实用饲料补充结晶或包膜赖氨酸对草鱼生长、血清游离氨基酸和肌肉蛋白质合成率的影响

第 26卷第 3期 2002年 6月 水 产 学 报 JOURNALOF FISHERIES OFCHINA Vo1．26．NO．3 June．20o2 文章编号：1000—0615(2002)03—0252—07 实用饲料补充结晶或包膜赖氨酸对草鱼 生长、血清游离氨基酸和肌肉蛋白质合成率的影响 刘永坚 ， 田丽霞 ， 刘栋辉 ， 梁桂英 ， 赵小奎 ， 朱 选2， 阳会军2， 关国强2 (1．中山大学生命科学学院，广东 广州 510275；2．广东省畜牧研究所，广东 广州 510640) 摘要：研究设计 4种试验饲料(纯化饲料 、实用饲料以及分别补充结晶和包膜赖氨酸的两种实用饲料)。试验草 鱼放养在玻璃钢水族箱(10(Oa~×50cm×50cm)中，每箱放养 30尾(平均体重 7．27±0．5 g)，每种处理设 3个平行 组，饲养 9周。试验结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明，纯化饲料组的增重率和蛋白质合成率(Ks)明显高于 3组实用饲料(P<0．05)? 实用饲料补充包膜赖氨酸与不补充或补充结晶赖氨酸比较，增重率、蛋 白质效率、血清必需氨基酸平衡指数 (EAAP)和蛋白质合成率都得到改善。包膜赖氨酸 ．是补充饲料蛋白质的一种很好的途径。 关键词：草鱼；补充赖氨酸；蛋白质合成率 中图分类号：$963 文献标识码 ：A Influence of practical diet supplementation with free or coated lysine on the growth，plasma free amino acids and protein synthesis rates in the muscle of Ctenopharyngodon idellus LIU Yong—jian ，TIAN Li xia ，LIU Dong—hui ，LIANG Gui—ying ，ZHAO Xiao—kui Zhu Xuan ，Yang Hui．jun ，Guan Guo—qiang2 (1．School of Science，Zhongshan Uhbersity，Guangzhou 510275，Ch／na； 2．Institute ofAn／rnd Sc／ence，Guangzhou 510640，Ch／na) Abstract：Four experiment diets were designed (purified diet，practical diet and practical diet with lysine uncoated or coated )．Grass carp (mean weight of 7．27±0．5g)were fed separately in 12 fiberglass tanks (100cm×50cm ×50cm)with 30 fish per tank．Every experiment diet Was taken three repeats．The experiments lasted 9 weeks．Results indicated that grass carp fed with the purified diet showed a significantly higher growth ratio and protein synthesis rate(Ks)than fish fed with the practical diet(P<0．05)．Practical diet with coated lysine improved the growth rate，feed conversion，balance of essential amino acid in plasma(BEAAp)and protein synthesis rate(Ks )in comparison with diet with lysine uncoated or deficiency．Coated lysine，but not free lysine，proved to be a significan tly better way of dietary protein supplementation． Key words：Ctenopharyngodon idellus；lysine supplement；protein synthesis rate 收稿 Et期 ：2001．08．o2 资助项 目：广东省“九五”科技攻关项 目 作者简介：刘永坚(1956一 )，男，广东增城人，高级工程师，主要从事水生动物营养和饲料的研究=Tel：020—84110789，E．mail：ls59@ zsI1 edu．