提供充足的符合诊断标准的ARDS病人。 2、复旦大学医学院遗传学教研室对全自动DNA测序仪对单核苷酸多态性的位点筛选已经有丰富的经验。 3、中山医院院中心实验室拥有分子生物实验技术、RELP、DEEG和DHPLC分析技术及先进的实验设备。 4、本科作为上海市领先学科所拥有开拓的学科带头人及雄厚的学术梯队以及与中国科学院细胞所长期的合作关系是该课题完成的重要保证。 （四）本项目的创新之处 首次通过与临床感染性ARDS病人和对照组病人TLR2、TLR4、MD2基因启动子的已知单核苷酸位点多态性和筛选出单核苷酸新位点多态性与感染性ARDS易感性相关性分析，探索及寻找对感染性ARDS易感性遗传学诊断和免疫防治敏感性的指标，以此为突破口，早期采取对策阻遏ARDS病程，以提高ARDS 救治率，属国内外首次报道。 －5－ 4. 年度研究计划及预测进展 整个研究工作三年内完成 （1）2003.1~2003.12：完成感染性ARDS病人的全部标本的收集，完成临床易感性预测指导意义的单核苷酸位点基因型分布的分析。 （2）2004.1~2004.12: 完成感染性ARDS病人的部分标本的收集，筛选出有临床易感性预测指导意义的单核苷酸位点。 (3) 2005.1--2005.6：完成临床易感性预测指导意义的单核苷酸多态性位点的基因测序。 （4）2005.7~2005.12: 实验结果统计处理，整理结果，成果以论文的形式提供，在国内外有影响的杂志上发表。 预期成果： （1） 确定临床感染性ARDS 病人TLR2、TLR4、MD2基因启动子的单核苷酸已知位点多态性分析的相关性。 （2） 通过对临床感染性ARDS 病人和对照组病人TLR2、TLR4、MD2基因启动子的未知SNP多态性位点分析，筛选出有临床意义的基因位点。 （3） TLR2、TLR4、MD2基因基因型将有可能为免疫炎症性疾病的遗传学诊断、免疫防治提供理论依据，因此成为临床上进行感染性ARDS易感性和预后的预测敏感的、可信的指标，对具高危ARDS发生倾向患者进行前瞻性早期预测，尽早减轻和除去导致ARDS的原发病或诱因，阻遏ARDS病理进程，降低死亡率，可能是解决这一世界难题的关键，将对我国国民经济和人民健康起到十分积极的影响。 －6－ 四、研究基础 1. 与本项目有关的研究工作积累和已取得的研究工作成绩 工作基础： （1） 已成功进行RT-PCR检测肺组织中IL-6,IL-8,TNF( mRNA 表达水平 （2） 成功检测外周血中IL-6,IL-8,TNF(的基因启动子单核苷酸基因多态性的研究。 （3） 完成博士点基金课题：“成人呼吸窘迫综合征治疗的探讨”工作。 （4） 承担“曙光计划”项目课题30%的工作：吸入一氧化氮及滴入表面活性物质治疗急性肺损伤和呼吸窘迫综合征的研究，项目编号：95SG10 （5） 作为项目组主要成员，研究课题“吸入NO 治疗实验性急性呼吸窘迫综合征”通过上海市教委科技成果鉴定(1999第1704号)获国内领先，国际先进结果。 2. 已具备的实验条件，尚缺少的实验条件和拟解决的途径（包括利用国家重点实验室和部门开放实验室的计划与落实情况） （1） 院中心实验室已具备进行全套分子生物实验的设备技术：高速离心机，低温冰箱，液氮罐，电泳仪，PCR仪，HPLC。 （2） 可以自行设计和合成引物，购买各种实验用的试剂。 （3） 能够进行单核苷酸位点多态性的基因型筛选和分析。 （4） 复旦大学遗传学教研室拥有一流的全自动DNA测序仪。 －7－ 3. 申请者和项目组主要成员的学历和研究工作 简历 个人简历下载免费下载简历模版总经理简历下载资料员简历下载资料员简历下载 ，近期已发表与本项目有关的主要论著目录*和获得学术奖励情况及在本项目中承担的任务；青年科学基金申请者还应注明学位论文名称及导师姓名与工作单位 缪长虹 男 1966年1月17号生，现任上海中山医院麻醉科副教授 ，1998年7月获复旦大学医学院麻醉学博士学位， 硕士期间申请并完成江苏省教委自然科学基金课题“低氧性肺血管收缩的研究”，博士期间完成博士点基金课题“吸入一氧化氮对内毒素性ARDS的影响”，通过上海市成果鉴定(沪教科鉴字1999第17004号)，获国内领先，国际先进鉴定结果，发表论文多篇，参加《现代麻醉学》， 《现代疼痛学》及卫生部面向二十一世纪全国高等医学院校教材《危重病医学》等的编写。