动物生殖调控（第八章）

null动物生殖调控动物生殖调控李 键 Tel:85522227(O);13980626307(M) Email:lijian@swun.cn;lijiangrcy@yahoo.com.cn 西南民族大学 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 历史回顾 早在1780年，意大利学者Spallanzani首次用犬进行人工授精(artificial insemination， AI)试验取得成功。1899年，俄国学者伊万诺夫开始进行马和牛的Al工作，他将原来的犬用假阴道改进成为现今使用的马、牛、羊用假阴道，并研究精液处理方法，逐步形成了一套较为完善的操作程序，AI技术才从试验阶段进入实际应用阶段。现在世界各国，特别是西欧、北美、前苏联、日本等国将Al应用于畜牧业生产已十分普遍，其中在奶牛的繁殖方面应用最为广泛、技术水平发展最快。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 人工授精及冷冻精液的应用价值 提高优秀种公畜的利用率 使用种公畜进行AI可以超过自然交配的与配母畜许多倍甚至数百倍，特别是冷冻精液的长期保存和推广应用，可以使精液的利用率大大提高。一头种公牛一年生产的冷冻精液可以配种2万～5万头母牛。第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 人工授精及冷冻精液的应用价值 加速品种改良 由于AI技术、特别是冷冻精液的应用，极大地提高了种公畜的配种能力，因而就能选择最优秀的种公畜用于配种，使良种遗传基因的影响显著扩大，大幅度地提高后代的生产性能，加速品种改良速度。此外还有利于保证配种计划的实施，促进育种工作进程。据美国奶牛业以本交、液态精液AI和冷冻精液AI三种配种方式应用60年的资料统计，牛群平均产奶量有了大幅度的提高(表8-1)。第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 人工授精及冷冻精液的应用价值 加速品种改良 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 人工授精及冷冻精液的应用价值 加速品种改良 由于应用了冷冻精液，不仅提高了群体母牛的产奶量，而且还涌现出一些高产个体母牛。美国1974年一头黑白花奶牛365天产奶量为23 045kg，接着又有一头母牛年产奶25 270ke，创造了个体产奶量的世界 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 。我国自20世纪70年代以来：大力推行冷冻精液，在一个泌乳期内产奶1万千克的奶牛数也在显著增加。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 人工授精及冷冻精液的应用价值 使用冷冻精液不受时间、地域限制 目前，牛的冷冻精液最长的保存期已近40年，随着动物精液冷冻技术的不断改进，已相继在各地建立起动物原种精液库，收集、贮藏具有种用价值和濒临绝种的动物冷冻精液，因而成为一种理想的保种手段。在今后的育种工作中，一旦需要某一品种的某些遗传性状时，就可以在短时间内得到利用和恢复，因此在遗传学上具有重大的科学价值。由于冷冻精液可以长期保存，能够不受距离限制地运送到任何地方、区域。目前有许多国家已经建立起经营冢畜冷冻精液进出口贸易的机构。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 人工授精及冷冻精液的应用价值 大幅度减少种公畜数、节省开支 采用AI和冷冻精液后，由于大大提高了种公畜的利用率，只需保留极少数的优秀个体，便可将原有的90％～95％的种公畜淘汰掉，从而节省大量的饲料、饲草及管理费用。第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 人工授精及冷冻精液的应用价值 克服公、母畜体型悬殊的种间交配困难 良种公畜绝大多数体格硕大，若与本地小体型母畜交配十分困难。400～500kg的良种公猪与50～80kg的本地母猪交配，因体型悬殊差异而使交配不可能完成。1 000kg以上的良种奶用公牛和肉用公牛与本地黄牛配种也是十分困难的，而采用AI技术则可以得到解决。又如马和驴、牦牛和黄牛、银狐和蓝狐之间的种间交配，通过AI技术则能顺利完成。