锡兰肉桂无水乙醇提取物的抑菌活性

锡兰肉桂无水乙醇提取物的抑菌活性 热带作物2011,32(2):293—296 ChineseJournalofTropicalCrops 锡兰肉桂无水乙醇提取物的抑菌活性 苟亚峰-,一,李志刚,,孙世伟,嗓利伟,刘爱勤1,2 1中国热带农业科学院香料饮料研究所,海南万宁571533 2国家重要热带作物工程技术研究中心.海南儋州571737 摘要采用菌丝生长速率法和组织测定法.测定锡兰肉桂无水乙醇提取物对胡椒瘟 病菌,香蕉枯萎病菌,芒果 炭疽病菌和芒果蒂腐病菌的抑菌活性以及20%锡兰肉桂微乳剂对胡椒瘟病的保 护作用.结果表明,锡兰肉桂无水 乙醇提取物对胡椒瘟病菌具有较好的抑菌活性.在浓度1.5mg/mL时抑菌率为 91.94%,EC5o为0.6875mg/mL;对 芒果炭疽病菌的抑菌率为63.75%.但对芒果蒂腐病菌无抑菌活性.20%锡兰肉桂微 乳剂对胡椒瘟病表现出较好 的保护效果.当稀释100倍和50倍时抑制率分别为72.79和78.91%. 关键词锡兰肉桂提取物:胡椒瘟病菌;抑菌活性;保护效果 中图分类号s482.2文献标识码A StudytheInhibitoryActivityofCinnamomum zeylanicumB1.EthanolExtraction GOUYafeng,2LIZhigang,SUNShiwei,SANGLiwei,LIUAiqin' 1ResearchInstituteof印iceandBeverageCrops,CATAS,WanningHainan571533 2StateEngineeringandTechnologyResearchCenterforImportant TropicalCrops.DanzhouHainan57l737 AbstratThearticlestudiedinhibitionactivityofCimmm~mumzeylanicumB1.ethanolextra ctionagainstPhytophthom capsici,Fusariumoxyspommf.sp.cubense,ColletotrichumgloeosporioidesandBotryodipl odiatheobromaebymyceliumgrowth ratemethodandinviva.TheresultsindicatedthatCinnamomumzeylanicumB1ethanolextra ctionhadgoodinhibitory activitytoPhytophthoracapsici.Attheconcentrationof1.5mg/mL,theinhibitoryratewere9 1.94%,EC5owas0.6875 mg/mL,63.75%toColletotrichumgloeosporioidesbut110inhibitoryeffecttoBotryodiplod iatheobromae.Theprotectiveefficacy of20%CinnamomumzeylanicumMEwas72.79%and78.91%respectivelyattheconcentrat ionof100xand50x. KeywordsCinnamomumzeylanicumB1.extraction;Phytophthoracapsici;Inhibitoryactiv ity;Protectiveefficacy doi10.39696.issn.1000—2561.2011.02.021 锡兰肉桂(CinnamomumzeylanicumB1.)为樟 科樟属植物,在中国广东,广西,海南和台湾均有 栽培.锡兰肉桂的桂皮是一种古老的香料.最初发 现在埃及木乃伊的尸体中,其树皮具有防腐,健 胃,抗癌,杀菌,杀虫,杀螨等多种活性.陈青【,-2] 等报道锡兰肉桂丙酮提取物对棉铃虫和皮氏叶螨具 有较强的毒杀作用.并分别对其体内多种解毒代谢 酶具有明显的抑制作用冯岗[3]等测定了锡兰肉桂 提取物对集中害螨的杀螨活性.表明锡兰肉桂叶乙 醇提取物对朱砂叶螨,皮氏叶螨,比哈小爪螨均有 毒杀作用EgbertoI4]等研究发现锡兰肉桂精油具有 广谱的抗菌活性.