本课题中负责课题设计，组织和实施。 (1) 缪长虹，吸入一氧化氮对犬感染性ARDS时表面活性物质及肺形态学的影响 中华麻醉学杂志,2001,12:730-2 (2) Chang-Hong Miao,Bo Sun,Hao Jiang. Pharmacodynamic and Pharmcokintics of inhaled nitric oxide in dogs with septic acute respiratory distress syndrome, Acta Pharmcologica Sinica2002,22(1):34-6 (3) 缪长虹，吸入一氧化氮对犬感染性ARDS的影响 中华麻醉学杂志2002（1）：53-5 (4) Chang-hong Miao,Bo Sun. Inhaled nitric oxide improves pulmonary homodynamic and suppress proinflammatory cytokine expression in dog model of septic acute respiratory distress syndrome (Submitted) (5) Chang-hong Miao,Bo Sun. Inhaled nitric oxide improves ventilation efficiency and hemodynamic properties in dog with endotoxin induced acute respiratory distress syndrome, Proceeding of American pediatric Academy Annual Meeting, Pediatr Res 1997;41:A204. (6) 白浪 等，前列腺素E在酸吸入性急性肺损伤中的治疗作用，中华麻醉学杂志. 2001，1，35。 (7) Zhu GF ,Bo Sun et al: Combined surfactant therapy and inhaled nitric oxide in rabbits with oleic acid induced acute respiratory distress syndrome. Am J Respir Crit Care Med 1998:158;437~443. (8) 白浪等，大血管手术后的急性肺损伤，中华麻醉学杂志. 1999，（2）：75。 朱彪，男，29岁，复旦大学医学院博士研究生，在本实验中从事分子生物实验、限制性内切酶酶解、酶解产物RELP分析。 丁明，男，29岁，复旦大学附属中山医院内科实验室，在本实验中从事分子生物实验、限制性内切酶酶解、酶解产物RELP分析。 白浪，男，32岁，博士，从事肺损伤的基础与临床研究，在 SICU 工作，在本实验中，协助标本收集。 朱光发，男，38岁，副教授，在肺科监护病房工作，从事感染性肺损伤的研究，在本实验中协助标本收集。 赵靖，男，37岁，博士后，长期从事分子生物及免疫组化工作，在本实验中应用DEEG或DHPLC技术进行新SNP位点的筛选分析和基因测序工作。 * 论文：作者·题目·刊名·年份·卷（期）·页码 专著：作者·书名·出版者·年份 －8－ 五、经费预算 支 出 科 目 金 额 （万元） 计 算 根 据 及 理 由 1. 合 计 22.0 （1）实验材料费 15.0 标本材料 2.0 临床标本收集测定所需费用 试剂 6.0 分子生物学试验部分需用进口试剂 （2）仪器设备费 7.0 PCR仪、基因型分析仪、全自动DNA测序仪等测定 2.0 HPLC仪器设备的使用、保养费用 移液器、EP管等各种试验耗材 （3）协作费 2.0 支付试验有关协作费用 （4）项目组织费 2.0 科研管理费10% （5）科研业务费 1.0 试验资料整理、处理、统计学分析；论文发表费及 学术交流 注: 预算支出科目按下列顺序填写: 1. 