第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 人工授精及冷冻精液的应用价值 防止疾病传播 AI避免了公、母畜直接接触，并要求按照严格的技术操作规程，因而可以防止疾病，特别是某些因交配而感染的传染病的传播，如传染性流产、子宫炎、颗粒性阴道炎、滴虫病、马媾疫等。 有利于提高母畜的受胎率 AI所使用的精液都经过品质检查，保证质量要求，对母畜经过发情鉴定，可以掌握适宜的配种时机，同时又可建立完整的配种记录，及时发现和治疗不孕母畜，因此有利于提高母畜的受胎率，减少空怀不孕率。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 人工授精技术 AI是借助于器械或徒手操作，以人工的方法采集雄性动物的精液，经过精液晶质检查、稀释、保存和运输等一系列处理后，再送人到发情雌性动物的生殖道内以达到受胎的目的。这种代替自然交配的技术，称为AI技术。它是由采精技术、精液处理技术和输精技术三部分组成。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 人工授精技术 采精 采精是AI技术操作的第一个环节。采精的方法有多种，如：假阴道法、按摩法、手握法和电刺激法等。根据动物种类不同和环境条件而选择适宜的采精方法。应用最广泛的是假阴道采精法，因为这种方法可以收集到全部射出的精液，不降低精液晶质，不会有害于雄性动物的生殖器官和性机能，采精器械简单，使用装卸方便。第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 采精方法 假阴道采精法 假阴道的构造及准备：假阴道是模拟雌性阴道条件而仿制的人工阴道。各种动物的假阴道构造基本相似，主要由外壳、内胎、集精杯及其附件所组成。外壳可用硬质塑料或镀锌铁皮制成圆筒状。内胎为弹力强、无毒、柔软的乳胶或橡胶管作为假阴道的内腔。集精杯用于收集精液，一般用棕色玻璃制成，也可用有刻度的试管或玻璃保温杯代用，集精杯安装在假阴道的后端，有的以乳胶漏斗相连接。为了防止精液受污染，有的假阴道在人口处覆盖一漏斗状的泡沫塑料软垫。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 采精方法 假阴道采精法 假阴道在使用前须按照如下程序进行准备： 洗涤：假阴道的主要部件如内胎、集精杯应以洗涤剂清洗干净，再用清水彻底冲净、晾干备用。 安装内胎：把内胎放置于外壳内、将长出的两端外翻于外壳上，用胶圈扎紧固定，防止滑脱。安装中注意使假阴道的内腔平直成空筒状，不得出现扭曲和皱襞。 消毒：以长柄镊夹取含75％酒精浸湿的纱布块，全面涂擦内胎进行消毒，待酒精彻底挥发后，再安装集精杯。集精杯可用蒸煮或酒精消毒。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 采精方法 假阴道采精法 假阴道在使用前须按照如下程序进行准备： 冲洗：将灭菌的内胎和集精杯，用经灭菌的稀释液冲洗2～3次，以消除残存的酒精气味和水分对精子产生的不良影响。 注入热水：由假阴道外壳的注水孔注入占假阴道夹层腔体积2／3的热水，使内腔维持38—40℃的温度。注入的水量还可以维持假阴道内胎一定的压力。 涂抹滑润剂：以灭菌的玻璃棒蘸取灭菌的润滑剂(用医用凡土林和液体石蜡配成)涂至假阴道前段的1／2处，以滑润其内腔，有利于公畜阴茎的插入。 调压：除向假阴道注入热水外，根据公畜个体要求，再注入一定量的空气以维持假阴道内腔适宜的压力，刺激公畜的射精反射。第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 采精方法 假阴道采精法 台畜的准备：台畜是用作引诱公畜爬跨，以适应假阴道采精用的发情母畜。台畜要求健康体壮、性情温驯、后躯还需作清洗消毒。 使用假台畜采精：假台畜可用木材或金属材料制成，其大小规格应随畜种而不同，要求坚固、耐用、安全可靠，以便清洗消毒。公畜需经调教才适应用假台畜采精，通常调教的方法是采用在假台畜的后躯涂抹发情母畜的尿液或阴道分泌物。也可采用在假台畜旁栓系一发情母畜，刺激公畜性兴奋，诱导采精公畜爬跨假台畜，随即用假阴道采精，这样反复训练多次，即可使公畜形成爬跨假台畜的条件反射。第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 采精方法 假阴道采精法 采精操作方法：采精人员位于台畜的右后方，手持假阴道，其倾斜度为35度左右，当公畜两前肢跨上台畜后，迅速将阴茎导入假阴道内，经数次抽动射精后，即将假阴道集精杯向下倾斜，以便精液流人集精杯内，待公畜跳下阴茎软缩脱出后，取下假阴道。