颅缝早闭症相关实验荧光定量PCR内参基因的选择的研究

颅缝早闭症相关实验荧光定量PCR内参基因的选择的研究 ,…,,】,，,,, , 山，，，…,， ,，， ,, , ,,, ,,(,,, ,兀，;【,,, ,,。,,,…,“,,?,;?, ,,,, (论著( ,(),:,,(,,,,，(,,,,(,,,,一,,,,(,,,,(,, ,,, 颅缝早闭症相关实验荧光定量 ,,,内参基因的选择研究 扬娴娴 ,,,,,穆雄铮 ,,,,,，,,,,, ,,,,,,,。,, ; ,。,;, , ,,,,,,,, , , ,,,,, , 【摘要】目的探讨用于颅缝早闭痛相天史验的荧光定量,;,的最佳内参垫斟、 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 直川与颅骨成?目、颅缝闭合相 关的,绀实验标本，分别为:,曲,;??;,?,,?,综台,,,小鼠颅缝组织、颅缝早闭患者体外培养颅缝原代细胞和体外培 养的小鼠,…,, ,,成骨细胞株、以常用的候选管家基口,,作为研究对象(利』, ,,,,,,软件对,, ？,;,结果进行比较 ,出,;?小鼠颅缝组掣,(;,,，,一,,,,,— 分析，以筛选出在小同组织细胞,，， 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 达最为稳定的符家基刚作为内参(结果 ;,,,为最佳组合:颅缝早闭症患者体外培养颅缝原代细胞，,,, ,,,,和,,,,,为最佳组合:体外培养的小鼠,,, ,, , ,,成骨细胞株(,,, ,,,,和;,,,为最佧组合。，选择,,『,『司内参基,冈刮,的基网,,,,,(，,,,的结果影响显菩。结论礼,设 计,?,,,?,,,实验之前(应针对所选择的标奉类型与种类进行管家基因稳定性分析，以增加结果的可信度(( 【关键词】颅缝甲闭症荧光定量聚合酶链反应,,,?分析 ,,,,—,,,,(,叭,),,—,,,,一,, 【中图分类号】,,,,【文献标识码】,【文章编号】 ,,,,咖;, ,,,, ,,,,;,,, ,,, ,,—？,,, ,,,, ,,,,,商,, ,, ,,,,,,;,,, ,, ,,，,,,,,,惦蛔,, ??; ,?帆?，如舭 , ,,, ,,,舻佛,，佣加, ,,航,,,如,?,叩。,吐鼽帆曲,，?抽增,，,眦,毋，～,:;，,,, ,，肌,,,聊，,抽卿, ,,?，，，,,凹, ,,,,,, ;?咖?商?,，,??,, ;,,,弛,,,,,,,越(骊,,,～,棚越,,,,?々,,(,, ,,,,,;, ,,?,,，,,,,,崩, ,,,,，,,“,,文溉,,),,甜,,,,《,?,,;硼, ,,;,,,,”?, ,,,,,？(,,?,?,?, ,,,,，,,,,, ,,油?吣,;,,, ,《 胁,,;,删，舶?曲“,,,碑,(;，,眦;,肿,,,蒯昭,?，,,,吖,坩?,惮,粥陋一巩,,:?删,,,,,?』 ,, ,,, ,,,, ,,, ,,,,,,;,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,,,, ,,一,,;?,,,,, ,,,, ,洲,, ,,,(啪,,,,,,，,,(),诂,,,,,,忸,,, ,,,,;【,,,,,, ,, ,, ?,“川)邢,,,?,,?,,;,, ,,,州,,,,。,,,,,,,,,,,。,,。,, ,,,。,,,,, ,,，,?，,,,。,,,,, ,,,, ;,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,;, ,?, ,,,,,, ,,, ,,,,,, ,,,圳…, ,—,,(„,,?”，,(川,,，;,, ,，;,,,, ,,, ;,,?, ,, ,, ,,,,,,,,,,;,,, ,兀,,,, ,,, , ,,, ;,,,, ,,,，,,, ,,, ;,,,,,,,删，,,,, ,龇，,,,,，,,, ,,,,,,,, ,,,,,?】, ,,,,?,,,?,,;什”,,,, ,, ,, ,,,,,】,,,,，,,, ,,,，,川, ,,,?,,,,(，?【，,,“川…?,“,?(,„,?,,…,,,, ,?,【,, ,,,?,;,,;,盯,】,,】,,。,,,,,,,,，,,, ,,, ,,,,,;,,(。