cn 维普资讯 http://www.cqvip.com 3期 刘永坚等 ：实用饲料补充结晶或包膜赖氨酸对草鱼生长 、血清游离氨基酸和肌肉蛋 白质合成率的影响 253 在水产饲料生产实践中，要求饲料氨基酸水平尽可能达到平衡。要满足这个要求 ，通常是通过饲料 原料之间的合理搭配或补充结晶氨基酸来达到。但是，前者往往要添加大量的动物蛋白源而导致成本 大大增加，而后者往往又达不到理想的使用效果，所以研究者们试图使用包膜氨基酸达到同样的目的， 并为此进行了大量的研究工作。作者也曾对草鱼饲料补充结晶和包膜赖氨酸的生物效应作了初步研 究 j，本文在此基础上作了进一步的深入研究，并与纯化饲料比较，对草鱼料中氨基酸水溶性 、氨基酸同 步吸收和肌肉蛋白质转换率等问题进行了探讨，这对于丰富鱼类营养研究内容和指导生产实践都有一 定作用。 1 材料与 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 1．1 试验饲料 试验饲料为 1组纯化饲料和 3组实用饲料，共4组(表 1)。饲料原料全部经粉碎，过4JD目筛，按表 1 饲料配方称重 ，均匀混合，挤压成直径 1．5mm的颗粒，置 一20~C冰箱备用。表 2为试验饲料个别必需氨 基酸与总必需氨基酸的比(A／E，实测值)，与纯化饲料比较，第 2组实用饲料赖氨酸的A／E值较低，3组 和4组通过补充赖氨酸后，赖氨酸的 A／E值有所提高。 表 1 试验饲料配方及组成(％干物质) Tab．1 Formulation and compasilion of experimental diets[g·(100g) dry diet] 注 ：结 晶赖 氨酸为味之素严品 ，赖氨酸实测值 为 79 O％；包 膜赖氨酸 自制 ，壁材为硬脂 酸，赖 氨酸含量为 30．O％。 Notes：Crystal lysine(79．O％)was produced by Weizhisu Co ltd．Coated lysme(30 O％)Was got in lab．and stearic acid Was used for clothing． 1．2 赖氨酸溶出率测定 4组试验饲料分别取 10g，置于 100mE水中 10min，期间每隔 2min搅动一次，取 10mE水溶液测定赖 氨酸等含量。本试验重复 3次。 1．3 饲养和管理 试验草鱼苗为当年培育，取 自本研究室实验场，平均体重 (7．27±0．5)g。试验鱼放养在室内循环 流水玻璃钢水族箱(100cm×50cm×50cm)中，每箱放 30尾，水源为曝气 自来水。 试验鱼适应环境 l周 维普资讯 http://www.cqvip.com 254 水 产 学 报 26卷 表 2 试验饲料的 A／E值 Tab．2 A／E ratio ofthe experimental diets 后，称重，开始投喂试验饲料 ，日投喂率为体重的3％～5％，每天于 9：00和 17：00投喂两次。每两周称 重 1次，调整投饲量。每天早上清除箱内粪便，并换水 1／3：饲养时间为9周。试验期间水温为(28．4± 0．8)oC，pH值为 7．64±0．3，溶解氧为(6．20-z-_0．6)rag·L～，氨氮为(0．03±0．0O4)mg·L～。 1．4 取样及样品制备 饲养结束后称鱼总重，每箱取 2尾鱼作全鱼样品，另取 2尾鱼的肌肉和肝胰脏作样品，其余的鱼禁 食 1天后，每箱取 2尾鱼于静脉窦取血，静置 2h，以 10 000r·rain 的转速离心 10rain，得到空腹血清样 品，置 一20℃冰箱待用：然后投喂饲料，在鱼摄食20min后清除残饵，分别在摄食后 1、3、5、7、12h从每箱 中取 2尾鱼采血，同样制得血清样品 饲料氨基酸含量和血清游离氨基酸含量采用 日立 &35—50氨基 酸分析仪，水分含量采用 105oC常压干燥法测定，凯氏定氮法测定蛋白质，索氏抽提法测定脂肪，550oC灼 烧法测定灰分：血清必需氨基酸平衡指数(BEAAp)按如下公式计算： BEAA = 丽 (1 公式中，n、b、 ⋯· 为摄食实用饲料血清必需氨基酸的A／E值， 、B、c⋯⋯l，为摄食纯化饲料血清必 需氨基酸的A／E值。 1．5 L一 H一苯丙氨酸示踪试验 水族箱的试验鱼用同样的饲料继续饲养 50d，体重为80～90g 每试验组取投喂后 2h的草鱼10尾， 用 MS一222麻醉，腹腔注射 L一 H一苯丙氨酸 10／~ci·(100g) 体重(标记苯丙氨酸用生理盐水稀释 10 倍，即0．1lnL·(100g) 体重)，注射后置 1L水中洗涤 0．5min，取 1InL水样测定放射活度。注射后 2min 和 45rain，将鱼处死。在 5rain内取背部肌肉 1g左右，用液氮冷冻，置 一20℃冰箱待用，每尾鱼取两个样 品： 将肌肉组织匀浆(1：1，w／v)，加3mL 2％(v／v)HCLO4溶液沉淀蛋白质 ，于2 800g下离心 15min，取上 清液测定放射活度，沉淀物用 96％乙醇洗涤两次，再用乙醚洗 1次：将沉淀物再溶于 10mL 0．