制备液相色谱技术

时 , 细胞的 聚合酶 , 核糖体浓度上升 , 而且参与 , 合成的 聚合酶 比 例上升 , 参与核糖体蛋白质合成的 聚合酶和核糖体的细胞浓度也上升 。 聚合酶 的 分配可能是细胞生长速率对核糖体生物合成的首要基因调控机制 。 生物大分子的合成速率及 其功能的分配与细胞的 浓度有严格的相关性 , 这 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明由 介导的严紧型响 答 系 统在生长速率和基因调控的偶合中起关键作用 。 当外界培养条件变化时 , 严紧型响答系统通 过代谢信号 作为效应子影响了一系列基因调控 , 使基因表达和功能水平与细 胞 生 长 速率达到一新的平衡状态 。 生长速率除了上述对复制和表达的总体调控作用 , 即复制 、 转录 、 翻译机器的合成和分 配 , 还可通过各种不同机制专一性地调控某一特定基因的表达 , 如染色体的 , , 。 和 转座子的 基因的表达 。 生长速率增高时 , 和 。 的稳定性提高 , 翻 译效率也随之上升 。 而在 和 基因表达中 , 则分别降低了 中阻断核糖体移 动 的 一 结构和衰减子结构的稳定性 , 从而提高了翻译效率 。 在生长速率和基因表达的偶 合中核糖体的浓度和功能水平常常起重要作用 。 制备液相色谱技术 刘 国 论 中国科学院化学所 液相色谱技术的发明 , 可 以追溯到本世纪初 。 俄国植物学家茨维特 以填装碳酸钙粉末的 玻璃柱 , 分离植物色素的经典实验 。 自 年代之后 , 气相色谱 、 液相色谱等迅速发展 , 各种 型式的色谱 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 , 成了分离和分析的利器 , 在科学技术的众多领域中发挥着重要作用 。 自 年代 以来 , 高效液相色谱得到了飞速发展 。 由于它具有高效 、 高检测灵敏度 , 分 离 条 件 也 比较温和 , 在生物科学中得到了 日益广泛的应用 。 近十余年来 , 伴随着生物技术和精细化工 的发展 , 作为液相色谱一个分支的制备型液相色谱也 日益受到人们的重视 , 尤其成为 了生物 技术产品生产和研究中不可缺少的手段 。 〔幻 制备液相色谱 , 可 以大致分为常规的柱色谱和高效制备液相色谱两大类 。 芬兰糖业公司 在常规制备液相色谱的应用上 , 曾起了很大作用以 。 早在 年时 , 他们就建立了柱尺寸 为 直径 米 , 长 米的常规柱液相色谱系统 , 用以回收糖蜜中的蔗糖 。 年 , 在西德又建立 了另一套大型装置 , 使用了七根直径 米长度 米的柱子 , 每年可处理 万吨糖蜜 , 将其中 的蔗糖 、甜菜碱等加 以回收 。 这是迄今为止最大的液相色谱装置 。 此外 , 瑞典的 等 公司也开发了不 同分离规模的系列制备液相色谱产品及与其配套的不 同尺寸的柱子 , 主要的 柱材料 介质 是各种不同类型的交联葡聚糖或琼脂糖凝胶 。 应该说 , 常规液相色谱技术虽 有柱效较低 , 分离速度较慢的缺点 , 但它配套设备 、 分离介质及在使用方面的理论和经验均 较成熟 , 只要运用得当 , 它可 以用适宜的成本纯化制备许多生物制品 , 如血液制品 , 胰岛素 , 干扰素 , 生长激素以及抗生素等 。 胰岛素即是应用得较早的一个分离对象〔 〕。 例如 , 使用了 柱容量 升的多层柱 , 填入交联葡聚糖凝胶 , 以每小时 升的流速分离胰岛素 , 用以除去二 聚体 。 上柱量为 克 , 上柱体积为 升 , 每一操作循环约七小时 。 在这个例子中 , 实际上 已 是生产规模 。 相比之下 , 高效制备液相色谱的发展要晚一些 。 