科研业务费 2. 实验材料费 3. 仪器设备费 4. 实验室改装费 5. 协作费 6. 项目组织实施费。开支范围详见《国家自然科学基金资助项目财务 管理办法 关于高温津贴发放的管理办法稽核管理办法下载并购贷款管理办法下载商业信用卡管理办法下载处方管理办法word下载 》第二章。 －9－ 六、申请者正在承担的其它研究项目 （攀登计划、863计划、攻关任务和各部委、省市任务等项目的名称及编号、任务来源、起止年月、负责或参加以及与本申请项目的关系等情况） 七、申请者承担（负责或参加）国家自然科学基金资助项目的情况 批准号 项目名称 起止年月 负责或参加 进展或完成情况 无 －10－ 对申请者负责的前一个已结题科学基金资助项目（项目名称及批准号）完成情况，后继研究进展及与本申请项目的关系加以详细说明。另附该已结题项目《研究 工作总结 关于社区教育工作总结关于年中工作总结关于校园安全工作总结关于校园安全工作总结关于意识形态工作总结 摘要》（300字）及已发表主要相关论文首页复印件（限三篇）。 无 八、申请者承诺 我保证上述填报内容的真实性。如果获得资助，我与本项目组成员将严格遵守国家自然科学基金委员会的有关规定，切实保证研究工作时间，按计划认真开展研究工作，按时报送有关材料。 申请者（签章） 年 月 日 －11－ 九、推荐意见 既不具有高级专业技术职务又不具有博士学位的申请者，须有两名具有高级专业技术职务的同行专家推荐。推荐时，请认真负责地介绍申请者及其项目组成员的业务基础、研究能力、科研态度及研究条件等。项目组成员不能做推荐者。 具有高级专业技术职务的在职博士生申请须由导师在此栏目签署意见。 推荐者（签章） 专业技术职务 专长 所在单位： 推荐者（签章） 专业技术职务 专长 所在单位： －12－ 十、申请者所在单位及合作单位的审查与保证 1. 申请者所在单位学术委员会的审查意见（包括：对项目的意义、特色和创新之处及申请者的研究水平与学风签署具体意见） 脓毒症所致ARDS和MODS是临床上面临的世界难题，其本质系内毒素的跨膜信号转导致最终核转录因子的活化及多种细胞因子基因表达。找出脓毒症的易感性，不仅具有有较大的临床应用价值和社会经济效益，也是申请者的立意所在，有实用性。对内毒素信号转导跨膜阶段的重要受体——TLR2、TLR4和MD-2分子的基因单核苷酸多态性研究，，探讨其基因单核苷酸多态性和突变是否是脓毒症的易感指标和高遗传标志，为将来预防脓毒症这一类疾病开辟新的治疗策略提供理论依据，是本课题的创新之处。申请者的技术线路明晰，大部分已较成熟，有相当的工作基础。但SNP位点的筛选工作量大，是本课题的关健所在。申请者与合作者已对相关课题进行多年研究，并近期在国内外杂志上发表多篇论著，有着熟练的分子生物学实验技巧及良好的临床实践经验，治学严谨求实。 主任或副主任（签章） 年 月 日 －13－ 2. 合作单位的审查意见与保证 同意参加合作研究，保证对参加合作研究人员时间及工作条件的支持、督促其按计划完成所承担的任务（及需要说明的其它问题） 合作单位1（公章） 合作单位2（公章） 合作单位3（公章） 3. 申请者所在单位领导的审查意见与保证 已按填报说明对申请人进行了资格审查，对申请书内容进行了审核，同意学术委员会的审查意见，并保证在项目获得资助后做到以下几点： (1) 保证对研究计划实施所需的人力、物力和工作时间等条件给予支持。 (2) 严格遵守科学基金委员会有关资助项目管理、财务等各项规定。 (3) 督促项目负责人和本单位项目管理部门按科学基金委员会的规定及时报送有关报表和材料。 需要说明的其它问题： 单位负责人 （签章） 单位（公章） 年 月 日 －14－ ARDS病人和对照组各200例 外周血DNA抽提 PCR 限制性内切酶酶解 酶解产物的RELP分析 DGGE或DHPLC技术检测基因突变 基因测序确定SNP新位点及类型