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 假阴道采精法 各种动物对采精条件的要求有所不同。公牛和公羊要求假阴道内腔的压力大，此外交配时间短，当阴茎插入假阴道后，公畜躯体向前猛冲即行射精，因此采精操作应迅速敏捷。公马、驴采精的假阴道压力不可过大，当阴茎插入时，经数次抽动，骤然停止后即行射精，射精时，尾部呈现上下煽动，会阴部和阴茎下尿生殖道有明显收缩，射精完毕后打开假阴道放气阀门，以减轻其内腔压力，缓缓取下假阴道。采集兔精液时，使台兔爬骑于采精人员的右手臂上并持假阴道。当公兔爬跨上台兔后，将假阴道外口趋近阴茎挺出方向，阴茎插入经数次抽动，射精时公兔突然朝向一侧倒下并发出“咕”的叫声。马鹿可用牛假阴道采精。第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 采精方法 手握采精法 公猪精液的采集广泛采用手握法。采精人员一只手戴上灭菌乳胶手套，另一只手持集精瓶(上覆以2～3层灭菌纱布)，蹲于假台猪一侧，清洗、消毒公猪包皮及其周围部分。当阴茎伸出时，即用戴手套的手握龟头前的螺旋部分，并将阴茎拉出，使龟头前端露出于拳外。第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 采精方法 手握采精法 手指紧握阴茎并呈节奏性施加压力，并用拇指或食指轻轻按摩龟头前端；当公猪安定伏卧在台畜上即开始射精。弃去最初排出的清亮的副性腺液，注意用集精瓶收集呈白色、富含精子的浓稠部分，最后排出的精液混有胶冻样凝块附着于龟头处，可用拇指及食指予以清除，不要收集于集精瓶中。多数公猪还会有第二次射精过程，因此当第一次射精结束后，应继续作手握刺激收集第二次排出的精液，有个别公猪还会出现第三次射精过程。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 采精方法 按摩采精法 此种方法适用于牛、犬和禽类的采精。是通过采精人员的手指对雄性动物的生殖器官及副性腺进行按摩刺激，以引起性欲而出现射精。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 采精方法 手握采精法 牛的按摩采精：排除采精公牛直肠内的宿粪之后，操作人员的手臂伸入直肠达膀胱背侧稍后部位，连续按摩两侧精囊腺进行刺激，开始排出少许精清，再用手指捏握两侧精囊腺之间的两条输精管壶腹部，手指由前向后滑动按摩一段时间，即可引起公牛排精；与此同时，再由助手配合由上向下按摩阴茎，特别是阴茎的S状弯曲，以刺激阴茎伸出于包皮外，便于收集精液，减少污染。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 采精方法 手握采精法 犬的按摩采精：操作时右手戴上合适的乳胶手套，轻缓地握住公犬阴茎的龟头球部分，左手拿住集精杯位于公犬的左侧准备收集精液。给予龟头球适当的压力并作前后按摩，当阴茎充分勃起经30s左右即开始射精，射精过程持续1～3min。采精时注意不得使阴茎接触器械，否则会抑制射精。由于公犬分段射精，可在射精间隙更换集精容器。犬射出的精液量为2～15ml，分为三段射出，第一部分是由尿道球腺分泌的水样液体，无精子；第二部分是来自睾丸的富含精子的部分，呈白色；最后部分是前列腺分泌物，量最多，不含精子。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 采精方法 电刺激采精法 通过电刺激器可刺激各种动物射精。目前多用于野生动物及失去爬跨能力的驯养动物的采精。电刺激采精器是由电流控制器和电极探棒两部分组成。各种动物应选择适宜的电刺激强度进行采精(表8-2)。第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 采精方法 电刺激采精法 采精公畜(兽、禽)可实行站立或侧卧姿势保定，对一些不易保定的野生动物可采用保定宁、静松灵和氯胺酮进行药物麻醉。先行剪去包皮及其周围的被毛，以生理盐水擦净，灌肠清除直肠内宿粪，将涂抹滑润剂的电极探棒插入肛门，抵达到输精管壶腹部位，插入的深度，大动物为20～25cm、羊约为lOcm、犬为10～ 15cm、熊为15～20cm、兔为5cm。采精时，先开通电源，调节电流控制器，确定频率和通电时间，再调整电压，由低逐渐增强，加大刺激强度，直到动物阴茎伸出，直接接取排出的精液 。第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 采精方法 电刺激采精法 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 采精频度 采精频度是指每周对公畜的采精次数。