3mol·L 的NaOH溶液中，于37℃恒温水浴 1h，用 2mL 20％HCLO4溶液沉淀溶于 NaOH中的蛋白质，离心后再用 5mL 2％HCLO 溶液洗两次．．将提纯后的蛋白质样品置于液闪瓶内，加入 2mL水解液 (浓甲酸 ：30％ H202=1：1)和 1滴辛醇，于60℃下水解直至变为清亮的液体，冷却后测定放射活度： 蛋白质合成率(Ks)按下式计算： Ks= (100／(t2一t1))X((SBt2一SBt1)／SA(t2一t1)) 维普资讯 http://www.cqvip.com 3期 刘永坚等 ：实用饲料补充结晶或包膜赖氨酸对草鱼生长 、血清游离氨基酸和肌肉蛋白质合成率的影响 255 SBh和 SBt1分别是注射后 2min(t1)和 45rain(h)以蛋白质结合的放射活度。sA(t2一t1)是注射后 2min 和 45min平均游离氨基酸的放射活度。 1．6 数据分析 数据分析采用 Duncan氏多重比较法 ，显著水平采用 0．05。 2 结果 试验鱼经 9周的饲养，成活率达 100％，增重率 、饲料系数、蛋白质效率和蛋白质合成率列于表3。 纯化饲料和实用饲料的增重率有显著差异，而实用饲料之间，补充包膜赖氨酸组显著高于不补充或 补充结晶赖氨酸组(P<0．05)。饲料系数 4个试验组之间以纯化饲料最低，其次为补充包膜赖氨酸组， 最高是不补充赖氨酸和补充结晶赖氨酸的两个实用饲料组，并有显著差异(P<0．05)。蛋白质效率实 用饲料 3个组之间以添加包膜赖氨酸组为好，但没有显著差异(P>0．05)。 表 3 纯化饲料及实用饲料补充结晶和包膜赖氨酸 对草鱼增重率、饲料系数、蛋白质效率、蛋白质合成率的影响 Tab．3 Influence of diet and practical diets containing free and coated lysine on weight gain(WG) feed conversion(FC)，pmte．m efficiency ration(PER)and protein-synthesis rate(PSR)of grass carp 注 ：l增罩率(％)=100．[末重(g)一始重(g)]／始重(g)；2．饲料系数 ：饲料摄人量(g)／净增重(g)；3．蛋白质效率：净增重 (g)／蛋白质摄人量(g)。同行数据后有不同字母者表示有显著性差异： Notes：1．WG(％)=100·ffmal wt(g)一initial wt(g)j／initial wt(g)；2 FC=diets intaked(g)／net wei曲t gain(g)；3 PER=net wei曲t gain(g)／protein inLaked(g) Within the same row。values with different superscripts ale significanfly different(P<0．05) 在本文中蛋白质合成率( )表示为草鱼摄食后 2h每 g肌肉组织 2～45rain内以蛋白质结合的放 射度与游离氨基酸的放射度的比值。纯化饲料 PSR值明显高于实用饲料组(P<0．05)。实用饲料组 间 值以添加包膜赖氨酸组为最高，但3个试验组之间没有显著差异(P>0．05)。 添加结晶和包膜赖氨酸制成颗粒试验饲料，取一定量饲料测定赖氨酸溶出率，其结果为添加结 晶赖氨酸组溶出率为(13．22±3．5)％，而添加包膜赖氨酸组溶出率为(4．81±0．8)％，两组比较溶出 率有明显差别。 试验结束后 ，分别在投喂前和投喂后 l、3、5、7和 12h测定血清游离氨基酸水平。结果见图 l～图 5。Val，Leu和 ne水平随时间的变化见图 l，实用饲料组有相同的变化规律，在投喂后 3h达到高峰 ， 纯化饲料组变化不大，Val和 ne在 7h达到高峰，Leu则在 3h达到最大。Phe，Trp和 Met的变化规律 见图2，Phe和 Met水平 4个试验组有相同的变化规律，3h达到高峰，Trp水平纯化饲料组 5h达到高 峰，实用饲料则在 3h。Thr水平变化规律如图3，实用饲料在 3h有最大峰，而纯化饲料则在 5h出现最 维普资讯 http://www.cqvip.com 256 水 产 学 报 26卷 喜 1。2 兰 8e 羹；4 — ◆一 组 1(group1) — ★一 组3(group3) — ■一 组2(group2) — *一 组4(group4) 时问／小时 time／h O l 3 5 7 l2 时间／小时 time／h 图 l 4个试验组血清游离 Val，Leu和 Ile水平随时问的变化 Fig．I Change in the level of plasma free Val，Leu and lie of grass carp at various time intervals after feeding the experimental diets (A)缬氨酸 vaJ；(B)亮氨酸 Leu；(c)异亮氰酸 Ⅱe — ◆-_组l(group1) —-_组2(group2) — 卜 组3(group3) —*-组4(group4) O l 3 5 7 12 时问／4,时 time／h E 呈 ● ＼ 图2 4个试验组血清游离 Phe，Trp和 Met水平随时问的变化 Fig．