玻璃板处理
6％的聚丙烯酰胺凝胶属于DNA测序胶，胶厚度仅为0.4mm，从玻璃板上玻璃后难以进行后续的显色操作，因此，必须对玻璃板进行硅烷化处理。在对玻璃板硅烷化处理之前，必须采用温水和洗涤剂将玻璃板彻底洗干净，先以自来水冲去洗涤剂，再用去离子水反复冲洗几遍，晾干或烘干。
长玻璃板的处理：
A. 带PE手套，将洗好的长玻璃板采用95％擦洗2～3次，晾干。用镜头纸蘸取亲和硅烷溶液少许（A4纸大小的玻璃板用150-200 μl），涂布在长玻璃板的一侧，整块板涂布均匀，不能有死角。
B. 4～5 min后，用95％的乙醇洗长玻璃板3次，以去除多余的亲和硅烷，待用。
短玻璃板（上部带有凹槽）处理：
A. 更换PE手套，将洗好的短玻璃板采用95％擦洗2～3次，晾干。用镜头纸蘸取剥离硅烷溶液适量（A4纸大小的玻璃板用1-1.5 ml），涂布在短玻璃板的一侧，整块板涂布均匀，不能有死角。
B. 5～10 min后，用干净镜头纸擦去多余的剥离硅烷，待用。
注意事项：在玻璃板的处理过程中，处理好的玻璃板一侧应该做好标记，保持干净。长短玻璃板分开处理，及时更换PE手套避免交叉污染。最后，玻璃板的硅烷化处理应该在通风橱中进行。
凝胶制备
在制胶台上固定好玻璃板，保持水平。制备6％的变性聚丙烯酰胺凝胶，一块胶的配方如下：
5 × TBE
16 ml
尿素（分析纯）
33.6 g
40％的丙烯酰胺
12 ml
ddH2O
补足至80 ml
0.25 μm 滤膜过滤，灌胶前加入10％过硫酸铵（APS）800μl，四甲基乙二胺（TEMED）100μl，充分混匀，水平灌胶。灌胶完成后倒插梳子（鲨鱼齿朝外）封口，水平放置过夜。
银染
A. 电泳完毕，卸板，用超纯水冲洗板外侧后小心地分开两板，凝胶应该牢固地附着在长玻璃板上，避免划破胶面。
B. 固定：将凝胶(连玻璃板)放入塑料盘，用固定溶液（7.5％冰乙酸）浸没,充分振荡至样品中染料完全消失。保留固定溶液，用于终止显影反应。
C. 洗胶：用超纯水振荡洗胶3次，每次5分钟。从水中取出，当转移至下一溶液时拿着胶板边沿静止30s，使水流尽，再进行下一次洗涤。
D. 染色：凝胶移至0.1％AgNO3（使用前按1.5ml/l加入37%新鲜甲醛）充分摇动30分钟。
E. 取出凝胶放入装有超纯水的盘中浸洗5-10 s，迅速转移至显影液。
F. 显影：在已冷却至4℃的3％碳酸钠溶液中（当天配制，预冷），按1.5ml/l加入37%新鲜甲醛和200μl/l的硫代硫酸钠溶液（10mg/ml）。先倒入一半显影液，第一批条带出现后再加入另一板显影液，轻摇至条带全部出现。
G. 终止：条带全部出现后，倒入固定液终止显影。
H. 当不在有气泡逸出，换超纯水洗涤2次，每次3 min。
I. 干胶：将凝胶置于室温干燥。干燥后在可见光灯箱上观察凝胶，数码相机拍照记录。
本文档为【核酸PAGE电泳方法】，请使用软件OFFICE或WPS软件打开。作品中的文字与图均可以修改和编辑，
图片更改请在作品中右键图片并更换，文字修改请直接点击文字进行修改，也可以新增和删除文档中的内容。
该文档来自用户分享，如有侵权行为请发邮件ishare@vip.sina.com联系网站客服，我们会及时删除。
[版权声明] 本站所有资料为用户分享产生，若发现您的权利被侵害，请联系客服邮件isharekefu@iask.cn，我们尽快处理。
本作品所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权，请谨慎使用。
网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽..)目的在于配合国家政策宣传，仅限个人学习分享使用，禁止用于任何广告和商用目的。
浙公网安备 33021202002483