对供试曲霉属菌株A.niger.A. /l,~us和A.]hmigatus等生长具有较好的抑菌活性 但目前国内外有关锡兰肉桂提取物的抑菌活性报道 较少.为进一步深入了解锡兰肉桂提取物的抑菌活 性.本文以几种主要热带作物上典型病害胡椒瘟病 菌,香蕉枯萎病菌,芒果炭疽病菌和芒果蒂腐病菌 为供试病原菌.测定锡兰肉桂无水乙醇提取物的抑 菌活性及其微乳剂的防治效果.为锡兰肉桂杀菌剂 的开发应用提供理论依据. 1材料与方法 1.1材料 1.1.1供试病原茵胡椒瘟病菌fPhytophthora capsici)由中国热带农业科学院香料饮料研究所植 保中心提供:香蕉枯萎病菌(Fusariumoxysporumf sp.cbe)由中国热带农业科学院海口实验站提 供;芒果炭疽病菌(Collet0trichumgloeosporioides) 和芒果蒂腐病菌(Botryodiplodiatheobromae)由中国 热带农业科学院环境与植物保护研究所提供 1.1.2供试植物供试植物锡兰肉桂叶于2009年 10月采自中国热带农业科学院香料饮料研究所 收稿日期:2010—05—12修回13期:2010—09—20 基金项目:公益性行业科研专项(No.200903024—005),海南省自然科学基金项目 (No.309055)资助. 作者简介:苟亚峰,女,研究实习员,研究方向:植物源农药研究开发.通讯作者:刘爱 勤,E-mail:laq3680@163.tom. - 294-热带作物第32卷 1.2方法 1_2_1锡兰肉桂无水乙醇提取物的制备供试植 物样品的前处理和提取均参照冯俊涛等圈的方法.得 无水乙醇提取物浸膏,于冰箱中(0~4?)保存备用. 1.2.220%锡兰肉桂微乳剂的制备称取1.2.1中 制备的锡兰肉桂无水乙醇提取物2g.溶于2g无 水乙醇和甲醇的混合溶液中(无水乙醇:甲醇=2: 1),充分搅拌,然后加入乳化剂Tween一201g,搅 拌均匀后.在高剪切机的作用下.逐步加人自来水 5g,在常温搅拌一定时间后停止.静置,得20 锡兰肉桂微乳剂 1.2-3抑茵活性测定采用菌丝生长速率法[6-71 称取0.3g锡兰肉桂无水乙醇提取物浸膏,先用 1mL无水乙醇溶解.再用无菌蒸馏水稀释制成浓 度为15mg/mL和6mg/mL的无水乙醇提取物.培 养基融化并冷却至50?左右.将4mL不同浓度的 锡兰肉桂无水乙醇提取物分别与36mL/瓶的PDA 培养基混合.摇匀.迅速倒入3个直径为9cm的 培养皿中.待其凝固后.取菌落直径为0.6cm.培 养好的各供试病原菌的外层菌块放置于培养皿中 央,以加入等体积无水乙醇灭菌水的PDA培养平 板为对照.每个处理3个重复.接种后,在人工气 候培养箱(25,28?)下培养5d后.采用十字交叉 法分别测量菌落直径.求其平均值.按下式计算抑 菌率. 菌落直径=测量菌落直径平均值一0.6 抑菌率=麓×100% 1.2.4室内抑茵毒力(EC?)测定将1.2.3中筛选 出抑菌活性较好的病原菌作为供试病原菌,测定 锡兰肉桂无水乙醇提取物对其离体抑菌毒力.将 锡兰肉桂无水乙醇提取物分别稀释为2.0,1.5, 1.0,0.6,0_3mg/mL的浓度,按一定比例加人到融 化好的PDA培养基中.参照1.2.3的方法测定,每 处理重复3次.用最dx---乘法计算毒力回归方程及 抑制中浓度(EC?). 1.2.52O%锡兰肉桂微乳剂保护效果测定参照 冯俊涛[51方法进行.采摘健康,新鲜,叶龄相同的 胡椒嫩叶(直径不大于9cm).洗净放于吸水纸上 晾干;将20%锡兰肉桂微乳剂稀释为50倍和100 倍,对照药剂烯酰?吗啉WP配制为1000倍和 2000倍,以及不含有效成分的空白对照.共5个 处理.先于真叶上施药,晾干药液后,用昆虫针 在叶子正面等距离的位置刺伤.再用接种针将3 块直径为0.6cm的胡椒瘟病菌外层菌饼接在相应 刺伤处.每皿1片真叶.正面朝上放于培养皿 中,然后于人工气候培养箱(25,28oC)中培养, 5d后测量各处理的病斑生长直径.按下式计算保 护效果: 病斑生长直径=测量直径一0.6 抑制率=墼 ×100% 1.2.6数据分析用Micros0ftExcel软件进行整 理;经DPS统计软件进行多元分析;将菌丝生长 抑制率换成几率值(y),药剂浓度转换成以10为底 的对数值(),作毒力回归直线.求出毒力回归方 程(y=a+bx)和相关系数(r),计算抑制中浓度 (EC50). 