灵芝质量标准及检验操作规程

灵芝质量标准及检验操作规程灵芝质量标准及检验操作规程灵芝质量标准及检验操作规程有限公司成质量量标准及检验操作规程标题灵芝质量标准及检验操作规程第1页共7页文件号起草人起草日期部门批阅日期QA批阅日期批准日期见效日期颁发部门发散部门改正记录文件校正号改正版本改正时间改正原因品名：1.1中文名：灵芝1.2汉语拼音：Lingzhi代码：取样文件编号：检验方法文件编号：依据：《中国药典》（2020年版一部）。质量标准：项目法定标准内控标准制法除去杂质同法定标准赤芝外形呈伞状，菌盖肾形、半圆形或近圆形，直径10～18cm，厚l～2cm。皮壳坚硬，黄褐色至红褐色，有光彩，具环状棱纹和辐射状皱纹，边缘薄而平截，常稍内卷。菌肉白色至淡棕色。菌柄圆柱形，侧生，少偏生，性状长7～15cm，直径1～3.5cm，红褐色至紫褐色，光明。孢子微小，黄同法定标准褐色。气微香，味苦涩。紫芝皮壳紫黑色，有漆样光彩。菌肉锈褐色。菌柄长17～23cm。栽种品子实体较粗壮、肥厚，直径12～22cm，厚1.5～4cm。皮壳外常被有灵芝质量标准及检验操作规程第2页共7页大量粉尘样的黄褐色孢子。1）本品粉末浅棕色、棕褐色至紫褐色。菌丝散在或粘结成团，无色或淡棕色，修长，稍波折，有分枝，直径2.5～6.5μm。孢子褐色，卵形，顶端平截，外壁无色，内壁有疣状兴起，长8～12μm，宽5～8μm。（2）取本品粉末2g，加乙醇30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取灵芝比较药材2g，同法制成比较药材溶液。照薄层色谱法（公则0502)试验，吸取上述两种溶液各4μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃)-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1)的上层溶液为张开剂，张开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm)下检视。供试品色谱中，在与比较药材色谱相应的地址上，显相同颜色的荧光斑点。3）取本品粉末1g，加乙醇50ml，加热回流1小时，趁热滤过，滤液置蒸发皿中，用少量水分次冲洗容器，合并洗液并入蒸发皿中，置水浴上蒸干，残渣用水5ml溶解，置50ml离心管中，慢慢加入乙醇25ml，不断搅拌，静置一小时，离心（转速为每分钟4000转），取积淀物，鉴别同法定标准用乙醇10ml冲洗，离心，取积淀物，烘干，放冷，加4mol/L三氯乙酸溶液2ml，置10ml安培瓶或顶空瓶中，封口，混匀，在120℃水解3小时，放冷，水解液转移至50ml烧瓶中，用70%乙醇2ml溶解，置离心管中，离心，取上清液作为供试品溶液。另取半乳糖比较品、葡萄糖对照品、甘露糖比较品和木糖比较品适合，精美称定，加70%乙醇制成每1ml各含0.1mg的混杂液，作为比较品溶液。照薄层色谱法（公则0502）试验，吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以正丁醇-丙醇-水（5:1:1）为张开剂，张开，取出，晾干，喷以对氨基苯甲酸溶液(取4-氨基苯甲酸0.5g，溶于冰醋酸9ml中，加水10ml和85%磷酸溶液0.5ml，混匀)，在105℃加热约10分钟，在紫外光（365nm）下检视。供试品色谱中，在与比较品色谱相应的地址上，显相同颜色的荧光斑点。其中最强荧光斑点为葡萄糖，甘露糖和半乳糖荧光斑点强度周边，位于葡萄糖斑点上、下两侧，木糖斑点在甘露糖上，荧光斑点强度最弱。水分不得过17.0%(公则0832第二法）总灰分不得过3.2%(公则2302)。检查同法定标准二氧化硫残留量照二氧化硫残留量测定法（公则2331）测定，不得过150mg/kg。灵芝质量标准及检验操作规程第3页共7页照水溶性浸出物测定法（公则2201)项下的热浸法测定，不得少于浸出物同法定标准3.0%。多糖比较品溶液的制备取无水葡萄糖比较品适合，精美称定，加水制成每lml含0.l2mg的溶液，即得。标准曲线的制备精美量取比较品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2，分别置10ml具塞试管中，加水至2.0ml，迅速精美加人硫酸蒽酮溶液（精密称取蒽酮0.lg，加硫酸100ml使溶解，摇匀）6ml，马上摇匀，放置15分钟后，马上置冰浴中冷却15分钟，取出，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（公则0401)，在625nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。