,, ,,,, ,, ,,,,，，硌,,, ,, ,, ,,, ,, ,】, 万方数据 澳大利哑颅颁山外科中 心，,德茉德圭,女儿章健康研究,,心(,(,【,,, ,,，,,,,,,…, ,“,,? , ,,，,, , ,,,?,(,,卅, ,,,,,,):,,,,,, ,海『“ 复旦大学仄,?? 表达谱的高通量、高精度的方法(在生物学研究巾已 实时院附属华山医院整肜外科,穆雄铮) 荧光得到广泛应,,,,。采用稳定的内参基因对反应进行标 定量 准化，可以增加该方法的敏感度、可重复性和动态范 ,, 罔(理想的内参基因存所研究的组织、细胞和实验条 , —(,件下均恒定表达。管家基因是维持细胞最低限度功 ？, , ,能必不可少的基因(在所有类型细胞中都表达(是广 ,) 泛应州的内参基因，如,—,;,,,(肌动蛋白)、,,, 作为,, 检测 基冈 基金项目 国家自然 科学基金 (,,, ,,,, ,):上 海市科委 非政府叫困际合作碗 ,(,,,, ,,,,, ,,)作者单 位,, ,,, ，(海, ,“ ，潍变 通大学 医学院 附属第 儿人，,医院挚 复外科(杨婀 娴):阿德策 德,(,,, 纠【织,种,。,,刚,外科艇，基,,,,年,』,第,卷第,驯 女儿童医院动物实验中心) (甘油醛一,一磷酸脱氢酶)、,,,(微球蛋白)及 ,,,颅缝原代细胞取材来源于,名接受经颅径路颅 ,,,等“然而(很多研究表明(管家基冈在不『司组 缝早闭症手术的患者(预先均按照规定签署实验研 织、细胞以及不同条件下(表达量并非永远恒定，甚 究知情同意书(( 至差别很大(至今尚未发现在所有条件下均恒定表 ,,细胞株为小鼠骨髓基质来源的成骨 ,,,, 达的管家基冈,,。冈此(对特定基因表达研究中候 ,, 选管家基洲的表达稳定性进行评价(筛选?最为稳 前体细胞…,澳大利亚,, ,,,;,,,医学研究所惠赠)。 , ,方法 定的管家基渊作为内参(对于保证研究结果的真实 ,标本取材与分组 , , 口丁靠至关重要。目前已有不少相关的统计分析软件( ,,,,,;„””小鼠颅缝组织 ,(,(,(, 如,,,,,,、,,,, ,,,,,,、,,,,,,,,,,等用于内参基 因 ,曲,;,一“雄性,、鼠与,,,,,雌性，,、鼠配种繁 的筛选口,“( 目前(在颅骨成骨与颅缝闭合过程中基因表达 殖。子代中将出现野生型(,,，，“)或杂合子(,,,，，，,) ,种基因刊(提取鼠尾组织抽提基冈组,,,进行基 的研究方回(,,一?,,,分析并未根据所研究组织细 胞的种类或不同的实验条件而选择合适的内参摹 因型鉴定(并进行鼠耳标记。孕鼠经剖宫获取胎鼠， 闪(多数仍简单采用,—,;,,,或,,,,,作为州剀取实验用颅缝组织后(提取鼠尾组织进行基因型 参。 鉴定。按“,，,,,,全,,【,和组织,,,抽提试剂盒”进 本实验选择与颅骨成，目，、颅缝闭合相关的常用 行操作(,;,扩增突变基因外显子(引物序列为,,,, 的,组实验标本，分别为:,,,,,;一,”小鼠颅缝组织、 ,,,,(, ,—:,,,,,,,,,,,,,,, ,颅缝早闭患者体外培养颅缝原代细胞和体外培养的 ,和,,— ,,,,一, 小鼠,,,, ,, ,,,,,,:,?一,,,,,,,,,,,,,,, ,,,不,，,,一,?。,,,产 成 骨 细 胞 株 ( 以 常 用 的 候 选 管 冈作为研究对象，利用辨,,,,软什对,,,—？,;,物琼脂糖凝胶电泳分析(根据野生型出现,,, ,,条 家 结 基 带(杂合子出现,,, ,,突变等位基因条带，确定基 果进,,分析(以筛选…存不,百,组织细胞中表达最为 冈型( 稳定的管家基因作为内参。 选择胚胎第,, ,天、,,(,天以及,,;生后第,、 ,、,材料与方法 ,、,,天的,曲,;““小鼠，分别切取冠状缝、后额缝、 ,(, 末要试剂与仪器 欠状缝、人字缝复合组织和颅顶骨(颅缝复合组织包 ,,,,, ,,,、,,,,、青链霉素、,,,,,“, , 括颅缝问质、成骨缘及其下硬腑膜(切取颅缝时尽可 ,、 ,, 能留小于, ,,成骨缘)(分管标记置于, ,, ,,管 ,,,,(,,,,,—,,,,,;,公司，美困);,“,,,、,“,,,,;,,,,,” ?逆转录试剂盒、,,,、仅一,,,培养液、,, 中(一,,。,保存。选择不同天数、不同基因型、不同个 ,, ,,,,,(，,,,,,,,,公一,，美国):,, ,,,,,、×,,, ,,,, , ,,(,,,,,,, ,,,,,,,, ,,, ？