为了能最大限度地采集公畜精液，维持其健康体况和正常生殖机能，必须合理安排采精频度。 各种动物的采精频度根据精子产生数量、附睾内的贮精量、每次射精量、精子活率和饲养管理水平等因素来决定。过度采精不仅会降低精液品质，而且会造成公畜生殖机能降低和体质衰弱等不良后果。 各种动物在连续采精过程中，如果发现公畜性欲下降，射精量明显减少，精子密度降低，镜检时发现尾部带有原生质滴的未成熟精子比例增加，可能是采精频度过大所致，应减少采精次数，加强饲料营养。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 精液品质检查 精液品质检查是为了鉴别精液品质的优劣，以此作为新鲜精液稀释、保存的依据，同时也能反映种公畜饲养管理水平和生殖器官的机能状态，衡量精液在稀释、保存、冷冻和运输过程中的品质变化及处理效果。第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 精液品质检查 精液的感官检查 射精量：将采得的精液倒人带有刻度的试管或集精杯中，测量其容量。各种动物的射精量平均为：马70(30～100)ml、驴50(20～80)ml、牛4(2～10)ml、羊1(0.5 ～ 2)ml、猪250(150～500)ml、犬5(2～15)ml、鸡0.3(0．1～0．5)ml、鸭0.3(0.2 ～ 0.5)ml、鹅0.3(0.1～0.5)ml、火鸡0.3(0.2～0.4)ml、兔1(0.2～2)ml、大熊猫2 (1 ～ 3)ml、鹿2(1～2．5)ml。 色泽、气味：正常精液的颜色为乳白色和灰白色，稍带有腥味。 云雾状：羊和牛的精子密度大，因此静止的精液呈现有翻腾滚动的云雾状态，以“+++”、“++”、“+”表示其程度。第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 精液品质检查 精子密度 有估测法、计数法和光电比色测定法。 计数法：使用血细胞计数器计数，计算出每毫升精子数。其方法是用1ml吸管准确吸取3%NaCI溶液0．2ml或2ml注入小试管内，根据稀释倍数要求，用血吸管吸取并弃去 10μl或20μl的3%NaCl溶液。再用血吸管吸取被测精液10μl或20μl注入到小试管内摇匀。然后取一滴稀释后精液滴于计算盘上的盖玻片边缘，使精液渗入到计算室内。在400～600倍显微镜下统计出计算室的四角及中央共5个中方格内的80个小方格内的精子数，代入下列公式即为每毫升被测原精液所含精子数。 X × 400 × 10 ×稀释倍数× 1000/80=精于数/ml 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 精液品质检查 精子活率 用玻璃棒蘸取1滴被测精液，密度大的精液可再加1滴稀释液于载玻片上，加以盖玻片，其间应充满精液，不使气泡存在，置于250～400倍显微镜下观察。注意显微镜须放平，最好是在暗视野下进行观察。 精子的活动有3种类型，即直线前进运动、旋转运动和振摆运动。 评价 LEC评价法下载LEC评价法下载评价量规免费下载学院评价表文档下载学院评价表文档下载 精子的活率是根据直线前进运动精子数的多少而确定的。目前评定精子活率等级的方法大多采用十级评分，在微镜视野中估测呈直线前进运动精子占全部精子的百分率，以下列公式表示： 精子活率＝直线前进运动精子数/总精子数×100%第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 精液品质检查 精子畸形率 取1小滴被测精液(精子密度大的精液需用生理盐水稀释)于载玻片上，将样品滴以拉出形式制成抹片，切忌将精液推出而造成人为精子损伤。用0．5％龙胆紫酒精或蓝墨水染色3min，自然干燥、水洗后即可镜检。查数不同视野的500个精子，计算出其中所含的畸形精子数，求出畸形精于百分率。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 精液稀释 精液稀释的目的 在精液中添加一定数量的、适宜于精子存活并保持其受精能力的溶液称为精液的稀释，添加的溶液称为稀释液。由于精液的稀释扩大了精液量，于是增加了与配母畜头数。由于在精液中加入稀释液，供给精子代谢的营养物质，保护精于防止遭受低温打击，缓冲不良环境的危害，抑制细菌的繁衍，延长了精子的存活时间，提高了母畜的受胎率。与此同时，也便于精液的有效保存和运输。