供试品溶液的制备取本品粉末约2g，精美称定，置圆底烧瓶中，加水60ml，静置1小时，加热回流4小时，趁热滤过，用少量热水冲洗滤器和滤渣，将滤纸和滤渣置烧瓶中，，加水60ml，加热回流3小时，趁热滤过，合并滤液，置水浴上蒸干，残渣用水5ml溶解，边搅拌边缓慢滴加乙醇75ml，摇匀，在4℃放置12小时，离心，弃去上清液，积淀物用热水溶解并转移至50ml量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，取溶含量测定液适合，离心，精美量取上清液3ml，置25ml量瓶中，加水至刻度，摇同法定标准匀，即得。测定法精美量取供试品溶液2ml，置10ml具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“精美加人硫酸蒽酮溶液6ml”起，同法操作，测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量（mg)，计算，即得。本品按干燥品计算，含灵芝多糖以无水葡萄糖（C6H12O6)计，不得少于0.90%。三萜及甾醇比较品溶液的制备取齐墩果酸比较品适合，精美称定，加甲醇制成每lml含0.2mg的溶液，即得。标准曲线的制备精美量取比较品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml，分别置1，5ml具塞试管中，挥干，放冷，精美加人香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，摇匀，在70℃水浴中加热15分钟，马上置冰浴中冷却5分钟，取出，精美加入乙酸乙酯4ml，摇匀，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（公则0401)，在546nm波长处测定吸光灵芝质量标准及检验操作规程第4页共7页度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。供试品溶液的制备取本品粉末约2g，精美称定，置具塞锥形瓶中，加乙醇50ml，超声办理（功率140W，频率42kHz）45分钟，滤过，滤液置100ml量瓶中，用适合乙醇，分次冲洗滤器和滤渣，洗液并入同一量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得。测定法精美量取供试品溶液0.2ml，置15ml具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“挥干”起，同法操作，测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含齐墩果酸的含量计算，即得。本品按干燥品计算，含三萜及甾醇以齐墩果酸（C30H48O3)计，不得少于0.50%。包装规格3g/袋；5g/袋；10g/袋；30g/罐；40g/罐；50g/罐；0.5kg/袋；1kg/袋；10kg/同法定标准袋；15kg/袋；18kg/袋；20kg/袋；25kg/袋；30kg/袋；50kg/袋包装资料中药饮片袋同法定标准性味与归经甘，平。归心、肺、肝、肾经。同法定标准补气安神，止咳平喘。用于心神不宁，失眠心悸，肺虚咳喘，虚劳短气，功能与主治不思饮食。同法定标准用法与用量6～12g同法定标准复验期36个月同法定标准储蓄置干燥处，防霉，防蛀。同法定标准检验操作规程：7.1试药与试剂:乙醇、甲醇、灵芝比较药材、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、葡萄糖比较品、硫酸蒽酮溶液、氢氧化钠滴定液、甲基红乙醇溶液指示剂。7.2仪器与用具：电子天平、烘箱、硅胶G板、电炉子、马弗炉、超声波冲刷器、高效液相色谱仪紫外分光光度计、中药二氧化硫测定仪。7.3性状：取本品适合，自然光下目测色彩，嗅闻气味。7.4鉴别：7.4.1取本品制片置10×10显微镜下做显微观察。7.4.2取本品粉末2g，加乙醇30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取灵芝比较药材2g，同法制成灵芝质量标准及检验操作规程第5页共7页比较药材溶液。照薄层色谱法（附录7）试验，吸取上述两种溶液各4μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上层溶液为张开剂，张开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与比较药材色谱相应的地址上，显相同颜色的荧光斑点。7.4.3取本品粉末1g，加乙醇50ml，加热回流1小时，趁热滤过，滤液置蒸发皿中，用少量水分次冲洗容器，合并洗液并入蒸发皿中，置水浴上蒸干，残渣用水5ml溶解，置50ml离心管中，慢慢加入乙醇25ml，不断搅拌，静置一小时，离心（转速为每分钟4000转），取积淀物，用乙醇10ml冲洗，离心，取积淀物，烘干，放冷，加4mol/L三氯乙酸溶液2ml，置10ml安培瓶或顶空瓶中，封口，混匀，在120℃水解3小时，放冷，水解液转移至50ml烧瓶中，用70%乙醇2ml溶解，置离心管中，离心，取上清液作为供试品溶液。