猫细小病毒的分离与鉴定
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窦验研究? 匡吐 幽年 第 期 怠第 期 第 卷
猫细小病毒的分离与鉴定
刘明慧 ,石 践 ,单振振 ,袁 宝 ,任文陟.吉林省农业机械研究院,吉林长春: .吉林大学农学部实验动物中心,吉林长春
【摘 要】利用传代细胞从病死猫脾脏中分离获得 株病毒,该毒株可使培养细胞出现明显的细胞病变 。并对其进行形态学、理化学、人工感染试验和分子病毒学等鉴定,证明所分离的这株病毒为猫细小
病毒。
【关键词】猫细小病毒;分离;鉴定图分类号. . 【文献标识【文章编号? ??, ,, ,. .. ; . , , , , , ? ,,.
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猫细小病毒是细小病毒科细小病毒属中的成 现 %的时收毒,反复冻融 次,置一 ?保
员,可感染多种野生猫科动物?。病毒首次分离培 存,待鉴定。设未接毒的正常细胞为对照口】。
养是在年, 年 从 头患类
. 常规病毒学鉴定
似猫传染性肠炎症状的豹脾脏分离出了同样的病
. . 电镜观察
毒,并鉴定为细小病毒之后,才对本病的研究取得 用实验室分离保存的第 代细胞培养物, 了显著进展乜】。因此,本实验对 只疑似猫瘟热的 反复冻融 次后,/ 离心 ,取上清作
猫脾脏病料用细胞进行了病毒的分离,并进行 负染样品,以 . %磷钨酸负染作电镜观察。 鉴定,对该病的诊断和防治有一定意义。 . 病毒理化学特性试验
材料与方法
用 一碘脱氧尿核苷 一 处理待鉴定病毒 进行核酸型鉴定;用氯仿处理病毒进行脂溶剂敏感 . 病料
试验;用. 处理病毒进行耐酸性试验;用 ? 病毒分离样品为长春某动物医院送检疑似猫 水浴 ,对病毒进行耐热试验。病毒滴度在 孔 细小病毒病猫的脾脏。
微量细胞培养板用细胞上滴定。
. 病毒的分离
. 红细胞血凝谱试验
. . 病毒分离样品处理 采用微量血凝法,分别用 %的鸡、猪、猴、豚
鼠、大鼠、兔的红细胞 其中猪红细胞稀释液含 . %
病毒分离样品采用常规方法处理。
. . 病毒分离 的健康兔血清 悬液进行 试验,滴定待检病毒 将长满单层的细胞 由吉林省五星动物保 的 效价。
健药厂惠赠 传代细胞 ,接种已处理好的病料 ,每 . . 人工感染易感猫试
验 培养瓶接种,置 ? :培养箱中培 选用健康幼猫 只,口服 和腹腔注射 养 ,逐日观察细胞 情况。若出现,待出 病毒液,另外 只不接种作为阴性对
照。各
组隔离饲养,每日观察猫的精神 、检查其体温、呼
吸、食欲与粪尿性状,取病猫的脏器组织检测猫细
小病毒抗原。
收稿日期: 年 月 日?
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实验砥究年 第期 怠第 期 第 卷 合成抑制剂 所抑制,符合无囊膜、对 . 扩增试验
热、酸抵抗较强,核酸型为的细小病毒特点。
根据报道的基因序列,选择
. . 红细胞血凝谱试验 基因的保守区域,利用软件
设计
领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计
了一对 采用微量血凝法测定鸡、猪、猴、豚鼠、大鼠、
检测的特异性引物,上游引物 为
兔的红细胞对猫细小病毒第五代毒的 滴度,结 ’,下游引物 为 果除猪、猴红细胞的 分别为 : 和猴的 :. ’,扩增片段为 ,
外,其余均不凝集,符合血凝谱的文献记载。 对 株待检病毒进行扩增,同时设阴性、阳性 . . 人工感染易感猫试验
对照,参考为阳性对照,正常细胞培养物 试验接种的 只猫,经 ~ 的潜伏期后, 为阴性对照。
出现发热,体温升高左右,同时出现厌食、呕 结果
吐、沉郁、出血性肠炎和脱水等症状,两周后全部 . 病毒分离 死亡。发病后第 天采血发现白细胞严重减少到 个/ 正常猫
血清中自细胞数为 ~
用 传代细胞从病死猫脾脏中分离获得 个/左右。剖检可见胃肠空虚,粘膜充
株病毒。图 中 为正常细胞对照,图 中 血、肠系膜淋巴结肿大、坏死,脾脏、肾脏等实质 为引起的细胞。
器官出现淤血。
. 扩增试验
待检病毒经扩增得到与预期结果相符的 一
条长约 的目的片段,阴性对照没有扩增出 任何片段。见图 。
?图 分离株在细胞产生的 ×. 常规病毒学鉴定结果
. . 电镜鉴定结果
取细胞第 代病毒培养物,冻融 次,电
镜负染观察,可见有呈立体对称,大小约 ~ 细小病毒样粒子,见图 。
图 检测结果
:阴性对照; :阳性对照 : . 样本 .. 讨论
由于该病毒能耐受脂溶剂、耐酸热和较高的温 度,因此对外界因素具有较强的抵抗力,不易丧失 其感染性。有研究表明,不同的细胞对猫细小病毒 图 培养物上清电镜负染后的病毒粒子
的易感性也存在很大的差异。因此,选择易感细胞 有利于提高病毒的分离率。本试验采用 传代 . . 理化性试验
细胞系对其成功进行了分离。虽然粪便内存在许 用 .碘脱氧尿核苷 一 处理的这株病毒 多病毒粒子,但是其内病菌太多,易污染,所以用脾 的。比对照组低 个数量极,说明 一对
脏经处理后接种 细胞,会减少细胞的污染机 分离病毒有明显影响;氯仿、酸、高温处理对病毒的 率,提高病毒分离的成功率 。 , 无明显影响,处理的与未处理的相差小于
个数量级,说明该毒株能抵抗氯仿、酸、热,但能被
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