三聚氰胺的测定标准草案GCmsms（海淀所2）

三聚氰胺的测定标准草案GCmsms（海淀所2） ICS 中华人民共和国国家标准 GB/T XXXXX-200X 食品中三聚氰胺的测定 Determination of melamine in foods (征求意见稿) 200X-XX-XX 发布 200X-XX-XX实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会 前 言 本标准是首次发布的国家标准。 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出。 本标准由全国食品添加剂标准化技术委员会归口。 本标准的附录A和附录B为资料性附录 本标准起草单位:北京市海淀区产品质量监督检验所(国家食品质量安全监督检验中心)。 本标准主要起草人: 1 食品中三聚氰胺的测定 气相色谱-串联质谱法 1 范围 本方法规定了食品中三聚氰胺的测定方法——气相色谱-串联质谱法。 本标准适用于乳及乳制品、小麦粉、糕点、面包、饼干、生湿面制品、酱油、豆制品、植物蛋白饮料、植物蛋白制品等食品中三聚氰胺的测定。 本标准检出限1µg/kg。 2 规范 编程规范下载gsp规范下载钢格栅规范下载警徽规范下载建设厅规范下载 性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的 内容 财务内部控制制度的内容财务内部控制制度的内容人员招聘与配置的内容项目成本控制的内容消防安全演练内容 )或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T5009.1 食品卫生检验方法 理化部分 总则 GB/T6379.1 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第1部分:总则与定义 GB/T6379.2 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第2部分:确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 食品中三聚氰胺用无水甲醇提取，提取液净化后，氮气吹干，衍生化后，衍生产物用气相色谱-串联质谱仪测定，采用二级离子监测扫描模式(MRM)，用化合物的保留时间和质谱碎片的丰度比定性，标准样品外标法定量。 4 试剂 除非另有说明，在分析中所使用试剂均为分析纯，用水为二次去离子水或相当纯度的水。 4.1 无水甲醇。 4.2 海砂。 4.3 吡啶。 2 4.4 衍生化试剂:甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)+1%三甲基硅烷(TMCS)，色谱纯。 4.4 三聚氰胺标准品:纯度?99.9%。 4.5 三聚氰胺标准储备液:准确称取三聚氰胺标准品0.1 g(精确到0.0001 g)，转移至100 mL容量瓶中，用50%(v/v)甲醇水溶液定容至刻度，超声混匀。此溶液每毫升含三聚氰胺1 mg。贮存于4?冰箱中，有效期1年。 胺标准使用液:准确吸取三聚氰胺标准储备液1.0mL至100 mL容量瓶中，用4.6 三聚氰 50%(v/v)甲醇溶液定容至100 mL，充分混匀。此溶液每毫升含三聚氰胺10μg。贮存于4?冰箱中，有效期3个月。 5 仪器 5.1 气相色谱-串联质谱仪(GC-MS-MS)。 5.2 分析天平:感量0.01g和0.0001g。 5.3 高速万能粉碎机。 5.4 旋涡混合器。 5.5 超声清洗器 5.6 高速冷冻离心机。 5.7 氮吹仪。 .8 烘箱 5 6 分析步骤 6.1 提取和净化 6.1.1 固体样品 6.1.1.1 干粉状固体样品:试样充分混匀。准确称取混匀试样0.5g，加入5.00mL无水甲醇，涡旋混匀2min后超声提取15 min，于4?以8000rpm速率离心10min，取上清液200µL用0.45µm有机滤膜过滤，氮气吹干，依次加入200µL吡啶和200µL衍生化试剂混匀后，于70?烘箱衍生化30min。衍生化产物进气相色谱-串联质谱仪分析。 6.1.1.2 块状固体样品:试样用高速万能粉碎机粉碎。准确称取混匀试样0.5g，加入5.00mL无水甲醇，涡旋混匀2min后超声提取15 min，于4?以8000rpm速率离心10min，取上清液200µL用0.45µm有机滤膜过滤，氮气吹干，依次加入200µL吡啶和200µL衍生化试剂混匀后，于70?烘箱衍生化30min。衍生化产物进气相色谱-串联质谱仪分析。 6.1.1.3 奶油、干酪、生湿面制品等样品:试样用高速万能粉碎机粉碎。准确称取混匀试样0.5g(精确到0.01g)于研钵中，加适量的海砂(海砂与样品质量比约3?1到4?1)研磨成干粉状，加入5.00mL无水甲醇，涡旋混匀2min后超声提取15 min，于4?