另取半乳糖比较品、葡萄糖比较品、甘露糖比较品和木糖比较品适合，精美称定，加70%乙醇制成每1ml各含0.1mg的混杂液，作为比较品溶液。照薄层色谱法（附录8）试验，吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以正丁醇-丙醇-水（5:1:1）为张开剂，张开，取出，晾干，喷以对氨基苯甲酸溶液(取4-氨基苯甲酸0.5g，溶于冰醋酸9ml中，加水10ml和85%磷酸溶液0.5ml，混匀)，在105℃加热约10分钟，在紫外光（365nm）下检视。供试品色谱中，在与比较品色谱相应的地址上，显相同颜色的荧光斑点。其中最强荧光斑点为葡萄糖，甘露糖和半乳糖荧光斑点强度周边，位于葡萄糖斑点上、下两侧，木糖斑点在甘露糖上，荧光斑点强度最弱。7.5检查：水分：不得过17.0%(附录15第二法)。灰分：不得过3.2%（附录17）。灵芝质量标准及检验操作规程第6页共7页7.5.3二氧化硫残留量：照二氧化硫残留量测定法（附录58）测定，不得过150mg/kg。7.6浸出物：照水溶性浸出物测定法（公则2201）项下的热浸法测定，不得少于3.0%。7.7含量测定：7.7.1多糖：比较品溶液的制备取无水葡萄糖比较品适合，精美称定，加水制成每lml含0.12mg的溶液，即得。标准曲线的制备精美量取比较品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2，分别置10ml具塞试管中，加水至2.0ml，迅速精美加人硫酸蒽酮溶液（精美称取蒽酮0.lg，加硫酸100ml使溶解，摇匀）6ml，马上摇匀，放置15分钟后，马上置冰浴中冷却15分钟，取出，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（附录5)，在625nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。供试品溶液的制备取本品粉末约2g，精美称定，置圆底烧瓶中，加水60ml，静置1小时，加热回流4小时，趁热滤过，用少量热水冲洗滤器和滤渣，将滤纸和滤渣置烧瓶中，，加水60ml，加热回流3小时，趁热滤过，合并滤液，置水浴上蒸干，残渣用水5ml溶解，边搅拌边缓慢滴加乙醇75ml，摇匀，在4℃放置12小时，离心，弃去上清液，积淀物用热水溶解并转移至50ml量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，取溶液适合，离心，精美量取上清液3ml，置25ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。测定法精美量取供试品溶液2ml，置10ml具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“精美加人硫酸蒽酮溶液6ml”起，同法操作，测定吸光度，灵芝质量标准及检验操作规程第7页共7页从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量（mg)，计算，即得。本品按干燥品计算，含灵芝多糖以无水葡萄糖（C6H12O6)计，不得少于0.90%。7.7.2三萜及甾醇：比较品溶液的制备取齐墩果酸比较品适合，精美称定，加甲醇制成每lml含0.2mg的溶液，即得。标准曲线的制备精美量取比较品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml，分别置1，5ml具塞试管中，挥干，放冷，精美加人香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，摇匀，在70℃水浴中加热15分钟，马上置冰浴中冷却5分钟，取出，精美加入乙酸乙酯4ml，摇匀，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（附录5)，在546nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。供试品溶液的制备取本品粉末约2g，精美称定，置具塞锥形瓶中，加乙醇50ml，超声办理（功率140W，频率42kHz）45分钟，滤过，滤液置100ml量瓶中，用适合乙醇，分次冲洗滤器和滤渣，洗液并入同一量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得。测定法精美量取供试品溶液0.2ml，置15ml具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“挥干”起，同法操作，测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含齐墩果酸的含量计算，即得。本品按干燥品计算，含三萜及甾醇以齐墩果酸（C30H48O3)计，不得少于0.50%。