直到八十年代中期 , 真正具有规模生产 或制备能力的装置和色谱柱才逐渐打开了市场出现了直径儿十厘米长度达 米的制备分离色 谱柱 , 用以分离多肤 、 蛋白质等高产值生物技术制品 。 同时 , 制备液相色谱的理论也 日趋完 善 。 伴随着生物 工程 路基工程安全技术交底工程项目施工成本控制工程量增项单年度零星工程技术标正投影法基本原理 的发展 , 制备高效液相色谱技术 以其高效和快速的特长 , 得到了越来越 广泛的应用 。 制备高效液相色谱 , 一般可 以按每次操作的样品上柱量来划分为半制备或小 规 模 制 备 镇 、制备 及大规模制备 三种类型〔 。 在以分析为 目的 的 高效液相色谱中 , 追求的是高效分离和高灵敏度检测 而在制备型高效液相色谱中 , 着重追 求的是 以最少的成本获取最大的利益 。 因此 , 在方法学上就有着与分析型不 同的考虑 。 当然 , 我们可 以用比例放大的办法 , 将分析分离的条件直接用到制备分离上 。 先在分析 柱 找列最佳分离条件 , 然后 , 在以相同填料 固定相 填充的直径更粗的柱子上 , 以相同 ‘。操作条件进行分离 。 此时 , 大、子上的上样歇 样品负载量 一 · 幼 · 这里 , 为分析柱的上柱量 , 、 分别为夯析型及制备柱的直径 内径 , , 、 分别为两 柱的长度 。 如果乙 一 正 , 则负载量仅仅与柱的直径之 比的平方成正比 〕。 举例起说 , 一般的标 准分析柱尺寸为功 , 负载量若是 的话 , 如希望达到每次上柱量 水 平 , 制 备 往的直径需 才行 。 考虑到分析型固定相昂贵的价格 、 流动相的消耗及操作 费 用 较 高等因素 , 这样的制备方式显然是不够经济的 。 为此 , 人们一般采用超载进样 , 即以大大超 过常规约 绿性色谱 方式进样 非绿性色谱 。虽然牺牲掉一部份分离效率 , 但仍可 以获得 相当纯度的分离 。 〕如果选择一个合理的程序 , 配合使用分析型及制备型色谱分离体系 , 就 可 以以最佳的性能 —价格比达到所希望的分离纯度 。 这方面成功的例子很多 , 较早的一个 事例是 以硅胶拄正相色谱分离 一和 一经基一 、 、 、 一四氢菲〔 〕。 直径 · 长 的 柱 于 内 , 填入 硅胶 , 进样量 。林 时 , 这一对异构体获得 良好分离 。 如果在同一柱子上超 载进样 , 虽然分离不 良 , 但仍可 以 以相当的收率 , 得到具一定纯度的两个异构体 的 纯 品 。 如果改用直径 , 长度 的制备柱 , 填入 “制备型硅胶 , 用以分 离 相 同 样品混和物 , 则色谱峰变得很难看 , 不过 , 我们仍能从收集的不同组份中 , 以近 肠的总回 收率 , 收集到 位和 位取代的异构体的纯品 , 其纯度可达 呱 。 以上所举的例子 , 都是洗脱展开模式的 。在制备色谱中还可 以利用顶替展开色谱 , 它也是一种非线性色谱 。 对制备分离来说 , 有时具 有特殊的优点 〕。 离子交换和亲和色谱更利于使用此种模式 。 固定相的类型 , 决定了色谱分离的机理 。 我们可以按分离机理将色谱方法分为正相 、 反 相 、 凝胶 、 离子交换 、 疏水相互作用及亲和色谱等不同的种类 。 表 中着重列出了和生物技 术有关的上述各种色谱方法的分离原理及适用范围 。 各种色谱方法在蛋 白质 、 多肤等的制备 分离中的应用 , 可 以参阅有关综述〔 〔 〕。 不管哪一种分离型式 , 都离不开柱填料 介质 , 难怪有人把色谱柱比喻 为 的 心 脏 。 这里不拟详细讨论色谱中发生的分离过程 , 只想简单地把色谱柱分离效率的高低与填料 的粒度及粒度的均一性联系起来 。 即 , 对于某一种固定相而言 , 粒度小而均一 例 如 。人 卜、 林 则具有更好的分离性能 , 所填装的色谱柱具有更高的理论塔极数 。 