以8000rpm 3 速率离心10min，取上清液200µL用0.45µm有机滤膜过滤，氮气吹干，依次加入200µL吡啶和200µL衍生化试剂混匀后，于70?烘箱衍生化30min。衍生化产物进气相色谱-串联质谱仪分析。 6.1.2 液体样品 试样直接混匀。准确称取混匀液体试样1.0g(均精确到0.01g)，加入5.00mL无水甲醇， min后超声提取15 min，在4?下以8000rpm速率离心10min，取上清液200µL涡旋混匀2 用0.45µm有机滤膜过滤，氮气吹干，依次加入200µL吡啶和200µL衍生化试剂混匀后，于70?烘箱衍生化30min。衍生化产物进气相色谱-串联质谱仪分析。 6.2 测定 串联质谱参考条件 6.2.1 气相色谱- 色谱柱:VF-5石英毛细管色谱柱，30 m×0.25 mmi.d.×0.25 µm，或相当条件色谱柱; 载气: 高纯氦气,纯度?99.999,，恒流模式，流速1.3mL/min; 采用程序升温，柱初始温度75?，保持1min，以30?/min速率升温至220?，再以5?/min速率升温至270?，保持2min; 进样口温度:250?; 接口温度:250?; 进样量:1µL; 进样方式:不分流进样。 电离方式:电子轰击源(EI); 电离能量:70Ev; 离子源温度:220?; 四级杆温度:150?; 碰撞气:高纯氩气,纯度?99.999,; 碰撞气压力:1.8mTorr 溶剂延迟:5min; 扫描方式:采用反应离子监测模式(SRM)，选择母离子342，选择二级离子m/z 327，171，定量离子m/z 327。 6.2.2 定性确证 在4.2.1仪器条件下，试样待测液和三聚氰胺标准品的目标化合物在相同保留时间处(?0.5%)出现，并且对应二级质谱碎片离子的质荷比与标准品一致，各碎片离子的相对丰度比为m/z 327?171=100?25，试样当中目标化合物碎片离子丰度比与标准品相比其最大偏差小于等于15%，可定性确证目标分析物。三聚氰胺二级选择离子流图，见图1;二级离子质 4 谱图见图2。 1 三聚氰胺标准品的二级选择离子流图 图 图2 三聚氰胺标准品的二级离子质谱图 6.2.3 定量分析 分别准确吸取不同体积的三聚氰胺标准使用液，用氮气吹干，依次加入200µL吡啶和200µL衍生化试剂于70?烘箱衍生化30min，衍生化产物进气相色谱-串联质谱仪分析。衍生化产物浓度为0.0、0.01、1.0、100.0、10000.0 μg/L的三聚氰胺标准系列溶液。 在4.2.1仪器条件下，以三聚氰胺标准样品浓度为横坐标，以m/z 327 基峰峰面积为纵坐标，作线性回归方程，从标准曲线图中查出试样溶液中三聚氰胺相应含量。 7 计算 食品中三聚氰胺的含量(mg/kg)计算 公式 小学单位换算公式大全免费下载公式下载行测公式大全下载excel公式下载逻辑回归公式下载 见式(1): V，V2X,c，…………………………………………………………………(1) V，m1 式中: 5 X --- 食品中三聚氰胺的含量，单位为毫克每千克(mg/kg); c --- 从标准工作曲线上查出的试样溶液中三聚氰胺的浓度，单位为微克每升(µg/L); V --- 试样定容体积，单位为毫升(µL); V --- 试样定容后取样体积，单位为毫升(µL); 1 V --- 试样衍生化溶液总体积，单位为毫升(µL); 2 )。 m --- 试样的质量，单位为克(g 计算结果保留至小数点后第二位。 8 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。 6 附录A (资料性附录) 三聚氰胺标准样品溶液气相色谱图 Response_ 信号: 1,2-丙二醇-fid-2.D\FID1A.ch6400006200006000005800005600005400001,2-丙二醇52000050000048000010.1774600004400004200004000003800003600003400003200009.5010.0010.5011.0011.5012.00Time 图1 三聚氰胺标准样品溶液气相色谱图 7 丰度附录B TIC: 1,2-丙二醇100-ms.D\data.ms(资料性附录) 500000三聚氰胺选择离子流图和离子质谱图 450000 4000001，2-丙二醇 350000 30000010.224 250000 200000 150000 100000 50000 9.5010.0010.5011.0011.5012.00 时间--> 图2 三聚氰胺标准样品溶液选择离子流图 45100 HO50 OH 43312715615718413353750102030405060708090(mainlib) Propylene Glycol 图3 三聚氰胺离子质谱图 8