南京中医学院学报 19 9 1 年第 了卷第 2 期
· 实验研究 ·
安宫牛黄丸对脑水肿家兔脑内酶的影响
黄玉芳 郑样年 何原惠 衷铸人 指导 朱砚蕴 ‘ 申冬珠
南京中医学院 ‘ 苏州医学院
内容
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提要 以脑脊液 L D H 、Cp K 以及脑组化 L D H 、 s D H 、A TP 等酶的变化为主要观察指标 , 并结合
应用薄层色谱扫描仪对 sD H 活性进行定量测定 ,探讨安宫牛黄丸对家兔实验性脑水肿的影响 。 结果表
明 :该药能降低脑脊液及脑组化 L D H 活性 ;能使 sD H 、AT P 酶趋于增强 ,能减轻水肿脑组织含水量和伊
文思蓝蓝染的范围及程度 . 提示该药对脑组织的保护作用即可能是其开窍醒脑作用的原理之一 。
主题词 安宫牛黄丸 /药理学 脑脊液/ 药物作用
安宫牛黄丸是沿用已久的芳香开窍之代表方剂 , 具
有清心开窍 、苏醒神志 、清热解毒之功效 . 本实验用该药
对由百日咳杆菌所致脑水肿模型家兔进行治疗 , 从脑脊
液酶 、大脑组化酶变化等方面观察其对脑水肿影响的作
用机理 , 为安宫牛黄丸在治疗中枢神经系统疾病方面提
供实验依据 .
材料与方法
一 、健康大耳白兔 38 只 ,体重 2 . 7 弓士。. 3 6kg , 雌雄
兼用 , 随机分为三组 : 1 、单纯造型组 (简称造型组 ) , 2 、用
药造型组 (简称用药组 ) , 3 、对照组 .
安宫牛黄丸由天津达仁堂制药厂生产 , 批号 2 津
动y 一B 6 7 一 7 8 , 3 9 /丸 .
按我们介绍的方法制作脑水肿模型 [l] 。 用药组在造
型前半小时用胃管注入 由温水溶化的安宫牛黄丸混悬
液 1 。而 / k g (每 耐 含药 0 . 0 月g) , 另两组则由胃管注入温
水 lo m l/ kg 。 动物均于术前从右耳缘静脉注入 2 . 5 %伊
文思蓝 1而 / kg 。
二 、脑脊液乳酸脱氢酶 (L D H ) 、肌酸磷酸激酶 (cP K )
活性测定 :动物分别于实验前一天及处死前从小脑延髓
池抽取脑脊液 0 . 7耐 , 迅速离心 10 分钟 (2 5 oorp m ) , 如
标本有血则弃之 . 按安氏介绍的方法川用荧光分光光度
计 (R F一 520 型 )测定 c PK , 按比色法 [s] 用自动生化分析
仪 (刁022 一 10 型 )测定 L D H , 所测数据经统计学处理 。
三 、 动物于实验后 6 小时用空气栓塞法处死 , 开颅
迅速取出大 、小脑组织 , 用沪纸吸干表面液体 , 肉眼观
察 、
记录
混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载
标本肿胀 、蓝染的程度与范围 , 并作以下处理 :
·
9 2
·
1
. 于左右半球对称部位各取一块全层脑组织 , 分别
置于称量瓶中称湿重 , 然后放入电热干燥箱烤至恒重 ,
计算含水量 。
2
. 右侧大 、小脑组织各取一块 , 立即置于低温冰冻
切片机进行冷冻 , 连续切片 6 张 , 每片厚 6 一 7帅 , 用改
良 Pres to n 法 染 L D H , 用 N ac hl as 法 染虎 拍酸脱 氢酶
(S D H )[. 〕
, 用 、v留hs te in an M ies e 法 染 三 磷 酸腺 昔酶
(A , )
、
5一 核昔酸酶 (5 一 NT ) 。
LD H 按其在神经细胞及神经纤维内反应的颜色探
浅及反应顺粒粗细分四级评定 : O 级 : 无反应产物 , I
级 : 反应产物少 , 分布稀疏 , I 级 : 反应产物较多 , 弥散存
在 , 有时呈小 片块状聚集 , I 级 : 神经细胞或神经纤维
内充满融合成团的反应产物 , 甚至将核部分或全部遮
掩 。
SD H 染色切片除用显微镜检查外 , 又用双波长色谱
扫描仪 (cs 一 90 型 )进行扫描测定 . 扫描条件 :狭缝 l 丫 刁
(H x W )
, 光斑 0 . 刁m m 又 0 . 2 m m , 单波长 s oo n m , 透射法
线性扫描 , 漂移线设定值 0 . 3 , 其它参数用仪器原始给
定数 。 方法 :将染好切片固定于仪器样品台上 , 仔细调整
扫描光斑 , 使其位于欲测定的组织切片上方 , 调零后进
行扫描测定 。 将扫描测出的峰面积值除以扫描距离 , 得
出组织切片单位面积透光率 。
结 果
一 、脑脊液 L D H 、 CPK 含量 , 见表 1 。 三组之间实脸
前后 L D H 差数的均数比较 , 有显著性差异 , 造型组与另
二组相比也存在着显著性差异 。 三组之间实验前后 C p K 差数的均数比较 , 无显著性差异 .