,,,试 ,,,, ,,,,,,,,,,,公司，美卜,);,,, ,,, , ,(, ,颅缝早闭症患者体外培养颅缝原代细胞 体米源、小同颅缝来源的组织标本共,,个(表,)。 患者基因型分析检验是否存在,,,,,—,和 ,“，,,,,,,,公一,，美国);,,,,,剂盒(,,,, ,,,,,基冈突变?。颅缝组织经胶原酶消化、组织块体 ,,, ,,,,,,,,,,“, ,,,, ,,,,;,,,,试剂盒(,而,,, 外培养收集原代细胞,。选择不同颅缝来源、正常或 ,,,,,“ 公司(英困):其余,式剂均为分析纯、 早闭颅缝、不同传代数的细胞标本进行,,,,,,研 ,,,,,,, ,,,,,,基因扩增仪 ,,,,,, ,(,, 究(表,)( ,,,, ,(,(,(,体外培养小鼠,,,, ,,成骨细胞株 ,, ,,,,—,,,, ,;,仪(,,,,,,, ,,,,,,;,，,,,, ,,公司， 细胞置于,,,培养瓶(含,,,热灭活的,,,和 德国);高速台式离心机,,,,,(,,,,,,,,,公 司，德 ,,，,,,,青、链霉素的,—,,,培养液，,,。,恒?);,:,,,凝胶成像分析仪(,,,譬,,,公司，英同); , 温 混合气体(,,;,:、,,,,:)环境中培养，视细胞生长 ,,,,,,,超微量分光光度计,;,公司。美国); 解剖情况(每隔,,, ,换液一„次。、镜下观察(约,,,生长 娃微镜(,,,,;公司，香港):倒置相差屁微镜(,,(?融合时(细胞传代， , 成骨诱导(当细胞数为, ,,,(传代第,,代) 公一,(德国)。 时(移至,板,,,,培养，，,(次日加入成骨诱导液 ,(,实验动物与细胞 (?一,,,，,,,,,,，,, ,, ,一磷酸甘油，,,斗,;，,曲,,;—,,，雄性小鼠(美国华盛顿大学;,, ,, , ,,,,,教授惠赠)(,,,,,雌性小鼠(购自阿德 万方数据 莱德妇 家基因表达的变异平均值,、,值越小(代表基闪表 抗坏血酸，,,,，,,,,青、链霉素)培养，, ,换 液一达越稳定(,,, ,视为稳定内参基冈的典型阈值?叫: 次(诱导培养,, ,(收集细胞进行茜素红(,,,,,,,，, ,确定,,,,,作校准的最佳管家基口、,数日(软件建议,如,, ,,,)钙结节染色:细胞经,,,乙醇固定后，加入 , 为选择阈值,,、 ,(,,,,,,,,, ,,溶液染色,, ,,,(水 ,, 洗(室温下 ,(, , ,,,;,的摹,表达水平与所选内参基埘的相关 十燥(染色后细胞加入乙酸:甲醇(,:,)脱染色,,,,,， 性研究 提取的染料由分光光度仪,,,,定量分析((分别收 ,,,,,?一小鼠颅缝组织实验中(选择,,,生后第 ,)与非诱导细 集诱导(诱导后,、, ,、,,(,,和,, , ,、,、,、,,天的野生型和突变型小鼠各,只，分别取 胞(培养, ,、, ,、, ,、,, ,和,, ,)进行,,, ,,,分材获得冠状缝标本共,,个(进行,,—？,,,实验， 析。 检测成骨标志骨钙素(,;)和碱性磷酸酶(,,，，)的 ,,,,抽提与逆转录 , , 置于同一,,管中进行抽提以增加,,, 颅缝组织与细胞标本按,兀,,,法抽提总,, 产量。 ,( ,,,,,,,,,、,,琼脂糖凝胶电泳进行,,,纯 加入糖原充分混匀其沉淀(应用,,?, ,,,,蒸度及浓 馏 度测定。 水,,?促溶,, ,,,获得,,,标本:胚胎颅 缝标本 极小(将相同基冈型、,只小鼠的同一颅缝来源标本 表达水平。,,(,,,,,,,:,?一,,,,,,,,,,,,,,, ,，,,,,,,,:, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,? ,?,,一,?。 ,, ,;,反应前行目的基冈拶增效率检测(即 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 曲线 ,(,,,,,,,:, ,一,,,„,,,,,,,,,,(;,(:,,,一, ,,,,一建立(,,,增效率庵满足,,,,?,,要求。分别选择 , ,:,,,，,,,,,,,:,?一,,,,,,,,,,,,,,,,,,,分析所得的针对本类标本?单个最稳定管 ,,,,,,,一 家基斟，?最稳定基因组合以及?最不稳定基因进 分别取,,,曲,;;一姗“小鼠颅缝组织,,,、 , , , 行结果分析，采用？