未经稀释的精液不可能作长期保存，因此精液稀释提高了优良种公畜精液的利用率。成为充分体现和发挥AI优越性的重要技术环节。第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 精液稀释 稀释液中的成分及作用 稀释液均含有多种成分，每种成分往往具有多种功能，按其主要作用大致可以分为以下几类： (1)稀释剂：主要用以扩大精液的容量，稀释液要求和精液的渗透压相等，如生理盐水、糖类及某些盐类溶液。 (2)营养剂：主要是提供营养物质，补充精子所消耗的能量。如稀释液中的糖类、卵黄、奶类可以作为精子的营养物质，此类物质参与精子代谢，为精子提供外源性能量，减少内源性的物质消耗，从而延长精子在体外的存活时间。 (3)保护剂：对精子能起缓冲、抗冻、抗菌等保护作用的各种制剂。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 精液稀释 稀释液的配制 (1)药品试剂 品质要求纯净，—应选用化学纯或分析纯制剂。 (2)灭菌 稀释液中可耐高温的成分，须作一次配制，以0．7kg/cm2压力经30min高压灭菌。 (3)奶类．奶和奶粉溶液需新鲜，消毒灭菌可采用水浴加热到92～95℃经10min。 (4)卵黄 应选用新鲜鸡蛋，卵黄中不应混入蛋白和卵黄膜。经加热消毒过的稀释液，待温度降至40℃以下时再加入卵黄，并注意充分溶解。 (5)抗生素 青、链霉素须在稀释液加热灭菌后温度降至40℃以下加入，而氨苯磺胺可事先加入稀释液一并加热消毒。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 精液稀释 精液的稀释方法和注意事项 及时稀释：采出的精液经品质检查合格，在温度下降之前应立即稀释。 稀释液温度应与精液温度一致：在精液稀释前用经消毒的温度计测量精液及稀释液的温度。将稀释液的温度调整到和精液温度一致时，沿玻璃棒或集精杯壁徐徐倒入精液内稀释，切不可因稀释使精液温度升高或降低。 稀释后精液应作精子活率检查：将稀释后精子活率与原精液精子活率相比较，以鉴定稀释效果。第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 精液稀释 精液稀释倍数 精液以适当的稀释倍数稀释时，可提高精子的活率和存活时间。因此在研究试验新稀释液的同时，还应确定该稀释液适宜的稀释倍数。添加与精液等量的稀释液如作一倍稀释，则以1：1表示；加入两倍的稀释液为两倍稀释，以1：2表示，余类推。 AI操作 规定 关于下班后关闭电源的规定党章中关于入党时间的规定公务员考核规定下载规定办法文件下载宁波关于闷顶的规定 每头粉输精量中应含有的有效精子数为：牛l 000万～12 000万、羊5 000万～6 000万、猪1．5亿～2．0亿、马1．2亿～1．4亿。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 液态精液的保存 精液保存的目的是为了延长精子在体外的存活时间，并通过运输扩大精液的使用范围。 液态精液的保存按照保存温度可分为常温保存(15～25℃)和低温保存(0～5℃)两种。此种形式的有效保存期较短，一般为0．5～5天。由于保存条件简便，在生产上仍有良好的实用价值。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 液态精液的保存 低温保存法 此种方法是将稀释后的精液置于0～5℃的低温条件下保存。一般是利用冰箱或装有冰块的广口保温瓶冷藏。输精之前，应将冷藏的精液温度回升到35～38℃，使精于的运动恢复正常，保持其正常的受精能力。但在降温过程中，急速达到10℃以下时，会对精子造成不可逆的冷休克作用。因此在低温保存的稀释液中须加入卵黄、牛奶等抗低温打击保护剂，还应注意采用缓慢方式降温。 马、牛、羊的低温保存目前在生产中大多采用奶类稀释液，保存效果好，而且方便。其配方为含有3％～5％卵黄的牛(羊、马)奶，再加入一定量的抗生素。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 液态精液的保存 常温保存法 此种方法是将稀释后的精液在15～25℃温度范围内保存，因此亦称为室温保存法或变温保存法。目前主要应用于猪精液的保存。在精液稀释液中加入弱酸类物质，一般认为有机酸比无机酸效果好，以便创造一定的酸性环境抑制精子的活动。 猪精液的常温保存已在我国较大范围内推广应用，受胎率和产仔率均已达到新鲜精液配种的水平。其中效果较好的稀释配方为：无水葡萄糖6％、柠檬酸钠0．3％、乙二胺四乙酸 (EDTA)0．