2 Change in the level of plasma free Phe，Trp and Met of gmss carp at various time intervals after feeding the experimental diets (A)脯氨酸 Phe；(B)色氨酸 Trp；(c) 氨酸 Met 大峰值。Lys，Arg和His水平变化规律见图 4，His水 平 4个试验组有相同的变化规律，且都在 3h达到高 峰 Lys和 Arg水平，实用饲料组在 1h出现高峰，纯 化饲料组则在3h出现高峰 必需氨基酸平衡指数(BEAAp)见表 4，本指数是 与纯化饲料比较的结果。10种 EAA 与纯化饲料 比 较，BEAAp值在 3个实用饲料组之间没有明显差异 取饲料中A／E值(表 2)与纯化饲料差异较大的 Lys 和 Met作比较，在 5～7h BEAAp指数在 3个实用饲 料组间有一定差异，添加包膜赖氨酸组为最高。 3 讨论 — ．_．组 l(group1) —-一 组2(group2) — ★一 组3(group3) —*一 组4(group4) 图 3 4个试验组血清游离 Trp水平随时间的变化 Fig．3 Ch ange in the level of plasma free Thp of grass carp at various time intervals after feeding the expe rimental diets 本研究表明，在实用饲料中补充包膜赖氨酸，可 以改善饲料效率，提高增重率。许多研究者也得到了相同的结果_4一一。究其原因，从本研究结果看，饲 料中赖氨酸的溶失是原因之一，这与其它的一些研究结果相同。Wilson等 6在又尾鲴，chhom 在范氏 对虾的试验中均观察到试验饲料中的结晶氨基酸溶失于水中而导致生长差。从本研究的血清游离氨基 酸水平随时间的变化可以看到，纯化饲料组多种必需氨基酸在 3～5h达到高峰，而实用饲料组往往在 l～3h已达到高峰，特别是补充结晶赖氨酸组，吸收不同步，可能是导致各试验组之问生长差别的另一原 因，这与 Cowey等 的观点是一致的。 7 6 5 4 3 2 l O 0 一一 一【_，一山0。 ．爿 ＼ 城球篮 2 O 8 6 4 2 O 0 一 一一 一山0。一I爿 ＼ 滔餐 维普资讯 http://www.cqvip.com 3期 刘永坚等：实用饲料补充结晶或包膜赖氨酸对草鱼生长 、血清游离氨基酸和肌肉蛋白质合成率的影响 257 — ◆一 组 l(group1) — ●一 组3(group3) l4 l2 l0 兰 8 6 4 2 0 — ■一 组2(group2) — *一 组4(group4) (A) 0 l 3 5 7 l2 时间／小时 time／h l4 l2 l0 8 6 4 2 0 0 l 3 5 7 l2 时N／d,时 time／h 0 2 ● ＼ 减 0 图 4 4个试验组血清游离 Lys，Arg和 His水平随时间的变化 Fig．4 Change in the level of plasma free Lys，Arg and His of grass carp at various thne intervals after feeding the experimental diets (A)赖氨酸 Lys；(B)精氨酸 Arg；(c)组氨酸 His 表 4 不同时间血清必需氨基酸平衡指数 Tab．4 BalaI雠 of essential alnilio acids in the plasma(BEAAp) l 3 5 7 l2 时N／,J,时 time／h — ◆一 组 l(group1) —■一 组2(group2) — — ●r一 140 120 100 茎 28 40 20 0 time／h l00 80 60 4O 20 0 0 l 3 5 7 l2 时间／小时 time／h 图 5 4个试验组血清游离总氨基酸和总必需氨基酸水平随时间的变化 Fig．5 Change in the level of plasma free total amino acids and essential amino of grass carp at various time intervals after feeding the experimental diets (A)总氨酸 TALk；(B)总必需氨基酸 TEAA 关于试验饲料的评价，除采用增重率、蛋白质效率、饲料系数、氨基酸溶出率之外，本研究还采用了 、A／E、BEAAp、Ks 4项指标 ，并归纳在表 5中。 指数与增重率的相关性，在不考虑补充单体氨基酸的情况下是密切的(R=0．98)。