,,,,,，(,,软件…，可同时选多个 ,,细胞 ,,,, ,,,,人颅缝细胞,?,和, ,, , “, 内参荩冈(并考虑每一反应的扩增效率进行结果校对。 ,,,( 采用,,,,,,;,,,,删?,,,,,—,,,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,,试剂盒,, ,,体系进行逆转录反应。 ,结果 ,出,;;?,一小鼠颅缝组织;,,,经不含,,, ,,候选管家基凶选择 ,,, ,,,,瑚,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,; ,,,,,,,,,的高压水,:,比例稀释(人颅缝细胞;,,, ,: ,,,,试剂盒 , 针对小鼠或人不同种类(各提供,,个管家基因作为 黼释(,,,, ,, ,,细胞;,,, ,:,,稀释。所有 反应均 候选内参。两种试剂盒中所含候选基冈基本一致(仅 设定相应,,—,,阴性对照(即逆转录反应中，由高 小鼠试剂盒中;,,,和,,;基冈(表,)(在人试剂盒 压水替代,,,,,,;,,,,?逆转录酶)。 , ,,,,,,分析 中替换为,,,,,和,,,,基因(表,)。 ,针对不同的标本类型( 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 三组单独的,,,,? 本文验选择与颅骨成骨、颅缝闭合相关的常,,,, ,,,,,— 分析实验，分别采用小鼠或人,,,,, ,组实骑标本，分别为:?;,,,,,综合征,,,,,;。“” ,,, ,,,,;,,,,试剂盒(提供候选内参基,,,,,,, ,,小鼠颅缝组织:?颅缝时闭症患者体外培养颅缝原 因 ,, ,,, ,,,扩增引物,。,,—？,,,反应采用,,,, , ,, 代细胞:?小鼠,,,, ,,成骨细胞株。经 体外成 ,,,试剂盒，,,?, ？,,,反应体系,,,, ？骨诱导培养,, ,(茜素红钙结节染色验让细胞是台 ,;, 包含 , ,上, ,×,,,, ,,,,,,，,(,?,基因特异性,,× 存在成骨矿化。结果显示(细胞在诱导培养,周后 ,,, 引物，,(,,?, ;,,,和,(,,?,高压水。在,,,,(,, ,、,, ,)，与非诱导培养细胞或第,天细胞相 卜 ,,,仪上进行,;,反应(反,,,, ,,,, ,,,,比(矿化显著增加(尸,, ,,(图,)( —,,,, 应 , ,, , , ,,;， 程序按?,,。; ,,,，(多,,?, ,,;，(萤,,。; ,,,与？,;,质量控制 同到步骤?，共,,个循环。 检测实验标本,,,纯度与浓度(表,)。严格选 每一个,,,标本均设,复,,(每板,择凝胶电泳中含清晰,,,与,,,核糖体两条条带的 ,,反 ,,,标本进行,,—,,,,反应(,;,扩增效率均 应均设定空白对照(,,;,)(反应结束后通过熔解 在 曲 ,,,,?,,范围内，、通过熔解曲线分析、凝胶电泳以 线分析、凝胶电泳以及测序等鉴定产物的特异性。采州 及测序等攀定产物的特异性。此外(通过阁值设定对 ,,,,?, ,,(,软件进行候选管家基闻稳定性分 每一标本的,个副,,原始;,值进行挑选(排除,,),(, …。 析 标本组:排除,,,,基因组,,,污染的,沪,,标本(通过该软件计算,每个管家基因的表达稳定值,( 以及每个管家基网的表达相对于其他每一个待测管 万方数据 组,,,料与萌建外利杂志,,,,年, , ,第,卷第,期 为最稳定管家基因(,,, ,,,,为最不稳定基冈， ,;,,,,,程序分析结果 , , 缝组织实验中(随颅骨发育、颅缝闭合，二者表达水平 从,,,,:?,,,,,,(“,,,,(,?,,,(,?帅,，,,,,,,,网站 逐渐增加,”,…。,,,,,,分析结果显示:,,;,或,,下载,,,。,,程序(对各个管家皋冈的表达稳定性 ,,, 进行统计学分析(从而选择最合适的内参。根据,组 实验标本进行,,,;，,,分析。 结果显不，,,,,,;?:,，小鼠颅缝组织，,,;, 一 ,,,,,—;,,,为最佳组合(在分析数据时，推荐 选取 这,个管家基冈;,值的儿何平均值作为内参来对 目的基冈表达进行校止:颅缝早闭症患者体外培养 颅缝原代细胞，,,, ,,,,和,,,,,为最佳 组合:体 外培养的小鼠,,,, ,, ,,成骨细胞株(, , ,,,, , 和,,,,为最佳组合(图,、表,)。 ,(,选择不同内参基冈对目的基?,,—,,,, 的结 果影响显著 骨钙素(,;)由分化晚期的成骨细胞分泌，作为 成熟成骨细胞的功能标志物…】:碱性磷酸酶(,,,) 为成骨细胞分化的早期标志?。在,曲,;“”小鼠颅 (罔,;)(选择单个最稳定基凶或组合时，出生后第 ;,;，,—,,?,,—;,,,为软件推荐的最稳定基,组合。 ,,天的,;表达水平硅著增加(为卅生后第,天的 分别选择?;,(,,、?,,, ,,,,、?;,;,一;,,,,卜 ,,倍(若选择最不稳定基因(则表达水平仅增加达 ,,,,组合作为内参基凼(对日的基川,,,结果进 ,,倍(反映出最不稳定基因对结果统计的显著影响 行校对，分析…生后第,，,，,，,,天,,和,,,的 (图,,)。,,,表达水平表现出相似的影响趋势(图 表达趋势(冈,)，当选择,,;,或,,;,一,,,,,—;,,, ,,—,、,):当选择,基冈组合时，出生后第,、,、,,天， 组合作为内参时，()(:的表达趋势基本一致(图,,、 突变型较野生型,,,表达显著增加。当选择,,, ,):相反(以,,, ,,,,进行校对时，,,,生后第,天 ,,,,(,,,突变型与野生型仪出生后第,天存在显 和第,,天的,,表达水平与前二者相比约下降,,, 著差异;选择;,;,，则二者无差异。 表,颅缝早闭患者体外培养颅缝原代细胞,,,,,,分析标本 表, ,,,,,;。,小鼠颅缝组织,,,,,,分析标本 ,,,,, ,,,椰,,,,,，,仲,趣,,, ,,,, ,,,,，,，,,, ,,,,,,,, ,璐,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,, , ,,,,,, ;,,,, ,,轴, ,,,,,,,,, ,?,,,,, ,,,,,,,(,,, , ,, , ,, ,?,,, ,, ,,,,,,,,(,, , , ?,,,,,,, ,?,,,,, ,, , ,,, ,, , ,,,,,,,, ,…, ,,,,蒯,, ,, ,,,,,,, ,, ,, ,,,?;, ,,,,, ,,, ,,…, ,?,, ,, ,, ,, 勰?鲫鬻淞, …阻,肿卜,,黑。焉船瓣黧裟盏焉 ,,?, ,《】, ;,, , ,, 表, 表, ,,,,,,分析试剂盒候选管家基因,人) ,,,,,,分析试剂盒候选管家基因(鼠) ,,,，, ,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,，,;,,,, ,,,,,,珊咖,,,,,,,,,,“, ,,,, ,,,,;,,,, ,,,?,,,,,,,, , , ,,,,,,) ;,,,,,,,, , ,,,,, ,, 基川名称 基闻样本 基因名称 基因样本 ,…,,,,,, ,…,,,,,, ,…,… (;一,… , ,—,?,(,一肌动蛋,) ,—,,,,(,一肌动蛋,) ,一,…,,】,,,(,一,微球蛋自) ,一,洲(帅,】,,,,(,一,微球蛋,,) 叶 ,,,„…,,,,,,。,,一,一,?,，,，,，?,,, ,, ,;,,,,,,?,。,，… , ,,,…,,,,,,,一,一,,,,,,,,, ,,,,,,,,;，,,,, ,甘油醛一,一磷酸脱氢酶, ,油醛一,磷酸脱氢酶) -8, ,,懈,,,,:,, ,,(磷脂酶,,) ,,唧,,,,,,,, ,,(磷脂酶,,) ,，,…川?，,,【,，,川, ,,,,(桉糖体蛋,,,, ,, ,妯 尉,,,,,,,),),,,, ,,,,(桉糖体蛋,,【，, , ，) ,”?, ,,(:,,,,(,,,,,,…,……(),,,…,，),,,， , ;,,,;,……,(细胞色素;一? (琥珀艘脱氢酶复台体哑基,) ,,(,,,,,,(,;,,,,,【,群,,…,,,,…,,】,,】，， ,,, ,,,,,,,,】,,,?,,核糖伟,,,) ,琥耳,酸脱氢酶复合体亚基,) ,,,…】,,; ,,,,,,,,,,(…,,,,,,,,, ,;,,, ,,, 讯舡 最, ,,, ,,,,,,,,】,,,(,,,榜糖体 ,,，) ,,】,…,】, ,,,,,,,,,…,,,,,,,,, ,,,，,, ,,, ,真核翻详氲始岗于,,,, ,,,) (真槌酣详起始嘲 ,,,,,,…,,,,,, ,,,,,,合酶亚基,, ,,, ,, ,,,,合酶瓶基,, ,, ,,,?,,,,,盯, ,,，,,,，, ,(剪接喇子,一亚基 ,肌洲,,, ,(泛索(:) 锯?。 ,,, ,,,,,…,,,,, ,(,,,拓扑异构酶;,】…,,(钙联结崔, ,? 瓣州,薹蹴黧筹‰ 一,) 万方数据 抖 ,,,质量与产量 表, ,,,,, ,,, ？,,,,,, ,,, ？,,,,,,, , 一,,,,寸,?,„，?,,;,，一《 ,,;,,?,小…… ,,,, 图, ,,细胞茜素红矿化染色检测 ,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,, ,，酗,, , ，,,,;,,,, ,, ;,,,, ,,, ,, , 尊尊,毋霉尊霉誉?? , 窖 毒 毋? 零 霉 ? ? ? , , , ,叠鼗霉誉。 颅缝早闭症相关实验管家基因稳定性,,,,,,分析 图, ,,,,,,,,,,“, ,,?,,,,,川,, ,, ;,,,,,,,,,,,,,,,—,,,,,, ,,,,,,,,,,,(, ,,,,,,, ,,, ,,, ,,,,,, ;,，, ,,，岫, ,,蜘,, ,, ,,,,,,,,,,璐,,, ,,,,,, ,,,,,,,, ,,, 表,非,,,,分析总结 ,,,，, , ,,,,,,, ,, ,,,,咖舢,虹 ,芏术 内参基因稳定,生 ,,“,,,【…, ,,,?。,,…,,,,,,,, ;… 卟; ,,件,;…“小鼠颅缝组织 ,(,,,) ,,,】 ,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,叫,】 ;,;,，(:印,, ,,,】,, , ,郎, ,, , ,, (), , ,,, , , ,, ,, ,, 盯,,,?,,:,…, ,, ,,,,,, ,, ,？ , ,,, ,,,, ,,,,, 颅缝早闭症患者体外培养颅缝原代细胞 ,,,…,【…,,,, , ,, ,,,,, ,,,,, ,,?,，,,明,, ,,,,,, , ,,,, ,, , ,, , ,, ,,】,, ,, ,,, ,, ,, ,, , ，? ,, ,,(,, , ,, ,, , ,, , ,, (,，?,,、,,, ,,,，,,,,,,;】,, ,,,,,,,,，,, (:,,，,，, ,,,】,, 体外培养的小鼠,吣一,,,,成目细胞 ,,,, 株,,,,,,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,,, ,,,,,,, ,,,, ,, ,, ;,,】, ,,,, 体外培养的小鼠,“,, ,,,,成骨细,,, ,,、，,,,,,( ,(?,, ,…，,,,,, ,,,,(:,,【,, ,，),,,, , ,,(, 胞株 , ,, ,, ,,, , ,, , ,, , ,, ,,, , ,,, ,,已诱导),,,,?,,,(,? , ,,,, 体外培养的小鼠,,,, ,,】,成目细,… ,,, ,,,,,,,,,(】,, ,,,,;(,,,,,,,,，) ,,,,, , ,,,,,,, 胞株 , ,, , ,, ,】, , ,, , ,, , ,, ,, ,, ,,, ,,,,,,;,, ;,,束诱导),一,, ,, ,,,,, 使用一个内参基因在,,,的样品中导致了,倍的 ,讨论 表达误差(在,,,的样品中误差甚至达到,(,倍，冈 实时定量荧光,,,研究中内参基冈的选择是 此(在利用定量,;,进行基冈表达分析之前(首先 一个极其重要的环节(内参基因选择是否恰当将对 要根据特定的实验材料和实验条件选择合适的管家 分析结果带来很大的影响。证据表明，若在任何情况 基因作为内参基因(用于筛选最适管家基因的软件相 下都不加选择地使用单一的内参基因(将会给实验 继推出，如,,,,,,,、,,,, ,,,,,,和,,,,,,,,,,等叫,。带来很大的误差。,,,,,,,,,,,,等目研究认为，单 独 万方数据 ,,,,,,,是?款用来从多个管家基因中选果校对(缺乏”,信度(将使实验存在较大误筹?,， 择最 参考文献 适合特定实验材料和反应条什内参基,的统汁学分 析软件(陔软件能够计算…每个管家荩岗的表达稳 ,,,,,,，,, ,，,, ,,,，,,,，„？ ,,,，,，，【，,;,【】,…,，,,,、, ,,?,,,,,,—,,,…,,,,, ， , , 定俯,(以及每个管家基岗的表达干?刈,其他每一 ;，,,,,, ,(,),(,,,,, ,,,一,,, 个待测管家基闭表达的变异平均值,。