表 1 三组脑脊液 LD H 、CPK 含t 比较
L D H (U / L) CP K (IU / L )
n
造型组 10
用药组 10
对照组 9
实验前 实验后 实验前 实验后
1
.
4 1 9士 0 . 5 2 4 5 . 2 0 9 士 2 . 9 9 8 * * 2 4 7 . 1 2士 2 3 3 . 8 8 4 5 5 . 9 8 士 2 5 7 . 8 0 *
1
.
5 6 5士 1 . 0 5 6
1
.
8 5 0士 1 . 02 3
2
.
9 8 3士 2 . 12 5 *
2
.
7 4 4士 1 . 7 3 6
1 0
1 0
3 45
.
4 0士 1 8 8 . 57 4 4 5 . 0 5士 2 2 7 . 0 6
1 4 5
.
2 3士 9 8 . 9 5 2 1 4 . 1 8士 1 1 1 . 3 1
注 : 各组实验前后均数 t 检脸 , 奋 奋 p < 0 . 01 , 白 p < 0 . O5( 均与对服组相 比 )
二 、脑组织含水量 , 见表 2 。
三组左右侧大脑含水量经方差分析显示存在着非
常显著差异 (P < 0 . 0 1 ) . 经对各组左右侧含水量两两比
较发现 :造型组左右侧含水量与其它各组均存在着非常
显著差异 (P < 0 . 0 1 ) , 用药组与对照组相比 , 除两者右侧
含水量存在显著性差异外 , 其余无显著性差异 。
表 3 各实验组脑内sD H 单位峰面积值
大脑 小脸
造型组 10
用药组 10
对照组 6
9 7 4 4 8土 3? 9 . 97 14 30 . 4 5土 3 54 . 8 1
15 1 2
.
26 士 309 . 9 0 9 2 1 25 . 8 4 士 , 16 . 6 7
157 5
.
0 8 土 4 8 4 . 49 6 1 8 2 7 . 2 3 士 5 7 6 . 2 0
表 2 各实验组大脑含水量比较 (写 )
右侧 左侧
造型组 10
用药组 11
对照组 9
8 1
.
8 1士 1 . 3 5 8 0 . 1 1士 0 . 9 5
79
.
0 4士 0 . 95 7 8 . 6 4士 0 . 7 9
7 7
.
8 4 士 0 . 7 7 7 8 . 0 5士 0 . 8 5
三 、脑组织酶学改变
l
、
L D H 酶反应主要定位于大 、小脑神经细胞浆内 。
造型组大多数神经细胞内酶原颗粒粗大、 密集 、深染显
示深蓝色 , 少数颗粒融合成团 , 将细胞核遮掩 , 多属 I ~
, 级 。 在部分造型组脑组织中 , 可见到在水肿严重区域
酶反应减弱 , 为 0 ~ I 级 。 用药组和对照组神经细胞内
酶原颗粒细小 , 分布均匀 , 着色浅 , 多属 I 级 , 少数 I 级 。
2
、
s D H 酶反应主要定位于大 、小脑皮层及神经细胞
浆内 , 为紫蓝色细小颖粒状 . 造型组可见到大脑皮层有
灶性酶反应减弱区 。 大小脑皮层与对照组相比 , 染色较
淡 , 小脑蒲氏细胞部分酶原颗粒减少 ,脱失 . 用药组 sD H
酶反应减弱区较少见 , 染色深浅与对照组相似 。
用薄层色谱扫描仪对 s D H 染色切片进行扫描 , 测
定并计算单位峰面积值 。 结果显示 :大脑组织内 sD H 在
三组间存在着非常显著差异 (P < 0 . 0 1 ) , 且造型组与对
照组 、用药组两两 比较均有非常显著差异 (p < 0 . 0 1 ) . 用
药组与对照组相比无显著性差异(p> 0 . 0 5 ) 。 小脑组织
内 s D H 在三组间无显著性差异 , 见表 3 。
3
、
A TP 酶反应主要定位于大脑小血管壁(包括毛细
血管壁 ) 。 造型组大脑皮层血管壁 A T P 酶反应明显减
弱 , 表现为血管壁染成淡棕黄色 , 而对照组与用药组大
多染成棕黑色 。
刁、 5 一N T 酶在大脑组织内反应均较微弱 , 各组之间
未见明显差异 .