1％、卵黄3％及适量抗生素。保存温度以10—12C为宜。第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 输精技术 输精前的准备 输精器械的准备：凡是接触精液及母畜生殖道的器械使用之前均须洗涤干净并作消毒灭菌。玻璃和金属输精器可用蒸煮或干燥箱灭菌。输精胶管、玻璃注射器、精液瓶、擦拭毛巾应以高压蒸汽或蒸煮消毒。输精管以每头每畜使用一支为宜。开膣器可浸泡于消毒液中，使用时再用酒精棉球擦拭或以火焰消毒。凡经消毒的输精器械在使用前均须以灭菌生理盐水或稀释液冲洗两次。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 输精技术 输精前的准备 精液的准备：用于输精的精液必须按常规项目进行品质检查，符合Al输精 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 时方可用以输精。以常温和低温保存的精液，因精液量大，输精前须加温到35C左右，因为过低的温度会刺激母畜努责，导致精液倒流。冷冻精液则需要按照规定进行解冻后再用于输精。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 输精技术 输精前的准备 输精母畜的准备：经发情鉴定需要输精的母畜，一般均采用站立保定。羊和犬、兔、鸡等小动物可采用后肢举起保定法。 经保定好的动物应将尾巴拉向一侧，先用清水将外阴部周围清洗干净，再以酒精棉球或消毒液进行消毒，经作用片刻后再以消毒手巾擦干净。 输精人员的准备：输精人员身着工作服，手指甲剪短磨光，手臂洗刷干净，再以酒精棉球或适宜的消毒液进行消毒，待挥发或擦拭于净后再持输精器械进行操作。第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 输精技术 各种动物的输精方法 牛的输精方法：母牛的输精方法普遍采用直肠把握法。方法是一只手伸人直肠握着子宫颈外口，另一只手持输精管插入阴道，先斜向上再向前行，当输精管前端行至宫颈外口时，两只手协同操作，将输精管插入子宫颈的皱襞内，最后把精液注入到宫颈内5～6cm处或子宫体中。此法用具简单，操作安全，受胎率高，是目前广泛应用的一种方法。第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 输精技术 各种动物的输精方法 羊的输精方法：一般均采用开膣器输精法。发情母羊作站立保定或后肢举起保定法。一般需两个人，其中一人将母羊作好保定，一人用开膣器打开阴道，用输精器伸入子宫颈外口，拨开上、下两片或三片皱襞插入1～2cm，将精液注人。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 输精技术 各种动物的输精方法 猪的输精方法： 母猪的阴道与子宫颈接合处无明显界限，可将输精管直接插入阴道，沿阴道上壁作逆时针旋转向前滑进，当输精管通过子宫颈的皱襞(手能感觉到)进入子宫体时，即可缓慢注入精液，一般需要3～5min输完，最好将注射器提高，让活塞自动下降推人精液，以免发生精液倒流现象，影响受胎率和产仔数。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 输精技术 各种动物的输精方法 马、驴输精方法： 对马、驴的输精一般采用胶管导人法。输精人员左手持注射器，右手握胶管，管的尖端隐于手掌中缓慢伸入阴道内，当手指触到子宫颈口后，以食指伸入颈口，将输精管前端导人子宫颈腔内10～15cm(驴3～12cm)深处，轻缓注入精液，然后缓慢抽出输精管，并用手指轻轻按捏子宫颈外口，以刺激子宫颈收缩，防止精液倒流。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 输精技术 各种动物的输精方法 犬的输精方法：将母犬放在适当高度的台上站立保定或作后肢举起保定，输精人员持输精管插入阴门，向前行至子宫颈口附近，经产母犬可继续伸至子宫体内，即可缓缓注入精液。输精后抬高母犬的后躯，同时以食指伸人阴道内停留5min模拟自然交配的“锁结”作用，以防止精液倒流。 兔的输精方法：母兔输精时需仰卧保定，将输精管沿背线慢慢插入阴道内7～lOcm，即子宫颈口位置，轻缓注入精液。输精后将母兔后躯抬高片刻，以防精液倒流。第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 冷冻精液 精液的冷冻保存是指将采集的新鲜精液，经过特殊处理后，利用冷源冻结成固态的形式保存于超低温环境下，使精子长期保存其受精能力的技术。 