,仳越低(管 ,,?，,圳,,畔, ,，,),,?,，;, ,(,,,,,, , ,,出,…,,…?,,,,髓?,, ,,， 家基因的表达越稳定，在有些情况下(…于实验条件 ,,, ,, ,,, 及实验材料复杂，,,能无法找…非常稳定表达的啦 ，“,,,,,,,,,, 个管家基因(或因对表达定量的精确度要求很高(或 ，,,(,?,(,,,,,, ,(,州,“ ,，, ,, ,, ;,,,,,,,, ,，)，幽,…, ,… 『,, ,,,, ,…, , ？,,,…,【,灿,,】一，,,, ,;,…,,州,,, ,,,,,,, ,,, 冈存检测一些表达量变化不太显著的目的荩?时( (:,,,,,,?,,(】, ,,,,,,:,,,—,,, 使,,,,坼个管家基岗不能符合实验的要求(此时需要 ,,, ;,,(,(,,,,,?, ,?，, ,(,】,,】,,,,, ,, ,, ,, , 利用多个管家基冈术共同作为内参基因进行校正， ,, 以尽量减少校正过程中的误筹，同时使,,,, ,个或『,,，?，, ,,,,, ,:, ,?,?,，，,,,, ,,, ,…,,,,,,?, ,,…, ,… ?，】,,,，,,,,,灿…,【,,,?，,,，,—,,, ,,,…,(,,, ，,,,,,…… , ,,;,,】,,(…,,,州,,?,,;,,母,;,?,,,, ,…珊,,,,,,,，“,,,,,, 个以上稳定表达的管家基川(来对目的基因的表达进 ,,),)…,】州?，?‰;卸;,, ,,，…【, , ;…,, ,,啦,,,，,,(,,): 行校正(已成为定量,,,研究巾的一个新的准则吧、 甲闭症荩冈表达的定量研究中(日前尚 各管家基罔的配对变肄度,值可以指导内参基冈 准 化未选择内参基因(多数随机选取传统,;,的数日选择(,,,,,,,,,,,,等?建议，当配埘变异指 ,、;,,,,度 标 或,,, ,,,,作为内参 本研究选取、 ,,,(,,时(则无需加入史多的管家基闪来进,， 了,组代表性 校 在 标本(分别选择不同种属,,,,,,试剂正(如,,,,,, ,,(表明只需选择,个内参基闪颅 盒来筛选合 作标缝 ,,,,—,,,, 适的内参基因、实验组,,,取材应尽量涵盖各种不 ,蹦:,,，,岫?, ,，,?,;, ;，,， ,, ,,【…,,,,,,—,,,,,, 【,, 同类型的标本(使选择?,的内参基凶更为符合实际 ,,, , ,,, 实验没计需求。例如:小鼠颅缝组织标本选择，包括 【,…,???…,,(),,(?,,,)【,,,,，,,,,，,,(旬:,,,—,】, 不同类型颅缝、颅缝发育小同时期和不同基网型(野 ，，‰,,，,(),?, ,……,，,, ,, ，),舵,,,，,，?,?,,,?“ ,,， …?,?,,:,,……,?,,,?,, ,,『,,, ,,】,,„,,,，,,,,， 乍型或突变型)标本:人颅缝细胞标本选择包括来源 ,,?):,,,一,,, 于小『一,畸形患者的不同类型颅缝、不同传代数细胞: ,,,,,,,,, ,,，,,, ,,(,(, ,,“…,,(,(】,…,,(,,(;,, ,,(, ,,，,, 『引 ,,,【,,,,?,, ,, , ,(,,?，,,(，,(。,,…】, ,,,)，,,,(】,(),,,,(，…,(一,,,,，, 川,,…,,,,,,,?,…?…, ;,帅,(),(,,,,,,,,，,,(,):,,, ,,, ;(),,…, ,,，,，,曲,, ，, ,,,,…??;,(,【,】 ，,,,,?,(,??,?), 『,, ,…, ,,,,,,,,,,,, ,。,…,, ,, ,,，?,,,,】, ,,,„,,,，…, ,,,，… ?,。,…,…,…,一…,,…,”,,,,?…,?【,,，…,,，,,,,， ,,,,, ,,,一,,, ,】,, ,;?,,,,,, ,，,,,,,,(:，,, ,,。,。,(,, ,】？,,籼,,?,, ？,,,— ,,】,,,】,,,, ,,,;,,,,, ,,,，,?,„，, ,,,一…。？,,,,?,,,, ,;, ,,, , ;…,,, ,,,,，,,,,， ,,,,:,,, ,(),,, ,, , ,,(】(,,,…,(, ,),,,(,【,,,叭,??,,, ,,山,;,, ,, ,,,…, ,,,,, ,,,:, ,,,【,,, ;,(?,,…,,(,,?;…, ,,,, ,,;“，,,,】(,,, ,,,:,,,,—,,,, ,, ,(,, ,,,, ,,,,,;, … ,，),一,附,, ,((;,，，, ,)，,(),,】,】, ,,, ; , ,,细胞株标本选撵包括体外诱导与非诱导 ,,,】,,,,， ,, 【, 成骨两种条件下、不同诱导灭数的培养细胞。 ,, ,), ,【“,,【 ,(,,,,】,,?, , ,(，,, , ,, ,, ，,(?,【, ,),,,; ,,,,,，,【, ,,, ,,, ,，,,,,,,,,,,;【一, ,，,,,,),, ,，…, ,,,,,,】, ,,?,】,,,,…,,】,一 本寅验中,,,,,,,?,公司开发的？,,,,,, ,,分 (,??,,(吖,?,?,?,(,曲…, ,,?,,,，,,， ,,,，,,,,，,,,):,,,,,,， 析软件…基于传统,一??;,原弹(结合,,,,,分析 ,,,,,,,,,,,,,,, ,,，,,,…,【, ,; ，,,,,?, ,，,, ,】, ,,—,,— ,,,(，，,，『, ,,，,【,„，,】(), ,,,,,,】,,(),,,,,,, ,,, ,,，,…，,,,…,(,,，),,” 口,没定多个管家基测(软件自动将管家基因的几何 但是每一个单独,,,,,,分析所列,,, 平均值作为内参对目的基冈进行校对(同时结合每 与 的内参基因稳定性列表却完全不同(而且不同颅 一次,;,反应的扩增效率(获得目的基冈的最终棚 标本缝 对定量(节省了计算时间(分析结果也更为精确。 相,,,,,、,,,,和, ,, ,,, 关 ,在稳定性列表中的排有趣的是(虽然实验选取的,组代表性标本均 ( ，?,, ,【, ,,,】,(,,名存在较大的差异、上述结果提示(在设计,,— ,,,,,一】,,,, ？,;,实验之前，应针刘所选择的标本类型与种类( ， ,, ,【，，, ，，(,?,…, ,, ，,,,,(，,，, ，,(;, ,,,:,,】,,,，,?, ,,,，,,,, 姝, ,,,, ,,,,，,“…(,…,,,,…, ,?,,】一,】,,畔?, ,,,,,;,,，,,,, 进行管家基凶稳定性分析一其他学科的,,,研究;, ,;, ,,,(,,:,,,, 王 ,,, ,?,, ,,,,(，川,川。，,?,,(;, ,, ,,,,;，,?,,,, ,,,,,,,,…, ,，…?舻,,,胁雕…,,…】(, ,【,,(，，;, ,,?“, ,,,?,;“,“,,, „,…,曲?,, ,?,, , ,,,,,(，,,,?,，?,,, ;,,, ,…, ,—,;,,, „), ;，,…,,,?,,, ,,(，,?,,川，,,，(,,,,，,,(,),,,,—,,,, ,】,,(?,,,,,(,, ,，,,，,,,,,,, ,，,,“, ,,,,,;,,……, ,雎,,“ ,,, ,,，,?,,,，, ,,,,,【。舻,…,…,,…,,，, ,,?, ,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,, ,,,, , ,,,, ,,, ，,”,,,,,…,,,…,,,…,,,…,(,】【,,? ,,, , ,,,,,【 ,,,…【,,,( ?,,,,,,,—,,,,, ,】, ,，,,…,,，,,,,,, ,(,, ,, ,,】,,,,, ,, ,,, ,,??,。?, ,,呲。,??…,,(,,…, ,,,,?, ,,,,,;,,,】( ,,,,,):,,,—,,, ,,,, (), ,，,】一,，,”？,,【,，,，,，， ,, ,,, ,,,, ,, ,。,,,,;,,…,，。,,“,„, ,,日 收稿,『瑚,,，，年,门,,?:修?目,,，, ,,,,年 验证了这一观点(即未经过筛选的管家基因用于结 , ;“【,,， ,『】，; ,,(?，,;,,,『,,(:…? ,,,,,,(,,,,(,(,,: ,,，“,,, 万方数据 ,…一,,,, ,,,,【,,;,,,,, ,,(， ,,,,,”, ,, ,,叫„,帅,,;,,;。,…,“:,…;,,【,,…,,,,口,,(), …,，,‰，,,?叭,,,,， ,,,?，，,,,,(,,,(,), ,,)…,,。,,,” ,…, ,。,,;,(,，，,,„,;,【】,,,, ,。,,,,,, ;,,,,, ,,，”,】, ,,,,,,。,。，—,,;;,一，,,,;, ,,【 ,,，,,…,, ?,,,,。,,】,, ,,,