如 “化 学 键 一 合 反相硅胶 , 有可能达到每米长度 万左右的高理论塔极数 。 当然 , 这种填料或予装柱的价格 很昂贵 , 一般用作分析分离之用 。 在制备高效液相色谱中 , 多是利用分离性能适 中而价格便 宜得多的制备型固定相 例如 , 直径 林至直径 幻 。 当然 , 在特殊 目的级 一 瓦用中 , 亦可用 分析型固定相去填装制备柱 , 但代价无疑要大得多了 。 目前 , 各主妥灼液相色谱仪供应厂家 或公司 , 多以予装柱形式提供各种高效液相色谱予装柱 。 这是因为 , 一方面 , 装住技术和技 巧往往对柱效产生很大的影响 另一方面 , 恐伯是出 自商业利益的考虑 。 仕选用分离柱时 , 可根据分离 目的与要求 , 参照各厂家的商 品目录去挑选 。 近年来 , 高效制备液相色谱仪的发展很快 , 各主要色谱仪器制造厂家几乎均发展 了自己的 制备型或制备分析两用型仪器 。 表 亚中列出了有代表性的厂家及其仪器的主要性能指 标〔 。 目前 , 各厂家生产的高效制备液相色谱仪 , 虽然各有其特点 , 但基本构成相差不多 。 一般 , 其输液体系均可达到每分钟一百毫升或数百毫升 毫克至克级进样量 , 甚至每分钟一升以上 克至公斤级进样量 前者可采用往复式柱塞泵或隔膜泵 , 而后者则 多 使 用 隔 膜 泵 。 除 的 外 , 输液压力一般均达到 公斤 平方厘米以上 。 仪器多配有紫外吸 收示差折光或电导式检测器 。 可配用内径儿厘米至几十厘米然色谱柱 , 以适应于不 同分离规 了模的需要 。 通常 , 都配有较好的电于控制系统或 电子计算机 , 操作相当方便 。 我国的制备型高效液相色谱研究 、 研制和应用虽然起步较晚 , 但也有了较扎实的基础 。 相信在不久的将来 , 制备型高效液相色谱技术定会在我国生物技术的研究与发展中 , 起到应 有的作用 。 表 各种液相色谱分离方法 色色谱分离方法法 分 离 原 理理 分离材料或基因因 流 动 相相 适 用 范 围围 正正 相相 极性 一非极性相互作用用 硅胶 、 氧化铝铝铝 精 细 化 工工 化化化化学键合硅胶胶胶 合 成 药 物物 一 , 一 反反 相相 疏 水 性 作 用用 化学键合硅胶胶 、 , 。 高高高高分子小球球 离离 子 交 换换 分子表面电荷密度差异异 弱阴 一 弱 阳阳 缓冲液 , 调 及 离离 核酸 、蛋白质 、氨基酸 ,, 一 强阴 一 子强度度 多刀太, 糖类类 强强强强阳 凝凝 胶胶 分 子 尺 寸 差 异异 亲水性凝胶胶 缓 冲 液液液液液液液液液液液液液液 一 一任比 , 一糖基 、、、 生 物 高 分 子子 、、、、 疏疏水相互作用用 弱疏水性相互作用用 一 一正丁基基 中 性 盐 溶 液液 蛋 白 质质 一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一苯 基基基基 亲亲 和和 生物学专一性相互作用用 硅 胶一醚 基基基基 化化化化学键合单克隆抗体 ,, 缓冲液 、 调 及离离 蛋白质 、 酶等等 酶酶酶酶抑制剂等等 子强度度度 化化化化学键合染料 制造广家或公荀 衰 商效翻奋液相色讼仅举倪 份飞赢爵自一鑫奋厂廿下一蒸 适配色谱柱仪器型号 立 全 积木化工业色谱 隔膜泵 内径 长 度 可梯度淋洗 内径 、 长度 弓 玉 高度 自动化 , 使用半硬胶坡料 内径 一 吸附柱 内径 凝胶柱 一 值溶剂 一 隔 膜 泵 内径 一一一一一 度一 一一一一 、 、 , 一 分析制备两用柱 塞泵 中 一中 参 考 文 献 · · 卜 厂 · · 一 一 · · · · 〔 〕 · · · · · 〕 · · · · · 〔 〕 · · · · “冲 · 〔 《 · 一 〕 一 〔幻 各公司 目录及技术资料