四 、脑组织蓝染及肿胀 , 见表 刁。
表 ‘ 免左右侧大脑蓝染范围比较
范围 (度 ) 造型组右 左
用药组
右 左
2 10
, 9 一 一 一
合计 1 4 7 14 1
注 : 蓝染范围标准 : 蓝染范 围占大脑 半
球表面积 : < 1 /2 l 度 , < 2 / 3 1 度 , > 2/
3 百度
造型组及用药组右侧大脑均有蓝染 , 但两者范围明
显不同 , 前者多为 , 度 , 而后者均为 I 、 I 度 ;造型组左
侧大脑蓝染也多于用药组 。 蓝染范围越大 , 蓝染的程度
就越严重 , 造型组右侧大脑大多为深蓝色 , 而用药组大
多为浅蓝色 . 造型组大脑组织肿胀 、充血程度也较用药
组严重 。 对照组左右侧大脑无一蓝染 。
9 3
讨 论
安宫牛黄丸出自清代名医吴鞠通所著《温病条辨》.
近 2 00 年以来 , 该药被广泛应用于中西医临床 , 常起到
挽危救厄之功效[8. .] 。 药理研究也报道该药对中枢神经
系统有抑制作用 , 有抗惊厥 , 复苏 , 解热 , 消炎 , 耐缺氧等
功效「7一 ] 。
本实验采用百日咳杆菌右侧颈内动脉注射 , 使造型
兔脑组织含水量明显增加 , 脑组织出现蓝染及充血肿
胀 , 脑脊液切H 酶升高 , 脑组化酶变化等 ,都表明家兔
已形成了实验性脑水肿 。 本实验结果表明 : 安宫牛黄丸
有保护血脑屏障 , 减少毛细血管通透性 , 提高脑组织对
细菌毒素以及缺血缺氧的耐受性 , 从而达到对脑细胞的
保护作用 。 而这种保护作用即可能是安宫牛黄丸开窍醒
脑作用的原理之一
脑组织内的 sD H 、 LD H 、 A T p 等酶 , 均为细胞内重要
的酶 , 从不同角度反映脑组织代谢变化 。 L D H 参与糖酵
解过程一, 催化糖酵解的最终反应 , 使丙酮酸还原为乳酸 。
正常时脑组织内 L D H 活性较弱 , 只有当脑组织缺血缺
氧或细胞复损 , 从血中直接获取的能量不足时 , 由于代
偿机制 , 神经细胞内无氧酵解供能活动可能增加 。 因此
造型组大脑组化反应显示 LD H 活性明显增高 。 而当病
变进展 , 细胞膜通透性增 加 , 细胞内酶可外逸而 出现酶
扩散 ,并使脑脊液中 LD H 值也升高 。 而用药组由于细胞
受损较轻 , 故脑组化 、脑脊液 L D H 酶活性都较造型组为
低 . 但在造型 组严重水肿区 , 组化显示 LD H 、 sD H 灶性
酶活动减弱 。 这可能是由于水肿区神经细胞内外水份过
多 , 使血流量显著减少 , 组织严重缺血缺氧 , 使糖的氧
化 、酵解都降低 , A T P 耗竭 , 乳酸生成大大增加〔’”」, 致使
神经细胞代谢障碍而发生变性坏死并导致酶活性明显
减弱 。
本实验结果证明 :色谱扫描仪可使病理组化切片从
显微镜下定性判断转变为更为精确的定量测定 。 只要取
材 、切 片 、染色等步骤在各实验组都控制在基本一致 的
水平上 , 对组化切片进行色谱仪扫描是可行的 . 尽管这
工作还刚刚开始 , 还需进一步扩大应用 , 但已显示 了较
好的前景 。
脑血管 A即 酶活性在脑水肿形成时趋于减弱 , 提
示血管内皮细胞受细菌毒素影响而发生代谢障碍 , 细胞
膜钠钾泵功能受到影响 , 造成细胞肿胀 、缺氧 、变性 , 使
血管通透性增加 ,致使酶活性减弱 [ll 〕。 用药组酶活性影
响较小 , 更进一步
说明
关于失联党员情况说明岗位说明总经理岗位说明书会计岗位说明书行政主管岗位说明书
安宫牛黄丸对神经组织保护作用
的机理所在 。
由于神经系统功能复杂 , 代谢迅速 , 给研究工作带
来一定难度 。 能客观的定量评价脑损伤方法较少 。 文献
报导应用脑脊液酶学检查来诊断神经系统病变 , 认为脑
脊液 LD H 、C p K 是敏感指标 。如该酶活性极度升高 , 且持
续时间较长 , 结合临床表现 , 能提示脑损伤严重 , 病人予
后不良〔’2 」。 本实验造型组脑脊液 L D H 、 CPK 明显升高 ,
也表明应用脑脊液酶学以及脑组化醛反应来研究 、诊断
中枢神经系统某些病变是较为可靠和敏感的方法之一 。
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9 4
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R he i o n A r te r io s ele ro sis a n d H ePa tie In ju ry
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(o r 讼in al a r ti e le o n Pa g e 1 0 3 )
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1 2 8
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