精液冷冻保存能充分提高优良种公畜的利用率并保证大量母畜的配种需要，加快畜群品种改良步伐，推进育种工作进程；便于开展国际、国内种质交流；推动繁殖新技术在生产上的应用；建立动物雄性配子种质资源库。 为了保证冷冻精子在解冻后仍保持较高的活力，必须克服冷冻-解冻过程对精子的伤害。这种伤害可能是形态上的(显微或超微结构)，也可能是生理、生化或功能上的。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术精液冷冻保存冷冻稀释液 在精液冷冻和解冻的温度变化过程中，精清对精子的保护作用是有限的，为此，进行精液冷冻保存就要配合使用专门的溶液先将精液进行稀释，并添加抗低温保护剂。 对冷冻稀释液的基本要求包括稳定的pH，也就是液体的缓冲能力，合适的渗透压和较好的低温保护性能。稀释液的主要成分包括：低温保护剂(如卵黄、牛奶)，维持渗透压物质(糖类、柠檬酸钠)，抗菌素及其他添加剂。添加防冻保护剂是保证在冷冻过程中尽可能减少精子细胞的物理损伤。第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术精液冷冻保存冷冻稀释液 常用的防冻保护剂为：甘油、乙二醇(EG)、二甲基亚砜(DMSO)、1，2-丙二醇(PD)、牛血清白蛋白(BSA)等。近年来各国学者对稀释剂和防冻剂的不同组合对精液冷冻所产生的效果以及对不同种动物的适应性方面做了大量工作。 配制成的稀释液一般含有两种以上上述成分，稀释比例大多数为2～8倍。稀释倍数应保证每份精液直线前进运动精子数不低于1000～1200万个。细管型冷冻精液的剂量为0.25～0.5mL，因此稀释倍数较低；颗粒型冷冻精液需经冷冻前稀释和解冻稀释，因此稀释倍数也就较高。第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液精液稀释及稀释后的平衡 精液稀释一般分为一步稀释法和两步稀释法。一步稀释法指按照精液稀释要求，将含有防冻保护剂的稀释液一次与精液按稀释比例同温混合，使每一剂量中解冻后所含直线运动精子数达到规定标准，一般每支细管精液含精子1 000万，每个颗粒含1 200万，每支安培含1 500万。 两步稀释法指采出的精液在室温下先用不含防冻保护剂的稀释液(Ⅰ液)作第一次稀释，稀释倍数为最终倍数的一半(一般为1～2倍)，一次稀释后的精液在1～1.5 h缓慢降温至4～5℃，再加入等温的含防冻保护剂的稀释液(Ⅱ液)作第二次稀释，Ⅱ液的加入量一般为一次稀释后的精液量。第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液精液稀释及稀释后的平衡 将精液稀释后缓慢降温到4～5℃，并在这一温度平衡一段时间，使防冻保护剂成分渗透入精子内，产生抗冻保护作用。在低温环境下的平衡可以增强精子的耐冻性，为下一步的低温冷冻做好生理上的准备，减少在冷冻过程中有害温区冰晶对精子的损害。 稀释精液前应检查精液品质，其质量优劣与冷冻效果密切相关，如牛的冷冻精液按照国家标准要求鲜精精子活率下限65%，精子密度8亿/ml，精子畸形率上限15%。精液稀释后应取样检测其活率，要求不应低于原精液的精子活率。第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液精液的分装及剂型 经过平衡，按保存剂型分装，精液冷冻保存形式分三种：安瓿型、颗粒型和细管型。第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液冷冻方法 由于精液与冷冻环境有极大的温差(可达到120～180℃)，这个热交换过程可分为二步：第一步，当精液接触冷冻容器的冷冻面时，精液的热量不断向冷冻面传递，直到与冷冻面的温差为零为止，达到热平衡状态。此时的温度，称为热平衡温度。维持一个短暂时间后，精液温度随冷冻面降温梯度继续下降，达到要求温度后浸入液氮。 已经知道精子产生致死性冷冻伤害的危险温区是0～-60℃，精子的冷冻效果是要以尽快地降温速度通过危险温区，才能保证解冻后精子的存活率。因此，精子冷冻的原则是：第一，热平衡温度必须在危险温度(-60℃)以下；第二，缩短开始冷冻到热平衡的时间，使得精液尽快通过危险温区。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液解冻方法 解冻的速度与冷冻液的组成和冷冻速度有关。一般来说，缓慢冷冻的精液应采取缓慢解冻的方法。这是因为缓慢冷冻的精子发生失水现象，故应采取缓慢解冻的方法使精子复水。