还原糖含量测定 DNS 还原糖含量测定

还原糖含量测定 DNS 还原糖含量测定还原糖含量测定 DNS 还原糖含量测定还原糖含量测定(砷钼酸比色法) 关键词: 还原糖含量测定砷钼酸比色法一、目的植物体内的还原糖主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。它们在植物体内的分布，不仅反映植物体内碳水化合物的运转情况，而且也是合成其它成分碳架来源和呼吸作用的基质。此外，水果、蔬菜中含糖量的多少，也是鉴定其品质的重要指标。其它碳水化合物，如淀粉、蔗糖等，经水解也生成还原糖。因此，测定还原糖的方法在研究植物体内生理生化变化和测定植物体内碳水化合物方面都是很重要的。二、原理还原糖是具有羰基(...

还原糖含量测定 DNS 还原糖含量测定还原糖含量测定(砷钼酸比色法) 关键词: 还原糖含量测定砷钼酸比色法一、目的植物体内的还原糖主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。它们在植物体内的分布，不仅反映植物体内碳水化合物的运转情况，而且也是合成其它成分碳架来源和呼吸作用的基质。此外，水果、蔬菜中含糖量的多少，也是鉴定其品质的重要指标。其它碳水化合物，如淀粉、蔗糖等，经水解也生成还原糖。因此，测定还原糖的方法在研究植物体内生理生化变化和测定植物体内碳水化合物方面都是很重要的。二、原理还原糖是具有羰基(>C=O)的糖，能将其它物质还原而其本身被氧化。 (1) 还原糖在碱性条件及有酒石酸钾钠存在下加热，可以定量地还原二价铜离子为一价铜离子，产生砖红色的氧化亚铜沉淀，其本身被氧化。具体反应如下: 1 (2)氧化亚铜在酸性条件下，可将钼酸铵还原，还原型的钼酸铵再与砷酸氢二钠起作用，生成一种蓝色复合砷钼蓝，其颜色深浅在一定范围内与还原糖的含量 (即被还原的 Cu2O 量)成正比，用标准葡萄糖与砷钼酸作用，比色后做标准，就可测得样品还原糖含量。三、实验材料、主要仪器和试剂实验材料、 1.实验材料实验材料苹果、面粉等。 2.主要仪器主要仪器 (1)分光光度计 (2)水浴锅 (3)具塞刻度试管:20mL×10 (4)刻度吸管:1 mL×1.2 mL×4.5 mL×3 (5)容量瓶:100 mL×2 (6)漏斗 (7)研钵 3.试剂试剂 (1)铜试剂: A、4%CuSO4?5H2O。 B、称取 24g 无水碳酸钠，用 850mL 水溶于大烧杯中，加入 2g 含 4 分子结晶水的酒石酸钾钠，待全溶(应加热)后加入碳酸氢钠 16g，再加入 120g 无水硫酸钠(加热)，全溶及冷却后加水至 900mL，沉淀 1-2d，取上清液(要求严格时过滤)备用。使用前将 A 与 B 按 1?9 混匀即可使用。 (2) 砷钼酸试剂: 25g 钼酸铵 (NH4)6Mo7O24?4H2O 溶于 450mL 蒸馏水中 (加，热 2 溶解，但温度接近 150?时易分解) 待冷却后再加入 21mL 浓 H2SO4 混匀。另将 3g 砷酸氢二钠(Na2HAsO4?7H2O)溶解于 25mL 蒸馏水中，然后加到钼酸铵溶液中，室温下放置于棕色瓶中可长期使用。 (3)200µg/mL 标准葡萄糖原液:准确称取分析纯葡萄糖 200mg，溶解定容到 1000mL。四、操作步骤 1.标准曲线的制作: 标准曲线的制作: 标准曲线的制作在一系列刻度试管中，分别加入 200µg/mL 标准葡萄糖 0、0.1、0.2、0.3、0.4、 0.5 及 0.6 mL，再顺序加入蒸馏水 2、1.9、1.8、1.7、1.6、1.5 及 1.4 mL，配成浓度分别为 0、10、20、30、40、50 及 60µg/mL 的系列葡萄糖溶液。每试管加入铜试剂 2mL，混匀后沸水浴中加热 10min，立即冷却，再加入 2mL 砷钼酸试剂，振荡两分钟后稀释到 20mL,用分光光度计在 620nm 波长下比色，测其光密度 OD620nm(做一式两份)。以糖浓度微克数为横坐标，光密度 OD620nm 为纵坐标，绘制标准曲线。 2.植物样品中还原糖的提取: 植物样品中还原糖的提取: 植物样品中还原糖的提取将样品洗净，吸干其表 3 面水分，切碎混匀，称取 1g 放入研钵中，加入约 0.5g 石英砂，磨成匀浆，加水将样品由玻璃漏斗冲入 100mL 容量瓶中，加水达 7080mL，摇匀后置于 80?恒温水浴上浸提 0.5h。待上述样品冷却后，沉淀蛋白质，加入 5%硫酸锌 5mL，再慢慢滴入 0.3mol/L Ba(OH)2 5mL，以沉淀蛋白质。振荡后静置，至上层出现清液后再加一滴 Ba(O H)2,直至无白色沉淀时，向容量瓶加水至刻度。 3.还原糖含量的测定: 还原糖含量的测定: 还原糖含量的测定过滤上述已定容的样品液，取 5mL 滤液，再定容到 100mL(此步视样品的含糖量而定)。取已稀释的溶液 2mL，与标准葡萄糖显色法相同:加铜试剂 2mL，煮沸 10min，加砷钼酸试剂 2mL，振荡 2mL，定容到 15ml，620nm 波长下比色，记下光密度 OD620nm(至少重复两次)。五，结果计算式中: G 从标准曲线上查得含糖量(µg) W 样品重(g) 百度搜索“就爱阅读”,专业资料 ,生活学习,尽在就爱阅读网 4 92to.com,您的在线图书馆 5

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