2结果与分析 2.1锡兰肉桂无水乙醇提取物对供试病原菌的抑 菌活性 采用冷浸的方法制备锡兰肉桂无水乙醇提取物 浸膏的提取率为24.83%.从表l可见.不同浓度 的锡兰肉桂无水乙醇提取物对各供试病原菌菌丝生 长具有不同程度的抑菌活性当锡兰肉桂无水乙醇 提取物质量浓度为1.5mg干样/mL时.对胡椒瘟病 菌表现出较强的抑制活性.抑菌率91.94:对芒 果炭疽病菌也具有一定的抑菌活性.抑菌率为 63.75%:对香蕉枯萎病菌抑菌活性较差.仅为 41.03%:对芒果蒂腐病菌无抑制作用. 表1锡兰肉桂无水乙醇提取物对供试病原菌的抑菌率测定结果 说明:"一"表示提取物对芒果蒂腐病菌菌丝生长无抑菌活性;菌落直径指的是3次 重复的平均值;数字后字 母相同表示无显着差异.不同表示差异达显着水平.下同. 第2期苟亚峰等:锡兰肉桂无水乙醇提取物的抑茵活性一295— 2.2锡兰肉桂无水乙醇提取物对胡椒瘟病菌的室 内抑菌毒力 从表1可见.锡兰肉桂无水乙醇提取物对胡椒 瘟病菌表现出较强的抑菌活性.进一步测定不同浓 度的锡兰肉桂无水乙醇提取物对胡椒瘟病菌菌丝生 长的室内抑菌毒力(EC卯),结果见表2. 表2锡兰肉桂无水乙醇提取物对胡椒瘟病菌菌丝生长的室内抑菌毒力测定结果 2.320%锡兰肉桂微乳剂对胡椒瘟病的保护效果 结果表明.20%锡兰肉桂微乳剂对胡椒瘟病的 保护效果明显低于化学杀菌剂烯酰?吗啉WP.但 也表现出较强的保护效果.当20%锡兰肉桂微乳 剂稀释50倍和100倍时.防效分别为78.91%和 72.79%:对照药剂烯酰?吗啉WP稀释1000倍和 2000倍时防效分别为100%和91.96%,见表3. 表3锡兰肉桂无水乙醇提取物对胡椒瘟病的防效测定结果 3讨论 本研究结果表明.锡兰肉桂无水乙醇提取物对 胡椒瘟病菌具有较好的抑菌活性.抑菌率达 91.94%:对芒果炭疽病菌的抑菌活性一般,抑菌 率为63.75:对芒果蒂腐病菌无抑菌活性.有研 究发现肉桂丙酮提取物在20mg/mL的浓度下.对 芒果采后的2种病原菌的抑菌率可达100%.具有 较好的抑菌活性[81.这与本试验结果有相似之处. 由组织法试验结果表明.20%锡兰肉桂微乳剂的保 护效果低于化学药剂烯酰.吗啉WP.但治疗效果 有待进一步研究.由于该微乳剂为植物源杀菌剂, 对环境污染小.对作物靶标安全.不易产生抗药性 等优点,因此,具有进一步开发利用的潜能. 目前,有关锡兰肉桂杀虫,防腐,抗癌活性等 方面的研究很多.Jayapmkasha等研究表明锡兰肉 桂果实提取物可作为抗氧化剂和抗诱变剂应用于食 品生产中:FichitlOl等分别在离体和活体条件下测定 了锡兰肉桂叶精油的杀螨活性.发现在离体条件 下.当锡兰肉桂叶精油的浓度在0.16%10%时对 兔痒螨具有较好的杀螨活性.但对具体的杀螨活性 成分未见研究报道有报道锡兰肉桂中除了含有抗 PAF活性的丁香酚,大豆脑苷I,山奈酚等化合物 外,还有几种黄酮类化合物.由于生物碱类,萜 类,黄酮类,香豆素,木脂素,甾类及精油类等化 合物[1l1都是主要的植物源杀菌剂有效成分,因此, 锡兰肉桂中具体的抑菌活性成分还有待进一步研 究.活性成分的确定对该物质的杀菌机理具有重要 意义. 参考文献 【1]陈青,覃丽金,杨卫帆,等.锡兰肉桂丙酮提取物对棉铃虫的毒 力及其代谢酶活性的影响?l农药学,2004,6(1):l1一l5. 【2】陈青,杨卫帆,覃丽金,等.锡兰肉桂丙酮提取物对皮氏叶螨的 毒力及其代谢酶活性的影响?l中国生态农业,2005,13(4): 29—31. 【3】冯岗,张静,曲晓,等.锡兰肉桂的杀螨活性及有效成 分[J】.热带作物,2010,31(3):474—479. 【4】EgbertoSantosCOI3TIO,EdehrudesdeOliverira,EvandroLeite deSouza,eta1.EffetofCinnamonunZeylanicumBlume essentialoilonthegrowthandmorphogenesisofsome potentiallypathogenicAspergiUusspecies[J].BrazillianJournal ofMicrobiology,2008,39:91-97. 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