相反，快速冷冻则由于精子细胞内渗出水分较少，体积变化不大，胞内形成冰晶较小，故必须配合快速解冻，以防止解冻过程中引起重复结晶而损害细胞结构的现象发生。由于目前颗粒冻精或细管冻精都采用快速冷冻法，所以解冻时也多采取快速解冻法。第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液解冻方法 细管冻精可直接投入解冻温度的水浴中待精液融化1/2即取出，在低温轻轻晃动至完全解冻。但近来的研究认为高温解冻的效果优于常温解冻。在细管冷冻精液中，由于塑料细管的传热性对温度有平衡作用，因而用较高温度解冻已证明有利无害。Aamdal(1968)首次提出细管牛精液在75℃以12秒解冻方法，比在35℃、30秒解冻的活精子数多14％～21.9％， 这种高温解冻精液的受胎率71.1％。Andersen等(1972)也认为75℃解冻绵羊细管冻精的存活率好于35℃解冻的结果。Fiser等(1989)报道，在60℃解冻后，进行重稀释降低细管精液中的甘油浓度的做法不影响精子的存活率和顶体完整性。第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液解冻方法 颗粒精液也以快速解冻为宜，解冻可以用解冻液(湿解冻)，也可以不用解冻液在37℃下解冻(干解冻)。有人推荐了一种快速解冻方法，具体做法是将冻精颗粒放在预先加温的(60—80℃)或有解冻液的试管里，当颗粒三分之二融化时，便将解冻管转移到35—40℃水中。或在解冻时先让颗粒在预热的高温(60～80℃)试管内融化2/3～1/2，余1/3～1/2时取出轻晃至完全融化。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 人工授精及冷冻精液技术的发展前景 1．建立精液基因库：收集有种用价值的和濒危动物的精液，将其长期保存起来建立精液基因库，在需用时即可以恢复使用。我国的动物品种资源极为丰富，仅畜禽品种就有260余种。长期以来动物品质资源不断迅速下降，有的已经濒临灭绝，极需以精液保存的形式来保存和抢救这些品种资源。 2．普及和研究各种动物的Al技术：在目前，主要家畜(禽)A1技术问题已经解决或基本解决以后，各种野生动物，特别是已列入国家保护动物的濒危动物的人工繁殖，应加快研究及应用，以提高其繁殖率。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第一节 人工授精及冷冻精液 人工授精及冷冻精液技术的发展前景 3．冷冻精液的生产和使用应 规范 编程规范下载gsp规范下载钢格栅规范下载警徽规范下载建设厅规范下载 化：我国牛的冷冻精液已颁布国家标准，应加强管理力度以保证精液品质，并迅速达到国际标准，满足精液进出口贸易的需要。 4．加强精液冷冻保存的基础研究：为了进一步提高冷冻精液质量，今后应开展精子细胞低温生物学、精液冷冻生产工艺、标准和检疫等方面的研究。将我国的动物冷冻精液研究提高到一个新的水平。第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第二节 体外授精技术 体外受精(fertilizationinvitro)是指雌雄配子在体外条件下完成成熟、获能和受精的过程。从1959年首次报道了兔体外受精的试管后代降生到1982年世界第一头体外受精牛诞生，目前已经获得了多种动物（包括人）的体外受精后代。第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第二节 体外授精技术 随着DNA重组和转基因技术及其他胚胎工程技术，如胚胎分割、嵌合体、性别控制和胚细胞核移植等技术的发展，对动物胚胎的需求量日益增加，单靠超数排卵技术远远不能满足科研和生产需要。利用体外受精技术，可生产出大量、优质、廉价的胚胎服务于科研与生产。同时也是研究配子相互作用、受精和早期胚胎发育的细胞和分子机理必不可少的手段。足见其具有广阔的应用前景。 体外受精包括四个主要步骤：精于体外获能、卵母细胞体外成熟、体外受精和早期胚胎发育。 第八章 受精调控技术第八章 受精调控技术第三节 显微授精技术 显微受精（microfertilization)是20世纪80年代后期发展起来的一种新型体外受精技术，即借助显微操作仪，把精子或精子细胞直接注入卵母细胞质（胞质内受精）或卵周隙（带下受精）来实现受精的过程。 这一技术不仅对研究受精生物学具有重要的理论意义，而且在提高良种公畜的精子利用率，保护和挽救珍稀动物及解决某些男性不育问题等诸多方面也具有重要的应用价值，也是生产转基因动物的重要手段。