赖氨酸的 A／E值，纯化饲料 、实用饲料和添加结晶赖氨酸的纯化饲料 3组比较与增重率相关性不强(R=0．7)，而 纯化饲料 、实用饲料和添加包膜赖氨酸的纯化饲料比较与增重率密切相关(R=0．98)。 一一1山。。_【 ＼钲蜥霹 一一，TⅢ。。_【 ＼链1葶溪 一一、一兽。 ．3Ⅲ一＼钲避瓣 维普资讯 http://www.cqvip.com 258 水 产 学 报 26卷 表 5 试验饲料的评价 Tab．5 Evaluation of the experimental diets *以草鱼全卵蛋白作标准 *Grass carp egg protein was used as evaluation standard 本研究表明，10种必需氨基酸的 BEAAp指数，实用饲料达到纯化饲料的 95％以上，试验组之间没 有差别，但以限制性Lys和Met为BEAAp指数，与增重率有密切的相关性(R=0。99)。蛋白质合成率 Ks与增重率之间有密切的相关性(R=0。98)，但相对于其它评价指标而言，Ks更能体现增重的本质。 参考文献： ：1： Liu Y J，Liu D H，Tian L X，et al Effect offish food with coating and crystalline lysine on Ctenopharyng~h-ton iedll -J Jq Journal ofFisheries ofChina，1999．23(supp1．)：52—53 刘永坚，刘栋辉．田丽霞，等，草鱼饲料中结晶和包膜赖氨酸的生物效应 J 水产学报，1999， 23(增Fu)：52—53． Cao J M，Guan G Q，Zheng W H，et al Effect of different dietary levels of protein on lipid fatty acid composition of hepatopancreas in grass carp Ctenophar)ng~Jxm idell~ J — Acta Scientiarum Naturalium Universitatis Sunyatseni，1997，36(5)：64—68．：曹俊明，关国强，郑文晖、 等 例料蛋n质水平影响草鱼肝胰脏脂肪酸组成 J：．【{1_J】大学学报(自然科学版)，1997，36(5)：64一鸺．一 Huang Y T，Liu Y J The study of mineral requirement of grass carp 0 几7 )，z idell~s J：Acta Hydrobiologica Sinica，1989，13(2)： 1．'34— 151 一 黄耀桐，刘水 草鱼多种无机盐需要量研究：J： 水生生物学报，1989，13(2)：134—151： Takeshi M，Tos~o A．Effect of coating amino acids with casein supplemental to gelatin diet on plasma free amino acid of carp：J： Bull Sap Soc Sci Fish，1％12，48(5)：703—710． M de la Higuera．A Garz6n．Influence of temperature and dietary—protein supplementation with free or coated lysine on the fractional protein turnover rates in the white muscle of carp LJj Fish Physiology and Biochemistry．19O／d．18：85—95 Wil~n R P，Poe W E．Robinsin E H Leucme．i~leucine，valine and histidine requirements of fingerling channel catfish J：．J Nutr，1980， l10：627 Chhom L Effect of dietary pH on anaino acid utilization by sh血np — A 一 ． Advance of the studies on nutritionof finfish and shellfish：M：． Guangzhou：Zhongshan University Publishing House．1995 287—300 ． Cowey C B，Luques P Physiological basis of protein requirement of fishes Critical analysis of requirements：A： Protein metabolism and nutrition Vol I：INRA『M] 365—384． lc 维普资讯 http://www.cqvip.com